一种基于气相色谱-质谱法的酒中生物胺含量的检测方法与流程

本发明属于分析检测，具体涉及一种基于气相色谱-质谱法的酒中生物胺含量的检测方法。

背景技术：

1、生物胺(biogenic amines，bas)是一类含氮的低分子质量碱性有机胺类化合物，具有生物活性，是由对应的氨基酸通过生物作用脱羧形成，也可通过醛类、酮类有机物在氨基酸转氨酶作用下产生。生物胺具有一定的生理功能，对内脏功能和免疫系统的代谢过程起到了非常重要的作用，生物胺存在于各类食品中，如乳制品、饮料、鱼类水产品、葡萄酒和黄酒等发酵食品中。生物胺是生命体内的一种正常的活性成份，但摄入过多会引起头痛、呼吸紊乱、心悸、血压变化、腹部痉挛、呕吐等不良生理反应，严重的还会损害人体神经系统和心血管系统，甚至可危及生命。

2、葡萄酒是以新鲜葡萄或葡萄汁为原材料，经发酵酿制而成，葡萄酒中生物胺的含量由葡萄原料品种、国度、气候产区和酿造工艺等影响，且变化很大。有研究表明，葡萄酒中组胺的含量可达10.51mg/l，总生物胺含量在6.34～39.05mg/l之间。经发酵后的葡萄酒中的乙醇会加强生物胺的毒性，因此生物胺在酒类中的限量标准要严于其他产品，部分国家及欧盟组织建立了相应的标准，澳大利亚、瑞士规定葡萄酒中的组胺含量不得高于10mg/l，法国规定不得高于8mg/l，荷兰规定不得高于3.5mg/l，而德国最为严格，规定不得高于2mg/l。我国对于酒类暂未制定相应标准限值。

3、gb 5009.208-2016《食品中生物胺的测定》采用hplc法检测生物胺，当前，气相色谱-质谱法检测生物胺多采用三氟乙酸酐或氯甲酸甲酯进行衍生，氯甲酸甲酯为剧毒试剂，不适合常规使用，三氟乙酸酐衍生条件苛刻，不能有水，且检测步骤繁琐，导致气相色谱-质谱法检测生物胺的方法灵敏度低。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于气相色谱-质谱法的酒中生物胺含量的检测方法。本发明提供的酒中生物胺的检测方法简便、快速，检测灵敏高。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种基于气相色谱-质谱法的酒中生物胺含量的检测方法，包括以下步骤：

4、将待测酒样、碳酸钠溶液和交联聚乙烯吡咯烷酮混合进行净化，得到净化液；

5、将所述净化液和氯甲酸异丁酯混合进行衍生，得到衍生液；

6、将所述衍生液、乙醇和二氯甲烷混合进行液液微萃取，得到待测液；

7、将所述待测液进行气相色谱-质谱检测，得到酒中生物胺的含量。

8、优选的，所述生物胺包括2-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、色胺和章鱼胺中的一种或多种。

9、优选的，所述碳酸钠溶液为饱和碳酸钠溶液，所述待测酒样和饱和碳酸钠溶液的用量比为0.9～1.1ml:0.27～0.33ml。

10、优选的，所述净化液的ph值为9～10。

11、优选的，所述待测酒样和交联聚乙烯吡咯烷酮的用量比为0.9～1.1ml:0.009～0.011g。

12、优选的，所述净化液和氯甲酸异丁酯的体积比为45～55:7。

13、优选的，所述净化液、乙醇和二氯甲烷的体积比为0.4～0.6:0.09～0.11:0.14～0.16。

14、优选的，所述得到酒中生物胺的含量的方法为内标法，所述内标法的内标物为1,7-二庚烷胺。

15、优选的，所述气相色谱-质谱检测的气相色谱条件包括：色谱柱为db-5ms毛细管柱：柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm；进样口温度：220℃；载气：氦气，纯度≥99.999％，流速：1.0ml/min；进样体积：1μl，不分流进样；溶剂延迟时间为12min；柱温程序：初温80℃，保持1min，以10℃/min升至270℃，保持2min，最后以290℃后运行3min。

16、优选的，所述气相色谱-质谱检测的质谱条件包括：电离方式：电子轰击源ei；电离能量：70ev；离子源温度：230℃；传输线温度：280℃；四级杆温度:150℃；测定方式：选择离子监测。

17、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

18、本发明提供的酒中生物胺含量的检测方法，将待测酒样经交联聚乙烯吡咯烷酮(pvpp)净化，氯甲酸异丁酯(ibcf)衍生，二氯甲烷进行液液微萃取后，用气相色谱-质谱法(gc-ms)检测生物胺，灵敏度高，方法定量限为0.2mg/l，完全满足德国等国家对葡萄酒中生物胺(组胺)限量为2.0mg/l的检测需求，检测方法简便、快速，使生物胺的分析更加高效准确。同时本发明采用二氯甲烷进行液液微萃取，能够减少有机溶剂的用量。

19、实施例数据表明，酒样中2-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、色胺和章鱼胺7种生物胺(ba)，葡萄酒b样本在加标2.0mg/l时，平均回收率为81～111.5％，精密度为0.82～6.95％。

技术特征：

1.一种基于气相色谱-质谱法的酒中生物胺含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述生物胺包括2-苯乙胺、腐胺、尸胺、组胺、酪胺、色胺和章鱼胺中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述碳酸钠溶液为饱和碳酸钠溶液，所述待测酒样和饱和碳酸钠溶液的用量比为0.9～1.1ml:0.27～0.33ml。

4.根据权利要求1或3所述的检测方法，其特征在于，所述待测酒样和交联聚乙烯吡咯烷酮的用量比为0.9～1.1ml:0.009～0.011g。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述净化液的ph值为9～10。

6.根据权利要求1或5所述的检测方法，其特征在于，所述净化液和氯甲酸异丁酯的体积比为45～55:7。

7.根据权利要求1或5所述的检测方法，其特征在于，所述净化液、乙醇和二氯甲烷的体积比为0.4～0.6:0.09～0.11:0.14～0.16。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述得到酒中生物胺的含量的方法为内标法，所述内标法的内标物为1,7-二庚烷胺。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测的气相色谱条件包括：色谱柱为db-5ms毛细管柱：柱长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μm；进样口温度：220℃；载气：氦气，纯度≥99.999％，流速：1.0ml/min；进样体积：1μl，不分流进样；溶剂延迟时间为12min；柱温程序：初温80℃，保持1min，以10℃/min升至270℃，保持2min，最后以290℃后运行3min。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测的质谱条件包括：电离方式：电子轰击源ei；电离能量：70ev；离子源温度：230℃；传输线温度：280℃；四级杆温度:150℃；测定方式：选择离子监测。

技术总结
本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种基于气相色谱‑质谱法的酒中生物胺含量的检测方法。本发明提供的酒中生物胺含量的检测方法，将待测酒样经交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)净化，氯甲酸异丁酯(IBCF)衍生，二氯甲烷进行液液微萃取后，用气相色谱‑质谱法(GC‑MS)检测生物胺，灵敏度高，方法定量限为0.2mg/L，完全满足德国等国家对葡萄酒中生物胺(组胺)限量为2.0mg/L的检测需求，检测方法简便、快速，使生物胺的分析更加高效准确。同时本发明采用二氯甲烷进行液液微萃取，能够减少有机溶剂的用量。

技术研发人员：吴平谷,周江平,欧阳萍,姚燕红,王军淋,陈婧,胡争艳,张念华
受保护的技术使用者：浙江省疾病预防控制中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22