比阿培南质量检测用系统适用性对照品及其制备方法和应用与流程

本发明涉及制药领域，具体涉及比阿培南和注射用比阿培南质量检测用系统适用性对照品及其制备方法。

背景技术：

1、比阿培南(biapenem)，化学名称(-)-6-[[(4r,5s,6s)-2-羧基-6-[(1r)-1-羟乙基]-4-甲基-7-氧代-1-氮杂双环[3.2.0]庚-2-烯-3-基]硫]-6,7-二氢-5h-吡唑并[1,2-a][1,2,4]三唑-4-鎓内盐，其制剂注射用比阿培南由日本惠氏制药株式会社(现辉瑞制药株式会社)研制成功，商品名为并于2001年在日本首次上市。比阿培南拥有优异短时杀菌能力，相对于初期研发的碳青霉烯类抗菌药物，不易被生物体内的dhp-i(肾脱氢肽酶-i)分解，能够发挥优秀抗菌活性。

2、比阿培南和注射用比阿培南在中国药典、美国药典、欧洲药典以及日本药典中均未收载，产品的质量检测缺乏统一的标准，且现有技术也没有比阿培南中杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b与杂质403-z369研究的报道。另外，产品质量检测所需的杂质工作对照品外购很贵，其中，二聚物c、杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b以及杂质403-z369的对照品可在tlc的官网购买(tlc是国际公认的杂质对照品供应商)。按300元/mg、每支规格为100mg计算，购买9种杂质工作对照品需花费27w元左右，而这些对照品仅用于系统适用性判断，各杂质贮备液配制后没有其他用途，且贮备液不稳定，放置一段时间纯度均发生不同程度的下降，无法再作为对照品使用，导致产品的检测费用居高不下。

3、在现有技术中，已有以下研究：

4、陈松杰等(比阿培南开环物杂质的确证及含量测定[j].中国药房，2013,24(41)：3915-3917)研究了比阿培南开环物杂质的检测方法，结果发现比阿培南水溶液在水浴破坏条件下，开环物a增加显著，但未降解产生开环物b，经水浴及甲酸破坏后，开环物a及开环物b均增加显著；且高温、高湿及光照条件下开环物a、b均未显著增加。该现有技术研究了比阿培南开环物a、b的产生途径。

5、刘俊华等(hplc法测定比阿培南二聚物方法研究及其降解途径考察[j].药物分析杂志，2012,32(3)，468-472)研究了比阿培南二聚物的检测方法及考察其降解途径，发现二聚物在强碱、氧化、高温、高湿及光照条件下均未增加，表明在此几种条件下不易产生二聚物；而在强酸溶液及水溶液在水浴条件下，二聚物增加显著。该现有技术研究了比阿培南二聚物a、b的产生途径。

6、ming xia,tai-jun huang,fei zhang等(the stability of biapenem andstructural identification of impurities in a queous solution[j].journal ofpharmaceutical and biamedical analysis,2009,937-944.)研究了温度对比阿培南降解杂质的影响，该文献公开了3种有关物质和聚合物a、b，其中ph3.5的比阿培南水溶液在温度高于40℃时，水解产物及其他降解产物水平显著增加，在温度高于60℃时，聚合物b数量增加明显，而聚合物a的生成减少且在100℃时检测不到。

7、综上，现有技术均没有公开杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b与杂质403-z369产生途径，而且现有技术研究的是比阿培南在溶液状态下的降解途径。且现有的技术方法中仅能够同时产生开环物a、开环物b、二聚物a和二聚物b，但无法同时产生另外五个杂质，且制备出来的其他杂质较多，影响杂质定位。

8、因此，提供一种制备简单，使用方便、经济实惠且可同时检测多种杂质的系统适用性对照品及其制备方法是非常有必要的。

技术实现思路

1、针对以上技术现状，为了有效检测产品质量，本发明提供了一种系统适用性对照品及其制备方法，满足日常检验及稳定性考察期间对比阿培南和注射用比阿培南中有关物质的监控。具体发明如下：

2、本发明提供了一种比阿培南和注射用比阿培南质量检测用系统适用性对照品的制备方法，所述方法包括以下步骤：

3、(1)将固体比阿培南于40-120℃条件下暴露0至6个月后，于2～8℃中储存；

4、(2)酸破坏：取步骤(1)得到的比阿培南样品，加酸溶液使其溶解后，室温放置1.5-3小时，所述酸选自三氟乙酸、乙酸或甲酸。

5、本发明的方法中，作为示例性的说明，所述步骤(1)中的温度可以为40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃、120℃、125℃、130℃、135℃、140℃，或它们之间任何自然数的温度。

6、本发明的方法中，作为示例性的说明，所述步骤(1)中的暴露时间可以为0天、1天、2天、3天、4天、5天、10天、15天、20天、25天、30天、1.5个月、2个月、2.5个月、3个月、3.5个月、4个月、4.5个月、5个月、5.5个月、6个月或它们之间任何自然数天数。

7、本发明的方法中，作为示例性的说明，所述步骤(2)中放置时间可以为1.5小时、1.6小时、1.7小时、1.8小时、1.9小时、2.0小时、2.1小时、2.2小时、2.3小时、2.4小时、2.5小时、2.6小时、2.7小时、2.8小时、2.9小时、3.0小时。

8、本发明的方法中，作为实施方案之一，所述酸溶液的浓度为0.05％-1.5％；

9、本发明的方法中，作为实施方案之一，所述比阿培南样品的质量与酸的体积比为10:1-60:1(mg/ml)。作为示例性的说明，可以为10:1，15:1，20:1，25:1，30:1，35:1，40:1，45:1，50:1，55:1，60:1(mg/ml)。

10、本发明的方法中，作为实施方案之一，所述步骤(2)中的酸选自三氟乙酸。

11、本发明还提供了一种权利要求1所述的方法制备的比阿培南和注射用比阿培南质量检测用系统适用性对照品，所述对照品同时含有比阿培南开环物a、比阿培南开环物b、二聚物c、杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b+杂质403-z369、二聚物a和二聚物b。

12、本发明中上述杂质的名称，结构及分子量具体如下(图8～16)：

13、

14、

15、作为实施方案之一，所述对照品中开环物a为0.40％-0.60％，开环物b为0.04％-1.0％，二聚物c为1.20％-1.90％，杂质403-z313为0.03％-1.0％，杂质403-z341a为0.04％-0.15％，杂质403-z341b+杂质403-z369为0.04％-0.15％，二聚物a为0.20％-0.35％，二聚物b为2.0％-3.2％。

16、本发明还提供了本发明系统适用性对照品在比阿培南或注射用比阿培南的有关物质的检测中的用途。

17、本发明还提供一种采用所述的系统适用性溶液对照品进行比阿培南或注射用比阿培南色谱检测的方法，其中，所述方法包括：

18、该系统对照品的检测方法，选择十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱(4.6mm×150mm，3μm)。

19、选择0.01mol/l乙酸铵溶液为无机相，乙腈为有机相，将无机相与有机相按体积比例(99:1)混合后作为流动相a，将无机相与有机相按体积比例(40:60)混合后作为流动相b。

20、梯度洗脱条件为：

21、0～5min，100％流动相a；

22、5～25min，100％流动相a～76％流动相a，0％流动相b～24％流动相b；

23、25～42min，76％流动相a～0％流动相a，24％流动相b～100％流动相b；

24、42～45min，100％流动相b；

25、45～46min，0％流动相a～100％流动相a，100％流动相b～0％流动相b；

26、46～58min，100％流动相a。

27、流速：0.5ml/min。

28、检测波长：300nm和220nm。

29、柱温：35℃。

30、本发明的方法中，作为实施方案之一，所述方法包括杂质403-z341b与杂质403-z369色谱峰重叠，一并控制。

31、本发明的方法中，作为实施方案之一，所述方法包括上述各杂质的峰间的分离度≥1.2。

32、本发明通过大量的研究，发现该系统对照品可通过高温破坏后再加酸破坏得到。高温破坏条件下开环物a和二聚物增加不明显，主要是在酸破坏阶段产生；样品在固体状态时开环物b在高温条件下增加明显，而样品在溶液状态时开环物b只有在甲酸破坏下产生；杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b与杂质403-z369在高温破坏下产生。

33、本发明的制备方法通过将固体比阿培南于适当的温度下进行破坏，使样品降解产生比阿培南开环物b、杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b及杂质403-z369，然后再加入三氟乙酸、乙酸或甲酸进行破坏，使样品继续降解产生开环物a、二聚物a、二聚物b和二聚物c。

34、按照峰面积归一化法，所述的系统适用性溶液对照品中，开环物a为0.40％-0.60％，开环物b为0.04％-1.0％，二聚物c为1.20％-1.90％，杂质403-z313为0.03％-1.0％，杂质403-z341a为0.04％-0.15％，杂质403-z341b+杂质403-z369为0.04％-0.15％，二聚物a为0.20％-0.35％，二聚物b为2.0％-3.2％。

35、技术效果：

36、(1)提供一种同时含有9种比阿培南有关物质的混合对照品；

37、(2)该混合对照品稳定性好，制备方法简单，方法专属性好；

38、(3)该混合对照品大大降低了产品日常检验及稳定性考察过程中有关杂质监控的成本；

39、(4)进一步探究了比阿培南降解的规律，发现样品为固态时，开环物b在高温破坏下产生明显，而样品在液态状态下进行酸破坏时，开环物b只在甲酸的破坏下产生，而本技术利用这个规律，将固体样品在高温条件下产生开环物b，为开环物b的产生提供了新的途径；

40、(5)本技术在常温下进行酸破坏，与现有技术在水浴或者高温的条件下进行相比，本技术的方法更加简单，易操作；

41、(6)本技术分离并鉴定了聚合物c、杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b与杂质403-z369，进一步完善了比阿培南原料药或比阿培南制剂的杂质谱。

42、本发明与现有的技术方法的差别在于能够同时制备出除开环物a、开环物b、二聚物a和二聚物b外的其他5个杂质，尤其是杂质403-z313、杂质403-z341a、杂质403-z341b与杂质403-z369，该4个杂质常规是通过定向合成制备杂质对照品，然后用杂质对照品对产品进行定位检测。

43、本发明通过对产品进行大量研究，根据研究发现的降解规律最终得到含有各个杂质对照品的溶液，通过与采用常规手段制备杂质对照品后对产品进行检测的对比，本发明在经济效益和检验过程的操作过程方面具有显著的优势。