一种利用气质色谱法检测通络祛痛膏浸膏挥发性成分含量的方法与流程

一、本发明涉及中成药质量控制领域，特别是一种利用气质色谱法检测通络祛痛膏浸膏挥发性成分含量的方法。

背景技术：

0、二、背景技术

1、通络祛痛膏是治疗骨性关节病的中成药橡胶贴膏，处方中含有当归、川芎、花椒、胡椒、丁香、肉桂、荜茇、干姜、山奈、红花、大黄11种中药材：药材提取方法为：大黄、红花粉碎成粗粉，备用；其余当归等九味，粉碎成粗粉，蒸馏提取挥发油，收集挥发油，备用；药渣控干后与大黄、红花粗粉混合，用90％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集初漉液1000ml，药渣继续用70％乙醇渗漉，收集续漉液2500ml，合并渗漉液，减压浓缩至相对密度不低于1.25的稠膏(60℃)，备用。这些药材多含有较多挥发油，且具有明显的药理作用，每个药材挥发油中都含有种类较多的化学成分，是通络祛痛膏发挥疗效的重要物质基础，代表成分如当归和川芎中共有的蒿本内酯；川芎中的对庚基苯酚；花椒中的芳樟醇、α-山椒素，丁香中的丁香酚；肉桂中的桂皮醛、α-胡椒烯；干姜中的姜烯、β-倍半水芹烯、β-甜没药烯；荜茇中的大根香叶烯；胡椒中的β－丁香烯；山奈中的反式对甲氧基桂皮酸乙酯。这些挥发油类成分具有镇痛、抗焦虑、镇静催眠、抗炎、抗肿瘤、抗菌等药理活性，在临床实践当中发挥消炎镇痛、抑制血小板凝聚作用。

2、通络祛痛膏浸膏作为药材提取物，承载着药品发挥药效的物质基础，在产品生产过程起到承上启下的作用，目前，作为中间产品的通络祛痛膏浸膏，其内控标准相对简单，多参考化学药品评价思路，对化学成分含量相对较高的药材进行鉴别和含量控制，指标孤立，质量代表性不强；另外，作为浸膏中主要存在的并发挥有效功能的挥发油成分，没有相对完整的能够代表处方药材整体质量的控制指标和方法，无法直观判断批次间挥发油质量差异，进而使浸膏整体质量判断出现盲区。气质色谱法是鉴别和检测挥发油物质的有效方法，逐渐被药品质量控制使用和推广；另外，中药特征图谱作为一种多指标的质量控制模式，是评价复杂中药材及其制剂的一种方法，能较全面反映评价物的整体轮廓特征，并进一步与其药理活性相关联，对于完善目前的质量控制方法，保证临床用药的安全有效是十分必要的。

技术实现思路

0、三、
技术实现要素：

1、针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种利用气质色谱法检测通络祛痛膏浸膏挥发性成分含量的方法，可有效完善现有质量评价方法存在的不足，指导提取生产过程。

2、本发明解决的技术方案是，该利用气质色谱技术检测通络祛痛膏浸膏挥发性成分的方法，包括以下步骤：

3、1)色谱条件的确定：

4、气相色谱条件：agilent db-5ms毛细管色谱柱，30m×0.25mm，膜厚度0.25μm；载气为高纯氦气，纯度：99.999％；柱温为程序升温：初始温度45℃，保持2min，以0.8℃/min-1升至52℃,保持15min，以1.5℃/min-1升至103℃,保持40min，以1.7℃/min-1升至160℃,保持5min，以2.0℃/min-1升至210℃,保持30min，以4.0℃/min-1升至230℃,保持10min；进样口温度220℃；进样量1μl；柱流量0.8ml/min；分流比为5:1，理论塔板数按芳樟醇峰计不低于6000；

5、质谱条件为：电子轰击离子源；电子能量70ev；离子源温度：230℃；接口温度：230℃；四级杆温度150℃；质量扫描范围30-600m/z全扫描；溶质延迟5.5min；后运行在240℃保持10min；调谐文件为标准调谐；

6、2)对照品溶液的制备：

7、精密称取柠檬烯10.12mg、芳樟醇10.06mg、β－丁香烯10.13mg、丁香酚10.05mg、对甲氧基肉桂酸乙酯10.15mg，分别置于10ml容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液，分别精密吸取芳樟醇、丁香酚对照品储备液2ml，柠檬烯、β－丁香烯、对甲氧基肉桂酸乙酯对照品储备液1ml，置同一20ml容量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液；

8、3)供试品溶液的制备：

9、精密称取取通络祛痛膏浸膏样品5g，置250ml圆底烧瓶中，加入蒸馏水100ml，照挥发油测定法试验，自测定器上端加水使充满刻度部分，并溢流入烧瓶为止，再加乙酸乙酯2ml，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸5小时，放冷，分取乙酸乙酯液，通过铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液置10ml量瓶中，用乙酸乙酯依次洗涤冷凝管、挥发油测定器、漏斗，洗涤液与上述乙酸乙酯液合并，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，滤过，吸取续滤液1μl，注入气相色谱仪，测定，即得；

10、4)特征图谱的建立与评价

11、取16批通络祛痛膏浸膏样品按步骤3)方法制备供试品溶液，精密吸取1ul，分别注入气质色谱仪，在步骤1)色谱质谱条件下进样分析，根据所得色谱图中各色谱峰的相对保留时间，确定共有峰，并选取其中53个共有峰作为特征峰建立对照特征图谱；其中以23号峰为参照峰s，计算各色谱峰保留时间与同一图谱中s峰的保留时间比值，得到的相对保留时间比值；

12、5)确定通络祛痛膏浸膏挥发性成分与药材的相关性

13、分别吸取通络祛痛膏浸膏供试品溶液、与制剂等生药量的各单味药材供试品溶液、缺单味药材阴性对照品溶液(将其中一味药材去除后制备的对照品溶液)，将通络祛痛膏浸膏中挥发性成分的特征图谱与当归、川芎、花椒、胡椒、丁香、肉桂、荜茇、干姜、山奈、红花、大黄11味单味药材和缺单味药材阴性对照溶液的gc-ms特征图谱进行比较，对比各色谱峰的相对保留时间，确定共有峰主要来源。

14、所述的通络祛痛膏浸膏挥发性成分的gc-ms标准对照特征图谱是由53个共有峰构成，样品的特征图谱相对于对照特征图谱的相似度均在0.9以上，以对照品对照，9号峰为柠檬烯、23号峰为芳樟醇、24号峰为β－丁香烯、44号峰为丁香酚、53号峰为对甲氧基肉桂酸乙酯，以芳樟醇为参照物，23号峰为参照峰，该标准对照特征图谱具有53个共有特征峰，与参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±1％之内。

15、所述的标准对照特征图谱相对保留时间均值为0.128(峰1)、0.132(峰2)、0.159(峰3)、0.203(峰4)、0.261(峰5)、0.286(峰6)、0.293(峰7)、0.313(峰8)、0.356(峰9)、0.372(峰10)、0.453(峰11)、0.466(峰12)、0.488(峰13)、0.517(峰14)、0.542(峰15)、0.636(峰16)、0.779(峰17)、0.810(峰18)、0.822(峰19)、0.865(峰20)、0.886(峰21)、0.912(峰22)、1.000(峰23)、1.057(峰24)、1.078(峰25)、1.108(峰26)、1.200(峰27)、1.264(峰28)、1.323(峰29)、1.371(峰30)、1.392(峰31)、1.408(峰32)、1.431(峰33)、1.502(峰34)、1.521(峰35)、1.565(峰36)、1.587(峰37)、1.701(峰38)、1.812(峰39)、2.060(峰40)、2.152(峰41)、2.169(峰42)、2.180(峰43)、2.233(峰44)、2.316(峰45)、2.326(峰46)、2.386(峰47)、2.397(峰48)、2.420(峰49)、2.457(峰50)、2.526(峰51)、2.569(峰52)、2.618(峰53)。

16、本发明利用气质色谱法检测通络祛痛膏浸膏挥发性成分含量的方法在通络祛痛膏浸膏药品质量标准与质量控制中的应用。

17、本发明经方法学验证其精密度、重复性及稳定性好，简便、可行，能快速测定不同指标成分，准确度高，能更好的评价通络祛痛膏浸膏的质量，是通络祛痛膏浸膏挥发性成分特征图谱建立方法上的创新。