一种联合检测cTnT和cTnI的试纸条的制作方法

本技术涉及心肌损伤指标检测的，更具体地说，它涉及一种联合检测ctnt和ctni的试纸条。

背景技术：

1、心肌肌钙蛋白t(ctnt)和心肌肌钙蛋白i(ctni)都是心肌检测的指标，研究表明：在对急性心肌梗死(ami)的诊断方面ctni和ctnt无显著差异，都能鉴别出ck-mb所不能检测出的心肌损伤。

2、相关检测方法有：酶联免疫定量检测方法、化学发光免疫分析法和放射性免疫分析法等。其中化学发光免疫分析法因为其较高的灵敏度、抗干扰性以及操作简单等优势被广泛用于ctnt和ctni的检测。

3、目前在临床检测方面ctnt和ctni各有优点：和ctnt相比，ctni检测具更高的特异性，但是还存在无法实现检测结果标准化以及检测结果有性别差异的弊端；和ctni相比，ctnt检测能够实现检测结果标准化和无性别差异，且具有检测窗口期更长以及稳定性更好的优点，但是其还存在特异性低的不足。在临床检测中，例如，在不稳定心绞痛病人中ctnt上升的频度比ctni高；在ami后30天死亡率的预报方面，ctnt检测结果的预测准确率要优于ctni的。

4、因此，仅仅检测一种指标是不够的。目前针对这两种指标的检测方式集中于单独检测某一指标，使得检测效率低，因此提供一种联合检测该两种指标的方法是必要的。

5、就目前应用广泛的免疫层析检测法，一般是制备检测试纸，检测试纸包括样品结合垫、玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜(含有检测线和质控线)以及吸水纸等。检测原理是利用抗原和抗体的特异性结合实现目标物的检测，具体的：在样品结合垫上设置有经固相包被且荧光标记的抗体，例如以纳米微球作为固相载体负载荧光标记的抗体；在检测线处含有检测抗体。抗原分别和两处的抗体结合后在一定条件下发光，通过发光强度和抗原含量的线性关系实现定量检测。

6、以上方法中，检测线中含有抗体，当检测线内的抗体和硝酸纤维素膜的结合不稳定时，使得检测线分散，拖尾严重，从而导致检测结果不可取，需要重新检测。

技术实现思路

1、为了改善检测线拖尾的问题，本技术提供一种联合检测ctnt和ctni的试纸条。

2、本技术提供的一种联合检测ctnt和ctni的试纸条采用如下的技术方案：

3、一种联合检测ctnt和ctni的试纸条，所述试纸条包括卡壳，所述卡壳包括样本结合区以及和所述样本结合区连接的至少两个样本检测区；

4、所述卡壳的样本结合区上设置有样本结合垫，每个所述样本检测区设置有依次搭接的玻璃纤维垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸，所述玻璃纤维垫和所述样本结合垫连接，所述硝酸纤维素膜上设置有检测线和质控线；

5、所述检测线的制备方法包括将检测抗体以检测线稀释液稀释后划线至所述硝酸纤维素膜上的步骤，所述检测线稀释液的组分包括：

6、10-50mm pb缓冲液，5-10wt％氯化钠，0.1-1wt％蔗糖，0.1-1wt％海藻糖，0.01％-0.1wt％bsa，0.05-0.15wt％防腐剂，0.05-0.15wt％表没食子儿茶素没食子酸酯，0.05-0.15wt％1,4-丁二胺。

7、硝酸纤维素膜上具有较多的羟基和硝基，而表没食子儿茶素没食子酸酯是一种多羟基水溶性物质，1,4-丁二胺是一种多氨基物质，通过将表没食子儿茶素没食子酸酯和1,4-丁二胺负载在硝酸纤维素膜上，以显著改变硝酸纤维素膜上的羟基基团量和氨基基团量，使得硝酸纤维素膜上的基团更加丰富。被检测的抗原均是肽类物质，其含有较多的氨基和羧基。通过采用上述技术方案，硝酸纤维素膜上的羟基基团量和氨基基团能够和抗原上的氨基和羧基相互作用，进一步提高硝酸纤维素膜对抗原、抗体等多肽类、蛋白类物质的抓获能力，以及抗原、抗体和硝酸纤维素膜的结合稳定性，从而使得检测时，一旦有对应的抗原存在，则检测线清晰明显，无拖尾情况，从而实现高效、有效地抗原检测。

8、在该方案中，多羟基化合物(例如表没食子儿茶素没食子酸酯)和多氨基化合物(1,4-丁二胺)需要选择为水溶性的，该两类物质溶解在水溶液中之后，通过浸泡硝酸纤维素膜使得该两类物质能够稳定负载在硝酸纤维素膜上，从而发挥其稳定、牢固捕获目标抗原或抗体的作用。

9、可选的，所述检测抗体以所述检测线稀释液稀释后，使得所述检测抗体的含量为0.5-1.5mg/ml。

10、可选的，所述质控线的制备方法包括将质控物以质控线稀释液稀释后划线至所述硝酸纤维素膜上的步骤，所述质控线稀释液的组分包括：10-50mm pb缓冲液，5-10wt％氯化钠，0.1-1wt％蔗糖，0.1-1wt％海藻糖，0.01％-0.1wt％bsa，0.05-0.15wt％防腐剂，0.05-0.15wt％表没食子儿茶素没食子酸酯，0.05-0.15wt％1,4-丁二胺。

11、通过采用上述技术方案，通过负载表没食子儿茶素没食子酸酯和1,4-丁二胺以显著改变硝酸纤维素膜上的基团分布、种类和数量，以显著提高其对抗原、抗体的抓获能力，进而显著改善质控线拖尾的情况。

12、可选的，所述质控物以所述质控线稀释液稀释后，使得所述质控物的含量为0.5-1.5mg/ml。

13、可选的，质控物为羊抗鸡igy或dnp抗原。

14、可选的，所述样本结合垫的制备方法包括将空白玻璃纤维垫以样本稀释液浸泡后干燥的步骤，所述样本稀释液的组分包括：10-200mm pb缓冲液，10-200mm tris缓冲液，0.01-1wt％表面活性剂，0.05-0.15wt％防腐剂，0.2-0.6mg/ml阻断剂，0.5-2wt％酪蛋白钠盐，0.5-2wt％聚乙烯醇，0.05-0.5mg/ml纳米荧光微球标记ctni单克隆抗体，0.05-0.5mg/ml纳米荧光微球标记ctnt单克隆抗体，0.05-0.5mg/ml纳米荧光微球标记质控抗体。

15、一般但检测样本中含有igg等，会对样本检测到来影响，造成假阳性。因此在样本稀释缓冲液中添加阻断剂，该阻断剂可以和hama、类风湿因子rf等结合，以防止这类物质和抗体结合，降低这类物质对检测结果的影响，提高检测结果的准确性。

16、可选的，所述纳米荧光微球标记质控抗体为纳米荧光微球标记鸡igy单克隆抗体或纳米荧光微球标记抗dnp单克隆抗体。

17、在该方案中，样本稀释液中的纳米荧光微球标记质控抗体和质控线上的质控物是对应的。例如，纳米荧光微球标记质控抗体具体选择为纳米荧光微球标记鸡igy单克隆抗体时，质控物为羊抗鸡igy；纳米荧光微球标记质控抗体具体选择为纳米荧光微球标记抗dnp单克隆抗体时，质控物为dnp抗原。

18、可选的，所述表面活性剂选自s9、tween80、tween20、s17中的任意一种或多种。

19、可选的，所述玻璃纤维垫的制备方法包括将空白玻璃纤维垫以玻璃纤维垫溶液浸泡所示玻璃纤维垫后再干燥的步骤，所述玻璃纤维垫的组分包括：10-50mm tris-hcl，0.5-5wt％二糖。

20、通过采用上述技术方案，能够延缓纳米荧光微球标记ctnt单克隆抗体和纳米荧光微球标记ctni单克隆抗体的释放，减少纳米荧光微球标记ctnt单克隆抗体和纳米荧光微球标记ctni单克隆抗体在玻璃纤维垫上的残留，以提高检测结果的准确性。

21、可选的，所述二糖是由质量比为1:(0.5-1.5)的蔗糖和海藻糖组成。

22、可选的，检测一种抗原时，所述检测抗体为所述抗原对应的一种或多种单克隆抗体的混合物。

23、综上所述，本技术具有以下有益效果：

24、1、本技术通过在检测线稀释液中同时添加表没食子儿茶素没食子酸酯和1,4-丁二胺，以实现对硝酸纤维素膜表面的改性，使其表面活性基团(羟基和氨基)的种类和数量更多、更丰富，以实现稳定抓捕目标蛋白的目的，以显著改善检测线拖尾的情况。

25、2、本技术中进一步在质控线稀释液中也同时加入表没食子儿茶素没食子酸酯和1,4-丁二胺，以解决质控线拖尾问题。

26、附图说明

27、图1是本技术试纸条卡壳的结构图；

28、图2是本技术试纸条的整体结构示意图；

29、图3实施例2中ctnt检测的标准曲线图；

30、图4是实施例2中ctni检测的标准曲线图；