一种微波消解-ICP-OES测定维生素K1中铁离子的方法与流程

本发明涉及生物医药，具体涉及一种微波消解-icp-oes测定维生素k1中铁离子的方法。

背景技术：

1、维生素k1(vk1)属于维生素k的一种，又称植物甲萘醌，是一种脂溶性维生素，在自然界中主要以叶绿醌形式存在，绿色植物中维生素k1含量丰富，是肝脏凝血酶原合成的必需物质，可促进凝血酶原(ii因子)及其它凝血因子(viii、ix、x因子)的前体物质羧化反应，进而转变成凝血酶原和相应的凝血因子。临床常用于皮肤黏膜出血、内脏出血、外伤手术后出血、新生儿出血及其他深部组织出血等的治疗。此外，维生素k1还参与骨代谢和细胞生长，具有镇痛、缓解支气管痉挛的作用。维生素k1还可以用于多维食品的添加剂。

2、目前，鉴于维生素k1制备过程中由溶剂、溶剂包材或反应设备等外部来源引入铁离子，导致维生素k1原料药常含有铁杂质，铁离子本身可作为催化剂，在一定的条件下，会催化维生素k1进行降解反应，使原料药和/或制剂产品内部杂质增加，影响原料药和/或制剂产品的质量。成人铁元素建议日摄取量为10～15mg，妊娠期妇女为30mg。铁本身不具有毒性，但当摄入过量或误服过量的铁制剂时也可能导致铁中毒：铁过多所诱导的脂质过氧化反应的增强，使得机体氧化和抗氧化系统失衡，所以需对维生素k1中铁离子含量进行检测和控制。目前检测金属离子的方法首选多元素同时测定的电感耦合等离子体光谱法,或采用与电感耦合等离子体光谱法灵敏度相当的其他方法。

3、因维生素k1检测样品为油状物，直接选用以上的分析方法检测易造成仪器污染、检测完毕后仪器不易清洗，且油状物在分析过程中易干扰仪器导致检测结果不准确，不利于保证维生素k1研发和生产质量的有效控制。

4、鉴于维生素k1中铁离子含量测定尚无相关指导原则和文献报道，因此有必要开发一种准确性高的方法来解决上述技术难点。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种微波消解-icp-oes测定维生素k1中铁离子的方法，此方法准确可靠、专属性强、高效快速、试剂用量少、环境污染小，解决了现有技术中无法准确测定维生素k1中铁离子的问题。

2、为达此目的，本发明采用以下技术方案：

3、本发明提供了一种微波消解-icp-oes测定维生素k1中fe离子的方法，包括以下步骤：

4、步骤(1)：样品预消解：称取维生素k1原料药样品于消解罐中，加入硝酸浸泡，其中样品与强酸的质量体积比为20-30：1；

5、步骤(2)：微波消解处理：启动消解程序；

6、步骤(3)：赶酸并配制待测样品溶液：消解完毕后，打开消解罐加入盐酸和双氧水，其中双氧水与步骤(1)中强酸的体积比为1：1.2-5，进一步优选为1：1.33-2.5；将消解罐置于赶酸器加热赶酸，冷却后定容得到待测样品溶液；

7、步骤(4)：配制方法空白溶液：将样品替换为去离子水，依次按照步骤1～步骤3的方法配制，得到方法空白溶液；

8、步骤(5)：配制线性标准溶液：用稀释液逐级稀释配制浓度为0.002、0.02、0.1、0.5、1.0、2.5、10μg/l的铁标准溶液；步骤(6)：绘制标准曲线：采用电感耦合等离子体发射光谱仪检测各个标准溶液的铁元素强度响应值，以铁元素的强度响应值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线；

9、步骤(7)：样品含量测定：将待测样品溶液和方法空白溶液分别注入电感耦合等离子体发射光谱仪(icp-oes)中，测定铁元素的信号响应值，根据标准曲线得到待测样品溶液中铁元素的浓度，然后计算铁离子含量。

10、铁离子含量计算公式为：维生素k1中铁离子含量(ppm)＝cs/cu；

11、其中，cs为样品溶液中铁离子的浓度，单位为μg/ml；cu为样品溶液的浓度，单位为mg/ml。

12、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(1)中，强酸选自硝酸、氢氟酸、盐酸中的一种或多种。所述强酸优选硝酸，尤其是优级纯或电子级的硝酸，优选为电子级硝酸。

13、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(1)中，样品与强酸的质量体积比可选为20：1，21：1，22：1，23：1，24：1，25：1，26：1，27：1，28：1，29：1或30：1。

14、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(1)中，浸泡时间约为10-24h，浸泡时间可选为11h、12h、13h、14h、15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h或24h。

15、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(2)中，消解程序为，第一步，5min内升温至120℃，并保持10min；第二步，5min内升温至160℃，并保持30min。

16、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(2)中，消解程序消解2-4次。

17、作为本发明的一种实施方式，所述稀释液为盐酸水溶液和硝酸水溶液的混合液；所述盐酸水溶液、硝酸水溶液浓度范围均为0.5-1.5％；所述盐酸水溶液、硝酸水溶液浓度可选为1％。

18、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(3)中，盐酸摩尔浓度范围为6-12mol/l，双氧水浓度范围为10-30％，赶酸器加热至温度范围为160-180℃。

19、作为本发明的一种实施方式，所述盐酸摩尔浓度为6mol/l，双氧水浓度为15％，赶酸器加热至温度为170℃。

20、作为本发明的一种实施方式，所述步骤(3)中，赶酸时间为0.9-1.1h，优选为1h。

21、作为本发明的一种实施方式，所述电感耦合等离子体发射光谱仪的测定条件为，

22、波长：259.940nm；

23、扫描/重复次数：1；

24、重复次数(指读取次数)：3；

25、检测模式：水平；

26、蠕动泵速(rmp)：45；

27、辅助气：0.5l/min；

28、rf功率(无线电射频功率)：1150；

29、雾化器流量：0.5l/min。

30、与现有技术方案相比，本发明具有以下有益效果：

31、1、本发明开发出一种新的微波消解-icp-oes测定维生素k1中铁离子的方法，选择硝酸作为消解液，将样品放入消解罐中进行预消解，待预消解完成后再进行正式的消解程序，消解后加入盐酸和双氧水进行赶酸。硝酸作为一种强氧化剂，能氧化侵蚀有机物质，使维生素k1中铁离子成为可溶性的硝酸盐，有利于电感耦合等离子体发射光谱仪检测铁离子含量。

32、2、本发明增加预消解这一步骤，可将油状物的维生素k1充分消解，破坏其中的有机物从而释放二价/三价铁离子，有利于消解后的水样清澈、透明、无沉淀，避免污染、干扰仪器，助于后续消解程序的消解。此外，预消解可降低分析空白值，有利于精确的检测出铁离子的含量，同时也可消除仪器污染，延长仪器使用寿命，从而保证维生素k1研发和生产质量的有效控制。

33、3、本发明在消解程序结束后加入盐酸和双氧水进行赶酸，利用双氧水和硝酸之间的氧化还原反应，帮助更好赶酸。盐酸在高温下可与难溶氧化物、硫酸盐作用，生成可溶性盐，溶解碳酸盐、氢氧化物、磷酸盐和各种硫化物。现有技术采用在消解程序中加入盐酸，因其对微波消解仪有腐蚀作用，需要严格控制盐酸的用量；而本发明在赶酸过程中加入盐酸，无需考虑微波消解仪的限制，因此盐酸的用量范围有大的选择性。赶酸利于降低酸度、对仪器设备起到保护的作用，避免酸度太高会直接或者间接的影响仪器的使用寿命

34、本发明方法高效快速，消解能力强，省时省力，试剂用量少、节省成本，环境污染小，适合推广应用，对药品的安全性和质量可控性有重要意义。