一种胃幽门螺旋杆菌检测卡的制作方法

本技术涉及胃幽门螺旋杆菌检测，更具体地说，涉及一种胃幽门螺旋杆菌检测卡。

背景技术：

1、胃幽门螺旋杆菌是一种微需氧的细菌，生存于胃部和十二指肠等区域，其会引起慢性胃炎、萎缩性胃炎、肠上皮化生以及消化性溃疡等。胃幽门螺旋杆菌通过共餐传染的几率是最高的，往往会出现“一人感染全家吃药”的情况。因此，早发现早治疗胃幽门螺旋杆菌才是预防和治疗胃幽门螺旋杆菌的最佳技术手段。目前为幽门螺旋杆菌的检测方法主要包括呼气检测仪检测、免疫学检测、细菌直接检测法、快速尿素酶检测法、胃粘膜组织切片染色镜检测法、胃粘膜直接涂片染色镜检测方法、聚合酶链反应试验检测法、c13和c14尿素呼气检测法、15n尿氨排泄实验法以及抗体检测试验法等。

2、上述方法均能准确的检测出为幽门螺旋杆菌，但是，上述方法中有的需要使用精确度高的设备，价格昂贵，如呼气检测仪检测和c13和c14尿素呼气检测法等，普通人也不会专门买一台设备进行检测；有的检测方法步骤复杂，如胃粘膜组织切片染色镜检测法、胃粘膜直接涂片染色镜检测方法和聚合酶链反应试验检测法，都需要进行胃粘膜取样，一般人是没办法有办法进行取样的。

3、这些都需要经过特定设备或方法去检测，对于大多数人来说是极其不方便的，故需要改进。

技术实现思路

1、为了简化检测胃幽门螺旋杆菌的步骤、提高检测其精准性、节约检测成本以及提高使用的便利性，本技术提供一种胃幽门螺旋杆菌检测卡。

2、第一方面，本技术提供一种胃幽门螺旋杆菌检测卡，采用如下的技术方案：

3、一种胃幽门螺旋杆菌检测卡，包括检测卡本体，检测卡本体设置有盛放样品稀释剂的储藏室、样品放置室和指示剂室，所述储藏室和所述样品放置室通过单向通道连通，指示剂室分为检测区和质控区，所述样品放置室连接有单向过滤通道，所述单量过滤通道远离所述样品放置室的一端指向所述检测区，所述样品放置室设置有进料口，所述进料口设置有开关。

4、通过上述技术方案制备得到的胃幽门螺旋杆菌检测卡具有高灵敏度和高特异性，且操作方便，结果准确，制备过程简单，可节约企业成本，价格低廉。本技术中通过设置有单向过滤通道，可以直接过滤掉杂物，不用提前对样品处理方便快捷。本技术中使用的样本可以为唾沫液、胃粘膜切片或粪便，本技术中可以直接将稀释液和样品混合，不需要对样品进行处理，方便快捷。同时，本技术中将指示剂室分为检测区和质控区，有利于形成对比，观察到样品中胃幽门螺旋杆菌的严重程度。

5、在使用过程中将样品直接放置于样品放置室，样品稀释剂从储藏室进入样品放置室，摇一摇，使得样品和稀释剂混合，静置5min，单向过滤通道过滤杂质，过滤后的溶液流向检测区，进行检测。

6、优选的，所述单向过滤通道是由膨胀珍珠岩粉和滑石粉按照重量比(10-15)：3混合得到。

7、优选的，所述膨胀珍珠岩粉的平均粒径为50-100um，滑石粉的平均粒径为150-200um。

8、优选的，所述单向过滤通道的孔隙率为20-40％。

9、通过将不同粒径的膨胀珍珠岩粉和滑石粉相互配合，形成良好级配，使得单向过滤通道的孔隙比较均匀，有利于稀释后样品的过滤，去除杂质，缩短检测时间。膨胀珍珠岩为蜂窝状结构的白色颗粒状的材料，为过滤稀释后的样品提供了一个很好的过滤屏障，同时配合滑石粉使用可提高过滤效率。

10、优选的，所述检测区设置有指示剂，所述指示剂由以下方法制备得到：

11、1)将赖氨酸溶解于灭菌的纯净水ⅰ中，再加入羧甲基纤维素和吐温，混合，加入醋酸，调节ph为4-5，得到混合溶液；

12、2)将羊抗鼠抗hp-ⅰ抗体、尿素酶抗体ⅰ、尿素酶抗体ⅱ、抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体-2、甘露醇、氯化钠和灭菌的纯净水ⅱ混合，得到抗体溶液；

13、3)将改性聚氨酯泡棉浸泡于混合溶液中，直至到体积扩大1-1.5倍，取出，晾干，再将晾干后的改性聚氨酯泡棉浸泡至抗体溶液中，直到体积增大至0.7-1倍，得到指示剂。

14、通过采用上述技术方案，使得指示剂上的抗体能够长期保存，提高胃幽门螺旋杆菌的检测的准确性，且特异性高。

15、目前，都是通过利用抗原和抗体相结合进行检测。但是，胃幽门螺旋杆菌检测卡并不是生产完后就立即使用，而是需要放置一段时间。若是将长久之后，抗体的活性降低，使得胃幽门螺旋杆菌检测卡检测灵敏度和检出效率大大降低，容易出现漏检或假阳性的现象。对比，本技术通过上述制备方法制备指示剂，以提高指示剂的保存时间，使得胃幽门螺旋杆菌一直保持高准确性和灵敏性。通过改性聚氨酯泡棉浸泡于混合溶液，使得聚氨酯泡棉的表面呈弱酸性，有利于吸附抗体，同时延长抗体的保存时间。

16、其中，hp菌体抗原会与抗体形成一种抗原抗体的复合物，而形成的抗体抗原复合物可以与改性聚氨酯泡棉发生络合反应形成红色斑点，从而达到检测效果。

17、本技术中采用聚氨酯泡棉作为载体，能够很好的将抗体吸附，有利于保存抗体，同时通过对聚氨酯泡棉进行处理，使得聚氨酯泡棉吸附载体的同时能够将抗体长时间保存。

18、优选的，制备所述指示剂的原料重量份如下：

19、赖氨酸1-2份

20、羧甲基纤维素5-10份

21、吐温2-5份

22、醋酸2-5份

23、灭菌的纯净水ⅰ100份

24、羊抗鼠抗hp-ⅰ抗体0.1-1份

25、尿素酶抗体ⅰ1-2份

26、尿素酶抗体ⅱ0.2-2.5份

27、抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体-2 0.1-1份

28、甘露醇2-4份

29、氯化钠1-2份

30、灭菌的纯净水ⅱ80份。

31、通过采用上述技术方案，进一步提高指示剂的保存的时间，同时也提高指示剂的灵敏性和准确性。同时使得改性聚氨酯泡棉能稳定吸附抗体，防止抗体在保存的过程中能够脱落。

32、优选的，所述改性聚氨酯泡棉由以下方法制备得到：

33、将聚氨酯泡棉浸泡于质量分数为10-15％的磷酸溶液中，直到聚氨酯泡棉体增大0.7-1倍；将羧甲基纤维素溶解于灭菌的纯净水中，得到羧甲基纤维素溶液，再将浸泡后的聚氨酯泡棉加入至羧甲基纤维素溶液，加热，去除水分，得到含有羧甲基纤维素的聚氨酯泡棉；

34、将质量分数为0.01-0.02％的humcl溶液加热至沸腾，再加入质量分数为0.8-1.2％柠檬酸钠水溶液，加热7-10min，将含有羧甲基纤维素的聚氨酯泡棉浸泡于溶液中，浸泡4-8h，低温干燥，得到改性聚氨酯泡棉。

35、通过采用上述技术方案，提高聚氨酯泡棉对抗体的吸附性能，有利于保存抗体，延长抗体的保存时间。同时，hp菌体抗原会与抗体形成一种抗原抗体的复合物，而形成的抗体抗原复合物可以与改性聚氨酯泡棉发生络合反应形成红色斑点。

36、优选的，所述聚氨酯泡棉的厚度为1-2mm，密度为240-280kg/m3，平均孔径为200-300um。

37、通过采用上述技术方案，使得改性聚氨酯泡棉能偶吸收适量的抗体，提高胃幽门螺旋杆菌检测卡检测准确性。

38、优选的，所述质控区含有羊抗鼠igg多克隆单体。

39、通过采用上述技术方案，由于羊抗鼠igg抗体被吸附指示剂在上，指示剂会在此发生聚集沉淀而显示红色，证明检测过程顺利完成，胃幽门杆菌检卡工作正常。

40、优选的，所述样品稀释剂由以下方法制备得到：

41、s1、将赖氨酸溶解于灭菌的纯净水ⅲ中，加入氢碳酸氢钠缓冲液，调节ph为9-10，得到赖氨酸溶液；

42、s2、将氯化钠、吐温、聚乙烯醇和生物防腐剂溶解于灭菌的纯净水ⅳ，得到氯化钠混合液；s3、将赖氨酸溶液和氯化钠混合液将混合，得到样品稀释剂。

43、通过采用上述技术方案，能够快速将样品稀释，并且将带入hp菌体抗原至检测区。本技术中的样品稀释剂能将样品中杂质和hp菌体抗原分开，使得进入检测区的hp菌体抗原的纯度高，易于检测，进一步提高胃幽门螺旋杆菌检测卡的灵敏性和检测准确性。

44、优选的，制备所述样品稀释剂所用原料的重量份如下：

45、灭菌的纯净水ⅲ50份

46、赖氨酸4-10份

47、碳酸氢钠缓冲液5-10份

48、氯化钠1-3份

49、吐温2-5份

50、聚乙烯醇1-3份

51、生物防腐剂0.1-0.3份

52、灭菌的纯净水ⅳ50份。

53、通过采用上述技术方案，进一步优化制备样品稀释剂原料的用量，呢够快速将样品中杂质和hp菌体抗原分开，提高进入检测区的hp菌体抗原的纯度高，易于检测，从而提高胃幽门螺旋杆菌检测卡的灵敏性和检测准确性。

54、综上所述，本技术具有以下有益效果：

55、1、本技术在检测卡本体设置有盛放样品稀释剂的储藏室、样品放置室和指示剂室，储藏室和样品放置室通过单向通道连通，指示剂室分为检测区和质控区，样品放置室连接有单向过滤通道，单量过滤通道远离样品放置室的一端指向检测区，样品放置室设置有进料口，进料口设置有开关。本技术中直接将样品和样品稀释剂在样品放置室混合，再将经经过单向过滤通道功率过滤杂质，过滤后的溶液流向检测区，进行检测。不需要对样品进行处理，方便快捷，操作方便，结果准确，且灵敏度高、特异性强。

56、2、本技术通过赖氨酸、羧甲基纤维素、吐温、醋酸和水制备混合液；将羊抗鼠抗hp-ⅰ抗体、尿素酶抗体ⅰ、尿素酶抗体ⅱ、抗幽门螺旋杆菌单克隆抗体-2、甘露醇、氯化钠和灭菌的纯净水ⅱ混合，得到抗体溶液；将改性聚氨酯泡棉浸泡于混合溶液中，取出，晾干，再将晾干后的改性聚氨酯泡棉浸泡至抗体溶液中，得到指示剂。通过采用聚氨酯泡棉作为载体，能够很好的将抗体吸附，有利于保存抗体，同时通过对聚氨酯泡棉进行处理，使得聚氨酯泡棉吸附载体的同时能够将抗体长时间保存。