一种TNFα抗药抗体的检测方法及检测试剂盒与流程

本申请涉及药物检测领域，特别涉及一种tnfα抗药抗体的检测方法及检测试剂盒。

背景技术：

1、治疗性单克隆抗体药物历经40余年的发展，已经成为全球生物制药市场最重要的品类之一。单抗药物具有特异性高、靶向性强和毒副作用低等特点，在疾病治疗上具有广阔的应用前景，现已被用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病和移植排斥反应等多种疾病。

2、随着单抗药物的临床应用不断扩大，暴露出来的临床问题也逐渐增多，最常见的问题是初始治疗无应答和治疗过程中出现失应答。

3、发生失应答的原因有两个：第一个是性别、体重和代谢等原因导致的个体差异；第二个原因是血清药物浓度，如果血清药物浓度太低，可能会因免疫原性诱导产生抗药抗体(anti-drug antibody,ada)。

4、监测药物浓度和抗药物抗体(ada)的浓度有助于医生根据患者的个人需求调整治疗方案，并确保长期治疗的成功率。

5、tnf-α即肿瘤坏死因子α，是tnf超家族的配体。它是一种多效细胞分子，在炎症、细胞凋亡和免疫系统发育中起着核心作用。

6、tnf-α由巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、cd4+t细胞、nk细胞分泌。许多转化细胞分泌tnf-α。tnf-α属于促炎细胞因子，参与正常炎症反应和免疫反应，可以协同调节其它细胞因子的产生、细胞存活和死亡来协调组织的稳态。

7、抗-tnfα抗体：英夫利西单抗、依那西普、阿达木单抗和戈利木单抗。药品信息见下表：

8、

9、

10、其中，英夫利西单抗是第一个在美国上市的tnf-α抑制剂，属于人鼠嵌合单抗。依那西普在1998年在美国上市，是第二个上市的tnf-α抑制剂，通过dna重组技术融合了tnf-α受体(tnfr2)和人抗体恒定区的融合蛋白，获批之初用于治疗中度到重度的类风湿性关节炎，之后陆续获批多个适应症。阿达木单抗是全球上市的第一个全人源单克隆抗体，也是tnf-α抑制剂中获批最多适应症(10种)的药品。戈利木单抗也是一种全人源化抗tnf-α的单克隆抗体药物。具体抗体结构见图1。

11、目前市面上的抗药物抗体(ada)的检测试剂都是采用双抗体夹心法，捕获抗体和检测抗体都是采用相应的抗体药。针对的抗抗体的结合位点是相同的，这必然导致和抗抗体的结合效率不高。

12、目前市面上的抗药物抗体(ada)的检测试剂检测的样本都要求样本里的抗体药物浓度不能超过1μg/ml，太高的话会影响检测结果。

技术实现思路

1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本申请的目的在于提供一种tnfα抗药抗体的检测方法及检测试剂盒，用于解决现有技术中的问题。因为抗药物抗体在人体内有的是游离的，有的是和相应的抗体药物结合在一起，本申请检测针对的是人体内游离的抗抗体。

2、为实现上述目的及其他相关目的，本申请第一方面提供一种tnfα抗药抗体的检测方法，包括以下步骤：

3、s1：将包被有tnfα抗体药的fab和/或f(ab')2段的固相载体和样本中的抗药抗体结合得到免疫复合物；

4、s2：在步骤s1中加入二抗进行检测。

5、本申请第二方面提供一种tnfα抗药抗体的检测试剂盒，包括包被有tnfα抗体药的fab和/或f(ab')2段的固相载体、二抗、荧光标记物质。

6、本申请第三方面提供tnfα抗体药的fab和/或f(ab')2段或前述的检测试剂盒在制备tnfα抗药抗体检测产品中的应用。

7、与现有技术相比，本申请的有益效果为：

8、1、本申请的检测方法准确性高，能更准确全面地检测出抗药抗体。

9、2、本申请的抗干扰能力强，在抗体药物浓度超过1μg/ml时也可以检测出抗药抗体，检测浓度干扰在10％之内。

技术特征：

1.一种tnfα抗药抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，包括以下特征中的一种或多种：

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，包括以下特征中的一种或多种：

4.一种tnfα抗药抗体的检测试剂盒，其特征在于，包括包被有tnfα抗体药的fab和/或f(ab')2段的固相载体、二抗、荧光标记物质。

5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体选自磁珠、elisa板、或胶体金；进一步地，所述磁珠选自羧基磁珠。

6.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述二抗为抗人igg抗体。

7.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，二抗为羊抗人抗体、鼠抗人抗体、兔抗人抗体、或马抗人抗体；和/或，二抗为针对人源igg抗体的fc端的抗体。

8.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述荧光标记物质为吖啶酯。

9.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括样品稀释液，所述样品稀释液选自pbs、醋酸钠缓冲液、或tris-hcl缓冲液；

10.tnfα抗体药的fab和/或f(ab')2段或如权利要求4～9任一项所述的检测试剂盒在制备tnfα抗药抗体检测产品中的应用。

技术总结
本申请涉及药物检测领域，特别涉及一种TNFα抗药抗体的检测方法及检测试剂盒。本申请提供一种TNFα抗药抗体的检测方法，包括：S1：将包被有TNFα抗体药的Fab和/或F(ab')2段的固相载体和样本中的抗药抗体结合得到免疫复合物；S2：在步骤S1中加入二抗进行检测。本申请的检测方法准确性高，抗干扰能力强。

技术研发人员：孙旭,姚冬梅,王牧
受保护的技术使用者：上海领检科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25