毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒及制备方法、检测方法

本发明涉及法庭科学毒物分析领域，具体地讲，涉及毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒及制备方法、检测方法。

背景技术：

1、冰毒主要成分为甲基苯丙胺，是最常见的苯丙胺类毒品，也是21世纪全球范围内滥用最为广泛的毒品之一。甲基苯丙胺的纯品是一种无味或微有苦味的透明色油状液体，为了便于携带，非法贩卖的冰毒一般会被制成盐酸盐或硫酸盐的形式，外观像冰糖，形似冰，为颗粒状或粉末状固体，颜色大多为白色，故俗称“冰毒”。吸服冰毒会严重损害内脏器官和脑组织，严重时能导致肾机能衰竭及精神失常，甚至造成死亡。

2、甲基苯丙胺是根据麻黄素的化学结构改造而来的，又称去氧麻黄素。该药小剂量使用时有短暂的兴奋和抗疲劳作用，但长期使用该类毒品会对滥用者的身体和精神造成不同程度的损害，所以国家后来禁止了去氧麻黄素的生产、销售与使用。随着经济全球化和社会信息化的不断发展，毒品已经成为全球性社会公害，毒品的制造、贩运和滥用问题更加突出，毒品种类也越来越多。作为第二代毒品中滥用较多的品种，冰毒已成为当今世界上危害最大的毒品之一。

3、毒品的制售与贩运一直以来都是禁毒部门密切关注的问题，毒品来源的推定更是侦破涉毒案件的关键。某些不法分子经常通过向冰毒中掺杂n-异丙基苄胺等其他与毒品外观相似的物质以增大毒品重量，从而获取高额利润。目前，应用相对成熟的冰毒检测试剂盒主要是胶体金法检测试剂盒，该类试剂盒用于血液、尿液、唾液样本中苯丙胺类毒品的检测，但胶体金法属于免疫分析方法，容易受到冰毒结构类似物的干扰而导致假阳性结果，其检测结果不能作为司法鉴定的依据。而且，胶体金方法学的灵敏度较低，无法达到毛发毒品检测国家标准规定的阈值要求，因此无法应用于毛发中冰毒的检测。

4、液相色谱-质谱联用(lc ms/ms)是指样品中各组分经高效液相色谱分离后，先后经适用的接口导入质谱仪中，先被离子源电离成具有一定质荷比的碎片离子，再由质量分析器分离后被检测，最后经过计算机处理得到碎片离子组成的单一组分的质谱图，再由质谱图鉴定出该组分的结构组成。液相色谱-质谱联用结合了液相色谱有效分离能力以及质谱很强的组分鉴定能力，在生物、医药、化工、农业和环境等领域中得以广泛应用。司法鉴定行业技术规范《毛发中13种毒品及代谢物的液相色谱串联质谱检验方法》(sf/z jd01070252018)中描述了甲基苯丙胺的检测方法，但缺少n-异丙基苄胺等常见冰毒掺杂剂或检测干扰物质的检测方法。同时，目前还没有基于液相色谱-质谱联用技术的商品化的冰毒检测试剂盒，这不利于减小实验室间检测差异，也不利于司法鉴定标准化工作的推进。因此，在涉及基层案件侦办和对特定人员毒品筛查的公安及司法鉴定工作中，迫切需要一种准确能够鉴别和区分甲基苯丙胺及其结构类似物且成品化的多项联检试剂盒，对冰毒中甲基苯丙胺及其掺杂剂和检测干扰物进行准确识别和鉴定，以帮助禁毒部门迅速查明毒品来源，缩短案件侦破时间，对于毒品案件的侦破具有重要意义，也能够为毒(药)物的立法管理和定罪量刑提供直接的证据。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是提供毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒及制备方法、检测方法，检测效率高、操作方便、结果准确。

2、本发明采用如下技术方案实现发明目的：

3、毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒，其特征在于，包括：

4、质控盘、样本管及检测工作液，用于实现对冰毒类似物的检测；

5、所述质控盘包括空白质控、阴性对照品及阈值对照品；

6、所述检测工作液包括流动相a及流动相b。

7、作为本技术方案的进一步限定，所述质控盘及所述样本管的内包装均为pp冷冻研磨管，所述检测工作液内包装为棕色玻璃试剂瓶。

8、作为本技术方案的进一步限定，所述空白质控包括20mg阴性空白毛发；

9、所述阴性对照品包括20mg阴性空白毛发，1ng双苯戊二氨酯；

10、所述阈值对照品包括20mg阴性空白毛发，1ng双苯戊二氨酯，4ng甲基苯丙胺、4ngn-异丙基苄胺、4ng芬特明；

11、所述样本管包括1ng双苯戊二氨酯；

12、所述液流动相a由20mmol/l乙酸铵和1％甲酸的水溶液组成；

13、所述液流动相b由甲醇组成。

14、作为本技术方案的进一步限定，所述阴性空白毛发为人阴性头发。

15、作为本技术方案的进一步限定，所述冰毒类似物为甲基苯丙胺、n-异丙基苄胺及芬特明。

16、毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

17、s11：人阴性头发制备；

18、s111：取人阴性头发，纯化水清洗2遍，丙酮清洗2遍，晾干；

19、s112：以上处理后的人阴性头发剪为0.1cm小段，备用；

20、s12：空白质控制备；

21、第一组pp冷冻研磨管中加入5颗氧化锆研磨珠，放入20mg所述s11制备的人阴性头发，拧紧管盖；

22、s13：阴性对照品制备；

23、s131：第二组pp冷冻研磨管中加入100ng/ml双苯戊二氨酯甲醇溶液10μl，置于冻干机，程序冻干；

24、s132：第二组pp冷冻研磨管中加入5颗氧化锆研磨珠，放入20mg所述s11制备的人阴性头发，拧紧管盖；

25、s14：阈值对照品制备；

26、s141：第三组pp冷冻研磨管中加入100ng/ml双苯戊二氨酯甲醇溶液10μl，加入100ng/ml的甲基苯丙胺甲醇溶液40μl、100ng/ml的n-异丙基苄胺甲醇溶液40μl、100ng/ml的芬特明甲醇溶液40μl，置于冻干机，程序冻干；

27、s142：第三组pp冷冻研磨管中加入5颗氧化锆研磨珠，放入20mg所述s11制备的人阴性头发，拧紧管盖；

28、s15：样本管制备

29、s151：第四组pp冷冻研磨管中加入100ng/ml双苯戊二氨酯甲醇溶液10μl，置于冻干机，程度冻干；

30、s152：第四组pp冷冻研磨管中加入5颗氧化锆研磨珠，拧紧管盖；

31、s16：检测工作液流动相a制备；

32、s161：称取1.54g的乙酸铵，置于烧杯中，加入200ml水溶解后，全部转移至1000ml容量瓶中，原烧杯中加入200ml水，润洗烧杯后全部转移至上述1000ml容量瓶中，向所述1000ml容量瓶中加入1ml甲酸，加水定容至1000ml；

33、s162：分装至棕色玻璃试剂瓶中；

34、s17：检测工作液流动相b制备；

35、量取1000ml甲醇溶液，分装至棕色玻璃试剂瓶中。

36、作为本技术方案的进一步限定，所述冻干程序为-40℃预冻3h，抽真空，然后预制温度上升到-20℃，保温3h，再上升到-10℃，保温3h，再上升到0℃，保温3h，再上升到10℃时，保温5h，再上升到20℃时，保温5h，完成冻干。

37、毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

38、s21：毛发待测样品的前处理；

39、取毛发待测样品用纯化水清洗2遍，丙酮清洗2遍，晾干，剪成0.1cm小段，称量20mg置于样本管中，加入1ml甲醇，拧紧管盖，摇匀；

40、s22质控盘复溶；

41、向空白质控、阴性对照品、阈值对照品中各加入1ml甲醇，拧紧管盖，摇匀；

42、s23研磨提取；

43、将空白质控、阴性对照品、阈值对照品、样本管全部置于冷冻研磨机中进行冷冻研磨，再置于高速离心机中离心，取上清液过滤；

44、s24：检测分析；

45、取所述滤液各50μl，用液相色谱-质谱联用仪进行检测分析。

46、作为本技术方案的进一步限定，所述检测分析包括设置液相色谱条件、质谱条件，选定特征离子对，比较待测样品和阳性对照样品色谱峰的保留时间、特征离子对丰度比进行定性，以峰面积外标法定量。

47、作为本技术方案的进一步限定，所述液相色谱条件包括色谱柱采用c18色谱柱；

48、所述液相色谱条件还包括洗脱流动相a和流动相b，洗脱方式为梯度洗脱；

49、所述质谱条件包括流速为0.35ml/min，柱温25℃，电喷雾电离正离子模式，检测方式为多反应监测模式，雾化气为氮气3.0l/min，干燥器为氮气10.0l/min，加热气为空气10.0l/min，进样量5μl，进样口温度280℃，接口温度300℃，接口电压4kv，加热模块温度400℃，dl温度250℃，选定特征离子对包括甲基苯丙胺以m/z 150.10>91.05，m/z 150.10>119.10作为特征离子对，n-异丙基苄胺以m/z 150.10>91.05，150.10>65.05作为特征离子对，芬特明以m/z 150.10>91.05，m/z 150.10>133.10作为特征离子对。

50、与现有技术相比，本发明的优点和积极效果是：

51、1、本发明提供的毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒及检测方法，可以对毛发中甲基苯丙胺、n-异丙基苄胺、芬特明进行定性和定量检测，能达到国家标准检测阈值0.2ng/mg的要求，特异性好，灵敏度高，尤其在冰毒目标物盲筛检测中将起到重要作用。

52、2、本发明提供的毛发中冰毒类似物三项联检试剂盒中包括了质控盘，将空白质控、阴性对照和阈值添加对照的样品制备以及内标品、标准品固化到了成品试剂盒中，减少检测人员操作步骤，减小标准物质差异，能够减少不确定度来源因素的引入，检测结果的准确度高，检出限低，线性范围宽。成品试剂盒的广泛应用可大大降低法庭科学行业内实验室间检测差异，有利于毒品检测标准化和实验室间检测结果互认。