一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法与流程

本发明属于化合物基团的检测，具体而言，涉及一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法。

背景技术：

1、目前，人工瓣膜可以分为生物瓣和机械瓣两种。与机械瓣相比，生物瓣有其公认的优越性。生物瓣膜一般从猪主动脉瓣、猪心包、牛心包等动物膜组织取材，经过交联处理，然后缝制在一定结构的金属支架或高分子支架上。这些动物组织主要组成成分是胶原质和弹性蛋白。由于当前市场上的生物瓣膜产品几乎全部是采用戊二醛进行交联制备而成。但是，戊二醛交联的生物瓣膜寿命有限。另外，临床应用长期结果显示钙化是造成这些产品失功衰败的主要原因之一。而研究表明，引发钙化主要是由于戊二醛的残留醛基导致。因此，对于残留醛基的检测对生物瓣膜的应用具有重要意义。

2、现有技术中关于醛基的检测方法也有描述，例如，申请号为202110936566.5的中国发明专利公开了一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法。该方法包括如下步骤：将戊二醛交联处理后的生物瓣膜材料漂洗，研磨成粉，加入pbs缓冲液研磨成匀浆；在匀浆中加入pbs缓冲液、nad+溶液、乙醛脱氢酶溶液，在20～30℃温度下反应0.5～1.5h；将所得反应液离心，检测上清液的340nm处吸光值，根据戊二醛的标准曲线得到残余醛基的浓度。又如，申请号为202010197664.7的中国发明专利公开了一种生物组织包含的醛基含量的检测方法，包括以下步骤：配制多个具有不同浓度梯度的2,4-二硝基苯肼标准溶液，测定所述多个标准溶液在特定波长处的吸光度值，绘制浓度和吸光度值呈函数关系的标准曲线；配制2,4-二硝基苯肼反应溶液，并测定所述反应溶液在特定波长处的吸光度值a1；将所述2,4-二硝基苯肼反应溶液与生物组织反应，测定反应后溶液在特定波长处的吸光度值a2；基于a1、a2以及所述标准曲线，计算所述生物组织包含的醛基的含量。上述现有技术主要是检测生物组织的残余醛基的含量，对于含量不超标的检测结果那是最理想的方式，但是如果检测到醛基含量超标，则缺乏相应的方法进行去除。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中存在的问题，提供一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法。本发明的方法不仅能够检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，还能够去除含量超标的残余醛基。

2、本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

3、本发明的一个方面提供了一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，包括以下步骤：

4、s1：将戊二醛交联处理后的生物瓣膜材料浸泡于tris-hcl缓冲液中加入试剂a搅拌12-24h，之后取出生物瓣膜材料，得到第一反应液；

5、s2：在所得第一反应液中加入试剂b和nad+溶液常温下搅拌反应0.5-1h，得到第二反应液；

6、s3：将所得第二反应液在10000～15000rpm的转速下离心5～8min，检测上清液的340nm处吸光值，根据戊二醛的标准曲线得到残余醛基的浓度；

7、s4：重复上述步骤s1～s3，再次得到残余醛基的浓度。

8、优选地，所述漂洗时间为6-12h，所述研磨成粉为采用液氮研磨成粉。

9、优选地，所述匀浆、试剂a、nad+溶液以及试剂b按照体积比1:0.125～0.185:1～1.25：0.25～0.29的量加入。

10、优选地，所述nad+溶液的浓度为1～5mmol/l。

11、优选地，所述试剂a的制备过程为：将壳聚糖溶于酸性溶液中，加入二氨基化合物和过硫酸铵于50～60℃搅拌反应10～20h，然后将所得溶液浓缩、透析后，即得试剂a；在上述反应体系中，所述壳聚糖的分子量在1×104～1×106之间；所述壳聚糖、二氨基化合物以及过硫酸铵按照质量比1:0.5-1:0.13-0.19的量加入。

12、优选地，所述二氨基化合物选自4,4'-二氨基二苯醚、3,4'-二氨基二苯醚、对苯二胺、间苯二胺中的一种或几种。

13、优选地，所述的酸性溶液为浓度为30-50wt％的盐酸溶液、硝酸溶液、硫酸溶液中的一种。

14、优选地，所述试剂b的制备过程为：将金属化合物、氧化剂及柠檬酸三乙酯按照质量比1:0.04～0.08:0.5～0.7质量比混合后在固体搅拌混合容器中常温碾磨、混合至粒径为80-100目，常温下干燥30min，制得试剂b。

15、优选地，所述金属化合物选自以下组中的任一种的氯化物或者氢氧化物，该组组成为：钠、钾、镁、钙、铁、锌、锰。

16、优选地，所述氧化剂为次氯酸钠、高铁酸钠、高铁酸钾中的一种或多种。

17、优选地，所述生物瓣膜材料为牛心包、猪主动脉瓣膜、牛颈静脉带瓣管道中的一种。

18、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点：本发明采用两种试剂a和b来检测生物瓣膜材料中的醛基残留浓度，并除去其中的残余醛基。该检测方法操作简单稳定，反应温和高效，成本较高效液相色谱更低，具有一定的创新意义和应用价值。

19、上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。

技术特征：

1.一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述漂洗时间为6-12h，所述研磨成粉为采用液氮研磨成粉。

3.根据权利要求1所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述匀浆、试剂a、nad+溶液以及试剂b按照体积比1:0.125～0.185:1～1.25：0.25～0.29的量加入。

4.根据权利要求1所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述nad+溶液的浓度为1～5mmol/l。

5.根据权利要求1所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述试剂a的制备过程为：将壳聚糖溶于酸性溶液中，加入二氨基化合物和过硫酸铵于50～60℃搅拌反应10～20h，然后将所得溶液浓缩、透析后，即得试剂a；在上述反应体系中，所述壳聚糖的分子量在1×104～1×106之间；所述壳聚糖、二氨基化合物以及过硫酸铵按照质量比1:0.5-1:0.13-0.19的量加入。

6.根据权利要求5所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述二氨基化合物选自4,4'-二氨基二苯醚、3,4'-二氨基二苯醚、对苯二胺、间苯二胺中的一种或几种。

7.根据权利要求5所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述的酸性溶液为浓度为30-50wt％的盐酸溶液、硝酸溶液、硫酸溶液中的一种。

8.根据权利要求1所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述试剂b的制备过程为：将金属化合物、氧化剂及柠檬酸三乙酯按照质量比1:0.04～0.08:0.5～0.7质量比混合后在固体搅拌混合容器中常温碾磨、混合至粒径为80-100目，常温下干燥30min，制得试剂b。

9.根据权利要求8所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述金属化合物选自以下组中的任一种的氯化物或者氢氧化物，该组组成为：钠、钾、镁、钙、铁、锌、锰。

10.据权利要求8所述的检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，其特征在于，所述氧化剂为次氯酸钠、高铁酸钠、高铁酸钾中的一种或多种。

技术总结
本发明公开了一种检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，包括以下步骤：S1：将戊二醛交联处理后的生物瓣膜材料浸泡于Tris‑HCl缓冲液中加入试剂A搅拌12‑24h，之后取出生物瓣膜材料，得到第一反应液；S2：在所得第一反应液中加入试剂B和NAD<supgt;+</supgt;溶液常温下搅拌反应0.5‑1h，得到第二反应液；S3：将所得第二反应液在10000~15000rpm的转速下离心5~8min，检测上清液的340nm处吸光值，根据戊二醛的标准曲线得到残余醛基的浓度；S4：重复上述步骤S1~S3，再次得到残余醛基的浓度。本发明的方法不仅能够检测生物瓣膜材料中残余醛基的方法，还能够去除含量超标的残余醛基。

技术研发人员：马琛明,钦湘,薛云琴
受保护的技术使用者：南京圣德医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/5