本发明涉及化学分析方法，具体为伏硫西汀关键起始物料有关物质检测方法。
背景技术：
1、2,4-二甲基苯硫酚是伏硫西汀关键起始物料，其纯度影响后续制备的化合物的质量控制。
2、2,4-二甲基苯硫酚中可能存在包含异构体在内的多种杂质，其本身与可能存在的杂质结构如下表所示：
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5、3,5-二甲基苯硫酚、2,6-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚、2,3-二甲基苯硫酚与2,4-二甲基苯硫酚结构相近，很难分离；1-[(2,4-二甲基苯基)二硫烷基]-2,4-二甲基苯与2,4-二甲基苯硫酚极性差别很大，同一方法下保留时间差别很大。
6、专利技术“一种2,4-二甲基苯硫酚有关物质的检测方法”(申请号：cn201610836937.1)采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，含有阳离子对的磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相的高效液相色谱法测定2,4-二甲基苯硫酚的有关物质，检测3-甲基苯硫酚、4-甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、3,5-二甲基苯硫酚、2,6-二甲基苯硫酚这些杂质的含量，然而，该方法下3,5-二甲基苯硫酚和3,4-二甲基苯硫酚出峰位置重叠，共同记为峰3，无法对这两种杂质分别进行定性和定量。
7、公开专利申请“液相色谱法测定沃替西汀中间体及其同分异构体的方法”(申请号：cn201811018467.3)采用苯基键合硅胶为填料的色谱柱，以磷酸盐溶液-有机相为流动相检测同分异构体2,6-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、3,5-二甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚。在该技术的验证试验中，该检测方法中供试品溶液和同分异构体定位溶液的浓度是0.5mg/ml，该浓度对于有关物质的检测并不可行：对于供试品溶液来说，该浓度较低，即使存在相应杂质，其浓度很可能低于最低检测限，从而影响杂质的准确检出；对于异构体杂质来说，该浓度较高，并非常行业认同的验证浓度(杂质的浓度一般为主成分浓度千分之一或千分之几单位)，无法保证准确定量。
8、可见，对于2,4-二甲基苯硫酚的有关物质测定仍缺乏完善的检测方法。
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了伏硫西汀关键起始物料有关物质检测方法，可实现3,5-二甲基苯硫酚、2,6-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚、2,3-二甲基苯硫酚与2,4-二甲基苯硫酚的良好分离和检出，以及1-[(2,4-二甲基苯基)二硫烷基]-2,4-二甲基苯的有效检测。本发明的技术方案如下所述：
2、伏硫西汀关键起始物料有关物质检测方法，所述起始物料及杂质的结构式如下：
3、
4、采用高效液相色谱法，色谱柱填料为苯基键合硅胶，流动相a为含氨基三乙酸的磷酸二氢铵和磷酸氢二铵混合溶液；流动相b为甲醇；
5、色谱柱柱温为30～40℃；
6、流动相流速为0.9～1.1ml/min；
7、按照如下梯度洗脱程序：
8、在0～15分钟内，流动相a、流动相b的体积比保持62～68:38～32不变；在15～45分钟内，流动相a、流动相b的体积比由62～68:38～32线性渐变至22～28:78～72；在45～60分钟内，流动相a、流动相b的体积比保持22～28:78～72不变；在60～61分钟内，流动相a、流动相b的体积比由22～28:78～72线性渐变至62～68:38～32；在61～70分钟内，流动相a、流动相b的体积比保持62～68:38～32不变，即60分钟后为色谱柱平衡时间。
9、在实施例中提供了流动相的如下梯度洗脱程序：
10、在0～15分钟内，流动相a、流动相b的体积比保持65:35不变；在15～45分钟内，流动相a、流动相b的体积比由65:35线性渐变至25:75；在45～60分钟内，流动相a、流动相b的体积比保持25:75不变；在60～61分钟内，流动相a、流动相b的体积比由25:75线性渐变至65:35；在61～70分钟内，流动相a、流动相b的体积比保持65:35不变，即60分钟后为色谱柱平衡时间。根据本领域的经验，流动相比例在±3％内的变动对于结果影响较小，本领域技术人员可在该范围内调节流动相比例，仍能进行有关物质的准确检测。
11、优选的，所述流动相a的ph值为7～8。
12、进一步的，所述流动相a的ph值为7.6，配制方法为：取磷酸二氢铵0.12g，磷酸氢二铵0.71g，氨基三乙酸0.1g，加水1000ml制得。
13、优选的，流动相流速为1.0ml/min。
14、优选的，柱温为35℃。
15、优选的，所述色谱柱为agilent zobax sb苯基柱，3.5μm，150×4.6mm。
16、进一步的，稀释剂为含1％磷酸的甲醇。
17、在本发明提供的实施例中试验发现，采用甲醇作为稀释剂时，杂质ii-7不稳定，需要现用现配，作为优选的实施例，采用含1％磷酸的甲醇为稀释剂，溶液48小时内稳定性良好。
18、发明人在摸索试验中发现，杂质ii-5和ii-7的难以分离，且各个杂质对于流动相的ph值敏感，保留时间随流动相的ph值变化明显。
19、本方法向流动相中加入氨基三乙酸，可以稳定金属离子，从而达到稳定本品溶液，使该方法能有效准确检出2,4-二甲基苯硫酚中的各杂质。
20、优选的，检测波长为265nm。
21、进一步的，所述有关物质检测方法还包括如下步骤：
22、样品配制：
23、供试品溶液：取2,4-二甲基苯硫酚20mg，精密称定，置10ml量瓶中，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
24、杂质对照品溶液：精密称取各杂质，配制成含杂质ii-4、杂质ii-5、杂质ii-6、杂质ii-7、杂质ii-8、杂质ii-9各20μg/ml、10μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml、2μg/ml的混合溶液；
25、精密量取杂质对照品溶液和供试品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按照对照品外标法计算各个已知杂质的含量，面积归一化法计算未知杂质。
26、在方法开发过程，随着物料厂家变更、杂质策略改变，杂质限度发生变化，杂质对照品配制浓度稍有差异，本发明最终指定的杂质限度为在0.1％～1％范围内，并对检测方法进行了全面的验证，证实本方法专属性好，灵敏度高，重复性好，适合本技术提出的各个杂质的准确定性和定量。
27、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
28、1，本发明针对2,4-二甲基苯硫酚原料药中可能存在的多种杂质，提供了新的有关物质的检测方法，可实现3,5-二甲基苯硫酚、2,6-二甲基苯硫酚、3,4-二甲基苯硫酚、2,5-二甲基苯硫酚、2,3-二甲基苯硫酚与2,4-二甲基苯硫酚的良好分离和检出，以及1-[(2,4-二甲基苯基)二硫烷基]-2,4-二甲基苯的有效检测；
29、2，本发明克服了现有技术中杂质重叠无法分离的问题，有助于杂质的准确定量；通过调整溶剂保证样品溶液的长期稳定；
30、3，本发明实现了高浓度下样品峰、杂质峰之间的良好分离，提高了样品检测浓度，实现杂质的精确定量。