25-羟基维生素D校准品冻干粉及其制备方法、检测试剂盒与流程

本发明涉及体外诊断试剂，尤其是涉及一种25-羟基维生素d校准品冻干粉及其制备方法、检测试剂盒。

背景技术：

1、维生素d为类固醇衍生物，属脂溶性维生素。维生素d主要由人体皮肤经紫外线照射后合成，少部分从食物或补充品中摄入。维生素d不仅仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的生理作用，是维持人体健康、细胞生长和发育的必不可少的物质，与多种疾病密切相关。在人体内有两种形式的维生素d，维生素d3(胆钙化醇)和维生素d2(麦角钙化醇)，维生素d在肝脏中通过羟基化作用转化成25-羟基维生素d(25-oh-vd)，然后在肾脏中转换为具有活性的1,25-二羟基维生素d。血清25-oh-vd的高低可以反映人体维生素d的储存水平，并且与维生素d缺乏的临床症状是相关的。

2、25-羟基维生素d(25-oh-vd)是人体内维生素d的主要储存形式，因此，通过检测25-oh-vd可以确定总体维生素d的情况。25-oh-vd检测的临床应用主要与佝偻病(儿童)，骨软化症、绝经后骨质疏松和肾性骨病的诊断、治疗和监测有关。

3、25-羟基维生素d在常温下是固体，具有高度的亲脂性，不溶于水。这就导致传统工艺在制备25-羟基维生素d校准品冻干粉时，容易出现点状团聚，冻干粉复溶时间长、复溶困难等问题。

技术实现思路

1、基于此，有必要提供一种可以解决上述问题的25-羟基维生素d校准品冻干粉。

2、此外，还有必要提供一种上述25-羟基维生素d校准品冻干粉的制备方法。

3、此外，还有必要提供一种包括上述25-羟基维生素d校准品冻干粉的检测试剂盒。

4、一种25-羟基维生素d校准品冻干粉，包括25-羟基维生素d、盐、保护剂、填充剂和表面活性剂，所述填充剂为羟乙基淀粉。

5、在一个实施例中，所述保护剂包括蛋白质类和糖类。

6、在一个实施例中，所述蛋白质类选自酪蛋白、酪蛋白钠盐和酪蛋白水解物中的至少一种；

7、所述糖类选自蔗糖、海藻糖、麦芽糖和乳糖中的至少一种；

8、所述蛋白质类和所述糖类的质量比为0.2％～2％：2％～7％。

9、在一个实施例中，所述25-羟基维生素d、所述盐、所述保护剂、所述填充剂和所述表面活性剂的比例为3～150μg：200mm～250mm：22g～90g：10g～30g：0.2g～1g。

10、在一个实施例中，所述盐为氯化钠，所述表面活性剂为x-100、曲拉通x-114或曲拉通x-405。

11、在一个实施例中，还包括缓冲剂和防腐剂；

12、所述盐、所述缓冲剂和所述防腐剂的比例为200mm～250mm：10mm～60mm：0.02％～0.1％。

13、在一个实施例中，所述缓冲剂为hepes，所述防腐剂为pc300。

14、一种上述的25-羟基维生素d校准品冻干粉的制备方法，包括如下步骤：

15、将25-羟基维生素d、盐、保护剂、填充剂和表面活性剂溶解在水中，得到冻干原料，其中，所述填充剂为羟乙基淀粉；

16、将所述冻干原料在温度为0℃～﹣5℃下持续20min～40min，然后降温至﹣45℃～﹣55℃的条件并持续1.5h～2.5h，再升温至﹣8℃～﹣10℃持续1h～2h，最后再降温至﹣45℃～﹣55℃条件下持续1.5h～2.5h，完成所述冻干原料的预冻；

17、在真空条件下，将预冻后的所述冻干原料升华干燥，得到半成品；以及

18、在真空条件下，将所述半成品解析干燥，得到所需要的25-羟基维生素d校准品冻干粉。

19、在一个实施例中，将预冻后的所述冻干原料升华干燥的操作为：将预冻后的所述冻干原料在1.5h～2.5h内温度由～45℃-﹣55℃升高至﹣24℃-﹣16℃，并持续干燥12h～20h完成升华干燥；

20、将所述半成品解析干燥的操作为：将所述半成品在0.5h～1h内温度由﹣24℃～﹣16℃升高至20℃～30℃，并持续干燥12h～20h完成解析干燥。

21、一种检测试剂盒，用于检测25-羟基维生素d，包括上述的25-羟基维生素d校准品冻干粉。

22、本发明的25-羟基维生素d校准品冻干粉，包括25-羟基维生素d、盐、保护剂、填充剂和表面活性剂，所述填充剂为羟乙基淀粉。羟乙基淀粉可以很好的给25羟基维生素d校准品赋形，使产品形态饱满，从而使得25-羟基维生素d校准品冻干粉在制备时不容易出现点状团聚，此外，与传统的冻干粉相比，本发明的25-羟基维生素d校准品冻干粉复溶时间较短，复溶较为容易。

23、结合说明书测试例部分，本发明的25-羟基维生素d校准品冻干粉不容易出现点状团聚，且复溶时间较短，复溶较为容易。

24、此外，结合说明书测试例部分，羟乙基淀粉还可以提高25-羟基维生素d校准品冻干粉的热稳定效果。

25、此外，由于冻干原料在降温预冻预冻过程中，会由冻干原料底部缓慢向产品上部结冰形成冰晶状态的固体，冻干原料含有保护剂(糖类)和填充剂(羟乙基淀粉)，可以使得冻干原料配方的共晶点温度大致为-9℃，将冻干原料在温度为0℃～﹣5℃下持续20min～40min，使得冻干原料经过预冻平衡处理，让仪器内产品在接近共晶点的温度下几乎保持同时预冻结冰成固态，保证了冻干原料在冻干仪器不同位置的产品的均一性，避免了在冻干仪器不同位置得到的25-羟基维生素d校准品冻干粉之间形成外观差异。

26、此外，本发明的25-羟基维生素d校准品冻干粉的制备方法中，冻干原料降温至﹣45℃～﹣55℃的条件并持续1.5h～2.5h，再升温至﹣8℃～﹣10℃持续1h～2h，从而对冻干原料进行退火处理，避免了冻干原料的上层溶质聚集，冻干预冻退火可以将冻干原料成冰固态回温到共晶点温度下，因为配方中糖类和羟乙基淀粉的存在，原料在从液态转变为冰固态过程中会产生溶质迁移，退火能改变原料冰晶的形态和大小分布，强化结晶，提高产品的玻璃化转变温度，也避免了最终得到的25-羟基维生素d校准品冻干粉出现上下层色泽分离、点状团聚等问题，减少了产品的复溶时间。

27、本发明的25-羟基维生素d校准品冻干粉的制备方法中的预冻程序改变了最终制得的25-羟基维生素d校准品冻干粉的晶核的大小，完美的解决了25-羟基维生素d校准品冻干粉的外观、复溶等问题。

技术特征：

1.一种25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，包括25-羟基维生素d、盐、保护剂、填充剂和表面活性剂，所述填充剂为羟乙基淀粉。

2.根据权利要求1所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，所述保护剂包括蛋白质类和糖类。

3.根据权利要求2所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，所述蛋白质类选自酪蛋白、酪蛋白钠盐和酪蛋白水解物中的至少一种；

4.根据权利要求1～3中任意一项所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，所述25-羟基维生素d、所述盐、所述保护剂、所述填充剂和所述表面活性剂的比例为3～150μg：200mm～250mm：22g～90g：10g～30g：0.2g～1g。

5.根据权利要求4所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，所述盐为氯化钠，所述表面活性剂为x-100、曲拉通x-114或曲拉通x-405。

6.根据权利要求4所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，还包括缓冲剂和防腐剂；

7.根据权利要求6所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉，其特征在于，所述缓冲剂为hepes，所述防腐剂为pc300。

8.一种权利要求1～7中任意一项所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

9.根据权利要求8所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉的制备方法，其特征在于，将预冻后的所述冻干原料升华干燥的操作为：将预冻后的所述冻干原料在1.5h～2.5h内温度由～45℃-﹣55℃升高至﹣24℃-﹣16℃，并持续干燥12h～20h完成升华干燥；

10.一种检测试剂盒，用于检测25-羟基维生素d，其特征在于，包括如权利要求1～7中任意一项所述的25-羟基维生素d校准品冻干粉。

技术总结
本发明公开了一种25‑羟基维生素D校准品冻干粉及其制备方法、检测试剂盒，25‑羟基维生素D校准品冻干粉包括25‑羟基维生素D、盐、保护剂、填充剂和表面活性剂，填充剂为羟乙基淀粉。本发明的25‑羟基维生素D校准品冻干粉的填充剂为羟乙基淀粉。羟乙基淀粉可以很好的给25羟基维生素D校准品赋形，使产品形态饱满，从而使得25‑羟基维生素D校准品冻干粉在制备时不容易出现点状团聚。结合说明书测试例部分，本发明的25‑羟基维生素D校准品冻干粉不容易出现点状团聚，且复溶时间较短，复溶较为容易，羟乙基淀粉还可以提高25‑羟基维生素D校准品冻干粉的热稳定效果。

技术研发人员：袁名泽,余金龙,颜栋,王兴红
受保护的技术使用者：深圳市科曼医疗设备有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/8