一种头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法与流程

本发明涉及药品检测分析，尤其涉及一种头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法。

背景技术：

1、头孢硫脒是第一代头孢菌素，对革兰阳性菌作用较强，头孢硫脒也会形成高分子聚合物，尤其对葡萄球菌和肠球菌具有很强的抗菌活性，临床应用较为广泛。由于其基本结构同已上市的许多半合成的β内酰胺类抗生素一样，会在临床使用中引发速发型过敏反应，对患者危害极大。通过控制聚合物杂质可控制过敏反应的发生。已有的注射用头孢硫脒国家药品标准未将头孢硫脒高分子聚合物列为检定项目，国内的药学研究也主要集中在头孢硫脒的合成与纯化。对头孢硫脒及其制剂的纯度、含量及相关杂质测定，以及其降解产物的检测等方面研究较少。从临床用药安全性考虑，我国已在此类药品注册和上市药品质量检验中要求检定高分子聚合物。除聚合物杂质外，头孢硫脒还存在一些小分子杂质。对药品中杂质的检测分析与控制是药品质量控制的重点。

2、目前有研究公开采用分子排阻色谱法(参照中国药典2020年版四部通则0514)对头孢硫脒杂质进行检测，能够检测出聚合物杂质，但是在实际应用过程中发现：由于头孢硫脒中杂质种类较多，有些杂质的分离度较差，一个杂质峰里有多个小分子杂质同时存在，该方法的专属性较差。另一种采用高效液相色谱法hplc(参照中国药典2020年版四部通则0512)进行检测，公开号为cn 116539742 a中国专利申请公开了一种头孢硫脒及其制剂中的聚合物杂质的hplc检测方法，使用高效液相色谱法(hplc)对头孢硫脒及其制剂中的聚合物杂质进行分离测定，其中聚合物杂质为头孢硫脒与7-aca、头孢硫脒β-内酰胺环水解物以及头孢硫脒β-内酰胺环水解脱羧物形成的二聚体、三聚体和多聚体，该方法以球状亲水硅胶为填充剂，并以缓冲盐-有机相溶液作为流动相，该方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高等优点，但该方法只对保留时间小于头孢硫脒峰的杂质峰的总量进行限定，并未考虑小分子杂质对检测的影响，不利于控制聚合物单个杂质含量。

技术实现思路

1、针对以上不足，本发明提供一种头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，能够分离并检出头孢硫脒所有的潜在杂质，可以更好的控制聚合物单个杂质含量，具体技术方案如下：

2、一种头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，包括以下步骤：

3、(1)配制供试品溶液：取头孢硫脒供试品，加水溶解并稀释，得到供试品溶液；

4、(2)配制对照品溶液：分别取头孢硫脒八种已知杂质对照品，加入稀释剂溶解并稀释，得到对照品母液；取对照品母液加水稀释，得到对照品溶液；

5、所述八种已知杂质对照品分别为头孢硫脒杂质a、b、c、d、氧化杂质、6r,7s-异构体、7-氨基头孢烷酸、1,3-二异丙基硫脲；

6、(3)测定：采用高效液相色谱-质谱联用方法进行检测，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a：0.01mol/l乙酸铵溶液，加冰乙酸调节ph至6.30，流动相b：乙腈，流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为30～40℃，进样量10～20μl；按体积百分比，梯度洗脱程序为：

7、0-15min，流动相a保持90％，流动相b由10％；

8、15-39min，流动相a由90％至84％，流动相b由10％至16％；

9、39-53min，流动相a由84％至60％，流动相b由16％至40％；

10、53-68min，流动相a由60％至20％，流动相b由40％至80％；

11、68-78min，流动相a保持20％，流动相b保持80％；

12、78-83min，流动相a由20％至90％，流动相b由80％至10％；

13、83-90min，流动相a保持90％，流动相b保持10％。

14、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，质谱条件：q-tof：agilent 6530q-tof ms；模式：正离子，targetedmsms模式；离子源：dualajs esi；离子源参数：雾化气温度：320℃；干燥气流速8l/min；雾化气压力：35psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11l/min；毛细管末端电压：120v；离子扫描范围：ms：100-1100m/z；ms2：100-1100m/z；轰击电压：10、20、30v；采样频率：ms：2spectra/s；ms2：3spectra/s。

15、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，所述色谱条件中，色谱柱型号为kromasil 100-5c18，4.6mm×250mm，5μm；柱温为40℃，进样量20μl。

16、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，所述步骤(1)中，供试品溶液中头孢硫脒浓度为0.4～0.6mg/ml。

17、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，供试品溶液中头孢硫脒浓度为0.5mg/ml。

18、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，所述稀释剂为磷酸盐缓冲液与乙腈的混合溶液，磷酸盐缓冲液与乙腈体积比为90:10。

19、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，所述磷酸盐缓冲液的配制为：取无水磷酸氢二钠2.76g，枸橼酸1.29g，加水溶解并稀释成1000ml，得到磷酸盐缓冲液。

20、优选的，上述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法中，所述步骤(2)中，取头孢硫脒杂质对照品各2.5mg，至10ml容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，得各杂质母液；分别移取杂质c母液0.5ml、除杂质c外其他杂质母液1ml，至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，得到对照品溶液。

21、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

22、1.本发明的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，可以同时分离并检出头孢硫脒所有潜在杂质，包括八种头孢硫脒已知杂质和两个聚合物杂质，同时还对杂质分子量进行定性分析，推断得到聚合物杂质的结构，可以更好的控制聚合物单个杂质含量。

23、2.本发明的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，使用一个检测系统，通过一次测定就可同时检测多种杂质的含量，操作简便，分离度好，准确性高，为严格控制头孢硫脒的质量提供可可靠的检验基础。

技术特征：

1.一种头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，质谱条件：q-tof：agilent 6530q-tof ms；模式：正离子，targetedmsms模式；离子源：dualajsesi；离子源参数：雾化气温度：320℃；干燥气流速8l/min；雾化气压力：35psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11l/min；毛细管末端电压：120v；离子扫描范围：ms：100-1100m/z；ms2：100-1100m/z；轰击电压：10、20、30v；采样频率：ms：2spectra/s；ms2：3spectra/s。。

3.根据权利要求1所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，所述色谱条件中，色谱柱型号为kromasil 100-5c18，4.6mm×250mm，5μm；柱温为40℃，进样量20μl。

4.根据权利要求1所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中，供试品溶液中头孢硫脒浓度为0.4～0.6mg/ml。

5.根据权利要求4所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，供试品溶液中头孢硫脒浓度为0.5mg/ml。

6.根据权利要求1所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，所述稀释剂为磷酸盐缓冲液与乙腈的混合溶液，磷酸盐缓冲液与乙腈体积比为90:10。

7.根据权利要求6所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的配制为：取无水磷酸氢二钠2.76g，枸橼酸1.29g，加水溶解并稀释成1000ml，得到磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求7所述的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中，取头孢硫脒杂质对照品各2.5mg，至10ml容量瓶中，加稀释剂解并稀释至刻度，得各杂质母液；分别移取杂质c母液0.5ml、除杂质c外其他杂质母液1ml，至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，得到对照品溶液。

技术总结
本发明涉及药品检测分析技术领域，具体公开了一种头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，包括：配制供试品溶液；配制对照品溶液：分别取头孢硫脒八种已知杂质对照品，配制对照品溶液；采用高效液相色谱‑质谱联用方法进行检测，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A：0.01mol/L乙酸铵溶液，加冰乙酸调节pH至6.30，流动相B：乙腈，进行梯度洗脱；流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为30～40℃，进样量10～20μl。本发明的头孢硫脒及其制剂中聚合物杂质的检测方法，能够同时可以分离并检出头孢硫脒所有潜在杂质，包括2个聚合物杂质，同时还对杂质分子量进行定性分析，推断得到聚合物杂质的结构，可以更好的控制聚合物单个杂质含量。

技术研发人员：欧世强,谢鹏,刘世称,覃金,黄彩蜜,唐路秀,石殷华,龙玉婷,秦依萍,潘玉婷,梁晓婷,廖红玲
受保护的技术使用者：广西科伦制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19