一种ELISA试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法与流程

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法。

背景技术：

1、包被物质与板底表面的有效结合是elisa中至关重要的一步。包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被(先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化)。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如bsa等偶联，偶联物吸附于固相载体上。

2、蛋白质在固体表面吸附是现有的最简单的固定抗体的方法，但是，该方法中，抗原由于不是特异性固定，样本中的靶蛋白及其他杂质蛋白都会与酶标板结合，从而使得检测背景较高，且降低了检测的灵敏度。

技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法。

2、本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

3、本发明提供了一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法，包括以下步骤：

4、(1)包被温育：采用点包被模式，将包被液注入酶标板中，每孔注入包被液100±2μl； 将包被好的酶标板进行温育；

5、(2)洗板封闭：洗板2次，每孔加封闭液110±2 ul；

6、（3）二次温育、干燥：将封闭后的包被板在室温下进行温育，温育结束后，弃掉板中封闭液，干燥后即可。

7、进一步的，步骤（1）中，所述包被液为浓度为1μg/ml的重组链酶亲和素（r-sa）溶液；所述溶液为包被缓冲液；所述包被缓冲液为10mm、ph7.4的pbs缓冲液。

8、进一步的，步骤（1）的具体过程为：将包被液注入到酶标板板孔内，在24±2℃下，温育4h；温育结束后,用洗涤液进行洗板2次，洗板后加入生物素化抗原，在24±2℃下，温育反应18-24h。

9、本发明提供的包被方法中，每1000ml封闭液的组成为：na2hpo4·12h2o 5.8g、磷酸二氢钠 0.593g、氯化钠 15g、酪蛋白 10g、改性贻贝粘蛋白5g、硫柳汞钠 0.5g、bsa 30g、蔗糖 100g、山羊血清 200ml、明胶 20ml、d-海藻糖 50g。

10、上述改性贻贝粘蛋白的制备方法为：将贻贝粘蛋白加入超纯水进行稀释，得贻贝粘蛋白混悬液，然后向混悬液中首先加入d-氨基半乳糖，升温至38-45℃，搅拌2h，然后逐滴加入单宁酸溶液，继续保温反应1h，反应结束后，恢复至室温，除去多余的d-氨基半乳糖和单宁酸，干燥即可。

11、进一步的，所述贻贝粘蛋白混悬液的浓度为1.5-2%；所述贻贝粘蛋白和d-氨基半乳糖的质量比为1:4；所述贻贝粘蛋白和单宁酸的质量比为1:1.5。

12、进一步的，所述单宁酸溶液的质量浓度为15%。

13、进一步的，步骤（3）中，所述室温下温育的时间为2-3h。

14、本发明所使用的洗涤液为ph7.4的pbs缓冲液。

15、本发明的有益效果为：本发明提供的包被方法，提高了elisa试剂盒的稳定性，包被效果好，能够节省原料（抗原），同时，检测区间线性系数r值更优，重复性好。

技术特征：

1.一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的包被方法，其特征在于，步骤（1）中，所述包被液为浓度为1μg/ml的重组链酶亲和素（r-sa）溶液；所述溶液为包被缓冲液；所述包被缓冲液为10mm、ph7.4的pbs缓冲液。

3.根据权利要求2所述的包被方法，其特征在于，步骤（1）的具体过程为：将包被液注入到酶标板板孔内，在24±2℃下，温育4h；温育结束后,用洗涤液进行洗板2次，洗板后加入生物素化抗原，在24±2℃下，温育反应18-24h。

4.根据权利要求1所述的包被方法，其特征在于，步骤（2）中，每1000ml封闭液的组成为：na2hpo4·12h2o 5.8g、磷酸二氢钠 0.593g、氯化钠 15g、酪蛋白 10g、改性贻贝粘蛋白5g、硫柳汞钠 0.5g、bsa 30g、蔗糖 100g、山羊血清 200ml、明胶 20ml、d-海藻糖 50g。

5.根据权利要求4所述的包被方法，其特征在于，所述改性贻贝粘蛋白的制备方法为：将贻贝粘蛋白加入超纯水进行稀释，得贻贝粘蛋白混悬液，然后向混悬液中首先加入d-氨基半乳糖，升温至38-45℃，搅拌2h，然后逐滴加入单宁酸溶液，继续保温反应1h，反应结束后，恢复至室温，除去多余的d-氨基半乳糖和单宁酸，干燥即可。

6.根据权利要求5所述的包被方法，其特征在于，所述贻贝粘蛋白混悬液的浓度为1.5-2%；所述贻贝粘蛋白和d-氨基半乳糖的质量比为1:4；所述贻贝粘蛋白和单宁酸的质量比为1:1.5。

7.根据权利要求5或6所述的包被方法，其特征在于，所述单宁酸溶液的质量浓度为15%。

8.根据权利要求1或4所述的包被方法，其特征在于，步骤（3）中，所述室温下温育的时间为2-3h。

技术总结
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种ELISA试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法。该方法通过以下步骤：首先采用点包被模式，将包被液注入酶标板中，每孔注入包被液100±2μl；将包被好的酶标板进行温育；然后进行洗板封闭；二次温育、干燥：将封闭后的包被板在室温下进行温育，温育结束后，弃掉板中封闭液，干燥后即可。本发明提供的包被方法，提高了ELISA试剂盒的稳定性，包被效果好，能够节省原料（抗原），同时，检测区间线性系数R值更优，重复性好。

技术研发人员：白毅,肖晓,刘文娟
受保护的技术使用者：山东帝俊生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22