一种水产品中噻嘧啶含量的检测方法与流程

本发明属于水产品检验，具体涉及一种水产品中噻嘧啶含量的检测方法。

背景技术：

1、噻嘧啶，别名抗虫灵，是一种高效、安全、广谱的肠道线虫驱虫药，通过抑制胆碱酯酶，对寄生虫的神经肌产生阻滞作用，能麻痹虫体使之止动，安全排出体外，不致引起胆道梗阻或肠梗阻，在水产养殖中通常用于防治水产品体内寄生虫，在我国出口到国外的鳗鱼制品中有通报过噻嘧啶超标的相关案例，目前国内无相关的检测标准及限量标准。

技术实现思路

1、本发明目的在于克服现有技术缺陷，提供一种水产品中噻嘧啶含量的检测方法。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种水产品中噻嘧啶含量的检测方法，包括如下步骤：

4、(1)将噻嘧啶溶解于甲醇中，制得不同浓度的标准液；

5、(2)将试样与乙腈、无水硫酸钠混合后，经均质和离心后，获得上清液；

6、(3)将上述上清液减压浓缩至干，然后加入含有甲酸的乙腈水溶液和乙腈饱和正己烷溶液，混匀后，离心，获得下层清液；

7、(4)将上述下层清液通过有机滤膜过滤，获得上样液；

8、(5)将上述标准液和上样液分别送入高效液相色谱串联质谱仪进行检测，接着对所得检测结果进行比对，如果上样液中的质量色谱峰保留时间与标准液相比，变化范围在±2.5％之内，同时上样液中的噻嘧啶的三个子离子的相对丰度与该上样液中的浓度相当的标准液的相对丰度的偏差不超过下表的范围，即可判定试样中含有噻嘧啶，完成定性检测；

9、 相对离子丰度 ＞50％ ＞20％～50％ ＞10％～20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％

10、。

11、在本发明的一个优选实施方案中，还包括步骤(6)：用外标法对所述试样中的噻嘧啶的含量进行定量检测。

12、进一步优选的，所述步骤(6)为：采用外标法，根据不同浓度的标准液的检测结果绘制标准曲线，该标准曲线的坐标为标准液的浓度，纵坐标为标准液中噻嘧啶离子的色谱峰面积，将上样液的检测结果代入该标准曲线的对应公式中，即可对试样中的噻嘧啶含量进行定量检测。

13、在本发明的一个优选实施方案中，用于配制所述标准液的噻嘧啶的纯度大于98％。

14、在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(3)中的乙腈水溶液的浓度为20％，含有0.2％的甲酸，所述。

15、在本发明的一个优选实施方案中，所述步骤(2)和步骤(3)中的离心的条件均为：15000rpm，5min。

16、在本发明的一个优选实施方案中，所述有机滤膜的孔径为0.22μm。

17、在本发明的一个优选实施方案中，所述高效液相色谱串联质谱仪的高效液相色谱的条件为：色谱柱：c18柱，2.1mm×100mm，1.7μm；流速：0.3ml/min；进样量：2μl；流动相a为含0.1％甲酸的5mmol/l乙酸铵，流动相b为乙腈，梯度洗脱。

18、进一步优选的，所述梯度洗脱的条件如下表所示：

19、 时间(min) 流动相a(％) 流动相b(％) 0.00 90 10 2.00 90 10 4.00 50 50 5.00 50 50 5.50 90 10 8.00 90 10

20、。

21、更进一步优选的，所述高效液相色谱串联质谱仪的质谱的条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测(mrm)；电喷雾电压：4000v；毛细管电压：135v；辅助气压力：35psi；反吹气：11l/h。

22、本发明的有益效果是：本发明前处理简便，定量准确、灵敏度高，噻嘧啶的检出限(s/n≥3)为0.3μg/kg，定量限(s/n≥10)为1.0μg/kg，能够快速、高灵敏度的对水产品中噻嘧啶含量进行定性和定量检测。

技术特征：

1.一种水产品中噻嘧啶含量的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：还包括步骤(6)：用外标法对所述试样中的噻嘧啶的含量进行定量检测。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(6)为：采用外标法，根据不同浓度的标准液的检测结果绘制标准曲线，该标准曲线的坐标为标准液的浓度，纵坐标为标准液中噻嘧啶离子的色谱峰面积，将上样液的检测结果代入该标准曲线的对应公式中，即可对试样中的噻嘧啶含量进行定量检测。

4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的检测方法，其特征在于：用于配制所述标准液的噻嘧啶的纯度大于98％。

5.如权利要求1至3中任一权利要求所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的乙腈水溶液的浓度为20％，含有0.2％的甲酸，所述。

6.如权利要求1至3中任一权利要求所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)和步骤(3)中的离心的条件均为：15000rpm，5min。

7.如权利要求1至3中任一权利要求所述的检测方法，其特征在于：所述有机滤膜的孔径为0.22μm。

8.如权利要求1至3中任一权利要求所述的检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱串联质谱仪的高效液相色谱的条件为：色谱柱：c18柱，2.1mm×100mm，1.7μm；流速：0.3ml/min；进样量：2μl；流动相a为含0.1％甲酸的5mmol/l乙酸铵，流动相b为乙腈，梯度洗脱。

9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于：所述梯度洗脱的条件如下表所示：

10.如权利要求9所述的检测方法，其特征在于：所述高效液相色谱串联质谱仪的质谱的条件为：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测(mrm)；电喷雾电压：4000v；毛细管电压：135v；辅助气压力：35psi；反吹气：11l/h。

技术总结
本发明公开了一种水产品中噻嘧啶含量的检测方法，包括如下步骤：(1)将噻嘧啶溶解于甲醇中，制得不同浓度的标准液；(2)将试样与乙腈、无水硫酸钠混合后，经均质和离心后，获得上清液；(3)将上述上清液减压浓缩至干，然后加入含有甲酸的乙腈水溶液和乙腈饱和正己烷溶液，混匀后，离心，获得下层清液；(4)将上述下层清液通过有机滤膜过滤，获得上样液；(5)用高效液相色谱串联质谱仪对上样液进行定性和定量检测。本发明前处理简便，定量准确、灵敏度高，噻嘧啶的检出限(S/N≥3)为0.3μg/kg，定量限(S/N≥10)为1.0μg/kg，能够快速、高灵敏度的对水产品中噻嘧啶含量进行定性和定量检测。

技术研发人员：熊刚,李平,陈晓娟,陈忠河
受保护的技术使用者：厦门鉴科检测技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16