一种南瓜子及制剂的特征图谱、构建方法及质量检测方法与流程

本发明属于中药制剂质量检测，具体涉及一种南瓜子药材及制剂的特征图谱，并进一步公开所述特征图谱的构建方法，以及南瓜子药材及制剂的质量检测方法。

背景技术：

1、南瓜子又称南瓜仁、白瓜子、金瓜子，为葫芦科南瓜属植物南瓜cucurbitamoschata(duch.)poiret.的种子，在秋季采摘成熟果实，取出种子后洗净晒干得到。现代药理研究表明，南瓜子油润且富含油脂，含有丰富的氨基酸、不饱和脂肪酸、谷固醇、磷脂、单糖类、维生素、蛋白质、胡萝卜素、生物碱类等多种化合物，以及锌、镁、铁等人体所必需的营养元素。南瓜子性味甘平，归味经、大肠经，有驱虫、润肠通便、健脾、利水、下乳的作用。南瓜子具有驱除寄生虫、降低ldl胆固醇、抗炎、抗氧化、缓解高血压、降低膀胱和尿道压力等作用，且毒性很小，常用于大便秘结，以及肠道丝虫、蛲虫、蛔虫、绦虫驱虫等。南瓜子中含有大量磷脂，经常吃南瓜子可防止矿物质在人的尿道系统凝结，使之随尿排出体外，可以预防肾结石的发生。更重要的是，南瓜子中的活性成分和丰富的锌元素，对前列腺有保健作用，经常吃南瓜子，对预防和改善男子前列腺疾病具有很好的药用功效。同时，南瓜子同时也是一味药食两用的中药。

2、目前，南瓜子未被收载于《中国药典》中，虽然有省市的中药材标准、中药饮片炮制规范等收载了南瓜子，但研究参考较为局限。尤其是目前文献中尚未见到关于南瓜子指纹图谱的研究报道。

3、如中国专利cn107389845a公开了一种南瓜子的高效液相色谱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，即利用hplc法建立南瓜子提取物指纹图谱，以南瓜子醇提物为研究对象，10批南瓜子醇提物样品特征图谱中有18个共有峰，但多批中南瓜子药材的相似度差异较大，且图谱中特征峰较为集中，系统适应性参数缺失，图谱分离度可能难达标，峰对称度较差，供试品前处理方法较为复杂，影响其方法使用局限性很大。

4、因此，为科学有效地控制其内在质量，有必要建立南瓜子的指纹图谱。

技术实现思路

1、为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种可全面反映南瓜子及其制剂内在质量和用药安全的特征图谱的构建方法；

2、本发明所要解决的第二个技术问题在于提供一种南瓜子及其制剂的质量检测方法。

3、为解决上述技术问题，本发明所述的一种南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，包括对南瓜子及制剂的供试品溶液进行高效液相色谱检测的步骤；

4、色谱条件包括：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以水为流动相b，按如下程序进行梯度洗脱：

5、0-10min，a：b为0→4％：100％→96％；

6、10-35min，a：b为4％→7％：96％→93％；

7、35-42min，a：b为7％→22％：93％→78％；

8、42-50min，a：b为22％→36％：78％→64％。

9、具体的，所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，所述高效液相色谱检测步骤中，色谱条件还包括：柱温22-28℃，流速为0.8-1.2ml/min，检测波长为210nm。

10、具体的，所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，所述供试品溶液的制备方法包括：取供试品加水进行加热回流提取，滤过并收集续滤液，即得。

11、具体的，所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，所述方法还包括制备对照药材参照物溶液的步骤，具体包括：取南瓜子对照药材，加水进行加热回流提取，滤过并收集续滤液，即得所需对照药材参照物溶液。

12、具体的，所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，所述方法还包括制备对照品参照物溶液，以及，基于所述高效液相色谱法构建对照品指纹图谱的步骤；

13、所述对照品包括苯丙氨酸。

14、具体的，所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，所述南瓜子制剂包括南瓜子配方颗粒或南瓜子饮片标准汤剂。

15、本发明还公开了一种南瓜子及制剂的特征图谱和/或对照特征图谱，所述南瓜子及制剂的特征图谱和/或对照特征图谱由所述方法构建得到。

16、具体的，供试品色谱中应呈现13个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的13个特征峰保留时间相对应。其中，峰7应与相应的对照品参照物峰的保留时间相对应，与苯丙氨酸对照品参照物峰相对应的峰为s峰；计算其余各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：0.27(峰1)、0.37(峰2)、0.49(峰2)、0.53(峰4)、0.60(峰3)、0.71(峰6)、1.10(峰8)、1.28(峰9)、1.40(峰10)、1.85(峰11)、2.22(峰12)、2.31(峰13)。

17、本发明还公开了所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法和/或所述南瓜子及制剂的特征图谱和/或对照特征图谱在南瓜子及其药物制剂质量检测领域的应用。

18、本发明还公开了一种南瓜子及其药物制剂的质量检测方法，包括按照所述方法构建所述特征图谱和对照特征图谱的步骤，以及，将所述特征图谱与对照特征图谱进行比较的步骤。

19、具体的，所述南瓜子及其药物制剂的质量检测方法，还包括进行薄层色谱鉴别的步骤；

20、具体的，所述薄层色谱鉴别的步骤包括：

21、取供试品加入稀乙醇进行超声，滤过并收取滤液蒸干，取残渣加稀乙醇溶解，得到所需供试品溶液；

22、取丙氨酸对照品加稀乙醇混匀，得到所需对照品溶液；

23、按照薄层色谱法试验，以体积比为15：4：5：5的正丁醇-甲醇-冰乙酸-水为展开剂，进行薄层色谱检测。

24、本发明所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，基于hplc方法建立南瓜子原药材及南瓜子水提药物制剂的特征图谱方法，并通过对检测方法的优化，色谱条件容易实现，供试品处理方法制作简便。该分析方法验证结果表明，该方法操作简便，结果准确，方法重现性较好，可全面展现南瓜子的化学成分，扩宽南瓜子的使用途径。

25、本发明所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，以药材及其相关制剂为研究对象，确认了13个共有特征峰，指认了苯丙氨酸和酪氨酸2个特征成分，在该色谱条件下，通过对南瓜子药材及其相关制剂的检测，所建立的特征图谱特征成分显著、分离效果好，可以简单、快速的鉴定南瓜子中药材及其相关制剂(标准汤剂冻干粉、配方颗粒)中所含化学成分的种类和数量。

26、本发明所述南瓜子及制剂的特征图谱构建方法，提供了特征图谱色谱条件优化过程，方法学验证过程及多批次药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒检测结果，确认了13个共有特征峰，指认了苯丙氨酸和酪氨酸2个特征成分；薄层鉴别提供了方法学及其多批检测结果。所建立的南瓜子特征图谱及薄层鉴别方法为南瓜子药材及相关制剂鉴别提供一种快速、可靠的检测方法，也为南瓜子药材及药物制剂提供一种更为全面、客观、快速的质量评价方法，同时对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。

27、本发明所述南瓜子及其药物制剂的质量检测方法，基于上述建立的特征图谱及薄层色谱法进行鉴别，以药材及其相关制剂为研究对象，确认了13个共有特征峰，指认了苯丙氨酸以及酪氨酸2个特征成分，在该色谱条件下，通过对南瓜子药材及其相关制剂的检测，以南瓜子水溶性成分，建立了南瓜子药材及南瓜子药物制剂的特征图谱方法以及薄层鉴别方法，且薄层鉴别方法rf值较好，斑点较为明显，图谱所展示的结果较为清晰，能够全面反映南瓜子药材及南瓜子药物制剂内在质量和用药安全，为南瓜子药材的鉴别提供一种快速、可靠的检测方法。