毛细管电泳-质谱在线联用的应用、组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的检测方法与流程

本发明属于分析检测，具体涉及毛细管电泳-质谱在线联用的应用、组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的检测方法。

背景技术：

1、t-pa(组织型纤溶酶原激活剂，tissue plasminogen activator)是一种重要的重组蛋白药物，常用于纤溶系统的调控和治疗血栓疾病。t-pa的主要作用是激活纤溶酶原，促进血栓的溶解，t-pa的异质性(即在化学结构上的变异)对其药效和稳定性产生重要影响。

2、t-pa的异质性可能包括活性异构体、降解产物和修饰物等，这些异质体的存在可能导致药物的活性、稳定性、免疫原性等方面的差异，从而影响其治疗效果和安全性。因此，准确评估t-pa药物的异质性具有重要的意义。

3、目前，常用的t-pa药物异质性分析方法包括高效液相色谱-质谱联用法(lc-ms)、高效液相色谱法(hplc)和凝胶电泳法。然而，上述分析方法存在一些局限性，如无法定性、分离效果不理想、分析时间长、对样品量需求大等。因此，需要开发一种高效、准确的t-pa药物异质性的分析方法。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供毛细管电泳-质谱在线联用的应用、组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的检测方法。本发明提供的检测方法能够实现t-pa中异质体的高效、准确检测。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了毛细管电泳-质谱在线联用在生物医药检测或食品检测中的应用。

4、本发明提供了一种组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的检测方法，包括以下步骤：

5、将待测组织型纤溶酶原激活剂药物溶解于铵盐水溶液中，得到待测样品液；

6、将所述待测样品液进行毛细管电泳-质谱在线联用检测，得到组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的定性检测结果；

7、所述毛细管电泳-质谱在线联用检测包括毛细管电泳分离和质谱检测，所述毛细管电泳分离和质谱检测的在线联用通过电渗流驱动同轴鞘流液电喷雾离子源实现；

8、所述毛细管电泳分离的条件包括：采用毛细管区带电泳cze模式；毛细管为中性涂层毛细管；电泳背景缓冲液包括酸-水混合溶液或酸-乙腈-水混合溶液；进样方式为气压进样。

9、优选的，所述铵盐水溶液中的铵盐包括碳酸氢铵和/或乙酸铵；所述铵盐水溶液的浓度为1～50mmol/l。

10、优选的，所述待测样品液中待测组织型纤溶酶原激活剂药物的浓度为0.5～2mg/ml。

11、优选的，所述电渗流驱动同轴鞘流液电喷雾离子源的离子源电喷雾电压为1.5～3kv，鞘流液为甲酸-异丙醇-水混合溶液；所述甲酸-异丙醇-水混合溶液中甲酸的体积分数为0.5～5％，异丙醇的体积分数为10～20％；所述鞘流液的流速＜50nl/min。

12、优选的，所述毛细管的材质为弹性石英，中性涂层毛细管的内径为50μm，管长为75～100cm；

13、优选的，所述电泳背景缓冲液中酸的体积分数为1～35％，所述酸包括甲酸和/或乙酸；

14、所述酸-乙腈-水混合溶液中乙腈的体积分数为1～35％。

15、优选的，所述毛细管电泳分离的条件包括：进样方式为气压进样，所述气压进样的气压为100mbar，待测样品液的进样时间为20s，电泳背景缓冲液的进样时间为10s；分离电压为1～30000v；分离时间为20min。

16、优选的，所述质谱检测的条件包括：离子源为ce-ms离子源；采用一级质谱全扫描模式-选择性离子监测；扫描范围为1000～4000m/z；离子模式为正离子模式；显微扫描次数为3次；分辨率为17500；自动增益控制为3e6；最大注射时间为150ms；质谱数据类型为profile。

17、优选的，所述异质体包括活性异构体、降解产物和修饰物中的一种或几种。

18、毛细管电泳具有优异的分离能力，可以高效地分离带电物质，包括离子、极性化合物和大分子；毛细管电泳的分离机制基于物质在电场作用下的迁移速度差异，可以达到高分辨率的分离效果，这种高分离能力使得毛细管电泳能够分离复杂的混合物，提供准确的分析结果。质谱分析是一种高灵敏度的检测技术，可以检测到微量的分析物。本发明通过将毛细管电泳与质谱联用，可以将毛细管电泳分离得到的物质直接引入质谱仪进行检测，从而实现对分离物质的高灵敏度检测。同时，质谱分析可以提供分子的精确质量信息和结构信息，进一步增强了分析的准确性和可靠性。毛细管电泳和质谱联用还可以提供互补的分析信息，其中，毛细管电泳可以提供物质的分离和定量信息，而质谱分析可以提供物质的质量信息和结构信息，通将这两种技术联用，可以获得更全面的分析结果，有助于分离、确定和鉴定复杂样品中的成分。而且，毛细管电泳和质谱联用通常需要较少的样品量进行分析，这对于样品稀缺或仅有有限样品量的情况非常有优势，毛细管电泳的内径小，样品需求量较少，而质谱分析对于微量样品也能提供高灵敏度的检测。毛细管电泳-质谱在线联用结合了在线毛细管电泳和质谱连接的技术优势，在生物医药检测或食品检测中具有很好的应用前景。

19、本发明利用在线毛细管电泳和质谱连接，通过毛细管区带电泳cze模式对t-pa进行分离实现对药物的迁移速度、分离效率和分离选择性的有效控制，提高分离效果；使用中性涂层毛细管能够避免药物与毛细管材料之间的相互作用，减少了样品损失和偏差；以酸-水混合溶液或酸-乙腈-水混合溶液作为作为电泳背景缓冲液(bge)有利于药物的分离和分析；采用气压进样能够确保待测样品液和bge准确进入中性涂层毛细管，施加分离电压进行毛细管区带电泳完成对t-pa药物中异质体的有效cze分离，然后将分离的t-pa药物通过电渗流驱动同轴鞘流液电喷雾离子源引入质谱仪进行检测分析，能够获得更详细的药物信息和异质性分析结果，从而实现t-pa药物中异质体的高效、准确、高灵敏度检测。而且，本发明采用的毛细管电泳-质谱在线联用检测，耗时短、需要的样品量少，为评估t-pa药物的质量和稳定性提供了一种可靠的手段。

技术特征：

1.毛细管电泳-质谱在线联用在生物医药检测或食品检测中的应用。

2.一种组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的检测方法，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述铵盐水溶液中的铵盐包括碳酸氢铵和/或乙酸铵；所述铵盐水溶液的浓度为1～50mmol/l。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述待测样品液中待测组织型纤溶酶原激活剂药物的浓度为0.5～2mg/ml。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述电渗流驱动同轴鞘流液电喷雾离子源的离子源电喷雾电压为1.5～3kv，鞘流液为甲酸-异丙醇-水混合溶液；所述甲酸-异丙醇-水混合溶液中甲酸的体积分数为0.5～5％，异丙醇的体积分数为10～20％；所述鞘流液的流速＜50nl/min。

6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述毛细管的材质为弹性石英，中性涂层毛细管的内径为50μm，管长为75～100cm。

7.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述电泳背景缓冲液中酸的体积分数为1～35％，所述酸包括甲酸和/或乙酸；

8.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述毛细管电泳分离的条件包括：气压进样的气压为100mbar，待测样品液的进样时间为20s，电泳背景缓冲液的进样时间为10s；分离电压为1～30000v；分离时间为20min。

9.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述质谱检测的条件包括：离子源为ce-ms离子源；采用一级质谱全扫描模式-选择性离子监测；扫描范围为1000～4000m/z；离子模式为正离子模式；显微扫描次数为3次；分辨率为17500；自动增益控制为3e6；最大注射时间为150ms；质谱数据类型为profile。

10.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述异质体包括活性异构体、降解产物和修饰物中的一种或几种。

技术总结
本发明提供了毛细管电泳‑质谱在线联用的应用、组织型纤溶酶原激活剂药物异质体的检测方法，涉及分析检测技术领域。本发明利用在线毛细管电泳和质谱连接，通过毛细管区带电泳CZE模式对t‑PA进行分离，使用中性涂层毛细管，以酸‑水混合溶液或酸‑乙腈‑水混合溶液作为作为电泳背景缓冲液，采用气压进样，施加分离电压进行毛细管区带电泳完成对t‑PA药物中异质体的有效CZE分离，然后通过电渗流驱动同轴鞘流液电喷雾离子源引入质谱仪进行检测分析，实现t‑PA药物中异质体的高效准确高灵敏度检测。而且，本发明采用的毛细管电泳‑质谱在线联用检测，耗时短、需要的样品量少，为评估t‑PA药物的质量和稳定性提供了一种可靠的手段。

技术研发人员：刘权,洪佳莹,夏强为
受保护的技术使用者：永道致远科学技术（上海）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15