含有石决明的中药制剂中活性成分的检测方法与流程

本发明涉及药物分析，尤其涉及含有石决明的中药制剂中活性成分的检测方法。

背景技术：

1、国家药品监督管理局公布的古代经典名方目录(第一批)收载有石决明散，其出处为：《普济方》(明·朱橚)“石决明散，治风毒气攻入头系眼昏暗，及头目不利。”处方为：石决明、羌活(去芦头)、草决明、菊花各一两，甘草(炙，剉)半两。制法及用法为：右为散，每服二钱，以水一盏。煎六分，和溶，食后、临卧温服。煮散。本方眼科运用较广，但总不离肝胆二经，多用于肝热、翳障类眼病，现代眼科临床亦宗此旨。

2、此后，根据石决明散进行改良，用荆芥替换羌活，其处方为石决明、决明子、菊花、荆芥、甘草，制成含有石决明的中药制剂，其中：

3、石决明，中药材名。本品为鲍科动物九孔鲍或盘大鲍等的贝壳。夏秋捕捉，捕得后，将肉剥除，取壳，洗净，除去杂质，晒干。药材以九孔鲍的贝壳称为光底海决；盘大鲍的贝壳称为毛底海决。功能主治为：平肝潜阳，清肝明目。用于头痛眩晕，目赤翳障，视物昏花，青盲雀目。

4、决明子，中药材名。是豆科植物决明或小决明的干燥成熟种子，以其有明目之功而名之。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明子味苦、甘、咸，性微寒，入肝、肾、大肠经；润肠通便，降脂明目，治疗便秘及高血脂，高血压。清肝明目，利水通便，有缓泻作用，降血压降血脂。

5、菊花，中药材名。本品为菊科植物菊chrysanthemum morifolium ramat.的干燥头状花序。9～11月花盛开时分批采收，阴干或焙干，或熏、蒸后晒干。药材按产地和加工方法不同，分为“亳菊”、“滁菊”、“贡菊”、“杭菊”、“怀菊”。菊花味甘、苦，性微寒。归肺、肝经。散风清热，平肝明目，清热解毒。用于风热感冒，头痛眩晕，目赤肿痛，眼目昏花，疮痈肿毒。

6、荆芥，中药材名。本品为唇形科植物荆芥schizonepeta tenuifolia briq.的干燥地上部分。夏、秋二季花开到顶、穗绿时采割，除去杂质，晒干。分布于河北、江苏、浙江、江西、湖北和东北三省等地。具有解表散风，透疹，消疮的作用。用于感冒，头痛，麻疹，风疹，疮疡初起。

7、甘草，中药材名。本品为豆科植物甘草glycyrrhiza uralensis fisch.、胀果甘草glycyrrhiza inflata bat.或光果甘草glycyrrhiza glabra l.的干燥根和根茎。分布于东北、华北、陕西、甘肃、青海、新疆、山东等地。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效。常用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。

8、所述含有石决明的中药制剂临床使用为颗粒剂，处方为：石决明250份、决明子250份、荆芥250份、菊花250份、甘草125份、麦芽糖糊精适量，制颗粒1000g。制法为将上述五种药材加纯化水煎煮，重复两次，取滤液浓缩后加麦芽糖糊精制粒、干燥即得。

9、目前，上述经改良的，含有石决明的中药制剂尚未收载于任何标准中，也未见文献报道，缺少对其质量的控制。在该改良后含有石决明的中药制剂中，决明子为石决明中药制剂的君药，橙黄决明素是决明子的指标性成分之一；菊花和荆芥分别为石决明中药制剂的臣药和佐药，木犀草苷是菊花和荆芥共有的指标性成分之一；甘草是为石决明中药制剂的使药，甘草酸铵是甘草的指标性成分之一。

10、因此，亟需构建可以同时检测石决明中药制剂中橙黄决明素、木犀草苷、甘草酸铵的含量方法，为石决明中药制剂提供更加可靠的质量控制方法，保证药物临床疗效。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供含有石决明的中药制剂中活性成分橙黄决明素、木犀草苷和甘草酸铵的检测方法。

2、本发明提供了含有石决明的中药制剂中活性成分的检测方法，其包括：

3、将含有石决明的中药制剂经溶剂提取获得待测液后，采用高效液相色谱对待测液进行检测；

4、色谱参数包括：

5、色谱柱为c18柱；柱温为25℃～40℃；所述流动相为梯度洗脱；

6、流动相a为乙腈，流动相b为0.05％～2％的磷酸溶液。

7、本发明中，所述待测液的制备包括：将含有石决明的中药制剂与溶剂混合后，加热回流15～60分钟，过滤获得待测液。

8、一些实施例中，所述待测液的制备中，溶剂为50vol％～70vol％的甲醇水溶液。具体的，所述溶剂为50vol％的甲醇水溶液、60vol％的甲醇水溶液、70vol％的甲醇水溶液。作为优选，所述溶剂为70vol％的甲醇水溶液。

9、本发明中，所述待测液的制备中，所述含有石决明的中药制剂和溶剂的质量g与体积ml的比为0.5g：(25～50)ml。

10、一些实施例中，所述待测液的制备中，所述含有石决明的中药制剂和溶剂的质量g与体积ml的比为0.5g：25ml、0.5g：30ml、0.5g：35ml、0.5g：40ml、0.5g：45ml或0.5g：50ml。作为优选，含有石决明的中药制剂和溶剂的质量g与体积ml的比为0.5g：25ml。

11、一些实施例中，加热回流的时间为15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min或60min。作为优选，加热回流的时间为30min。

12、本发明中，所述待测液的制备中，过滤前包括冷却后以溶剂补足损失质量的步骤，所述冷却为冷却至室温。所述过滤后取滤液为待测液。

13、本发明所述的检测方法中，所述活性成分包括木犀草苷、橙黄决明素或甘草酸铵中至少一种。

14、本发明所述的检测方法中还包括：

15、制备参照物溶液，将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图，根据参照物的色谱图对含有石决明的中药制剂的成分进行定性、定量分析；

16、所述参照物溶液的制备包括：分别取木犀草苷、橙黄决明素或甘草酸铵中的一种或几种溶解，分别得到参照物溶液；所述溶解的溶剂为50vol％～70vol％的甲醇水溶液。一些实施例中，所述溶解的溶剂为50vol％的甲醇水溶液、60vol％的甲醇水溶液、70vol％的甲醇水溶液。作为优选，所述溶解的溶剂为70vol％的甲醇水溶液。

17、本发明中，所述参照物溶液中，包括木犀草苷、橙黄决明素或甘草酸铵中的任意一种；或者包括木犀草苷和橙黄决明素，包括甘草酸铵和木犀草苷，或包括木犀草苷和橙黄决明素；或者包括木犀草苷、橙黄决明素和甘草酸铵。

18、在含有木犀草苷、橙黄决明素和甘草酸铵的参照物溶液中，木犀草苷的浓度为40μg/ml，橙黄决明素的浓度为20μg/ml，甘草酸铵的浓度为80μg/ml。

19、本发明中，所述梯度洗脱的程序包括：

20、0～6min，流动相a的体积分数为16％；

21、6min～8min，流动相a的体积分数由16％至33％；

22、8min～20min，流动相a的体积分数由33％至36％；

23、20min～24min，流动相a的体积分数由36％至70％；

24、24min～25min，流动相a的体积分数由70％至16％；

25、25min～30min，流动相a的体积分数为16％。

26、本发明中，所述检测方法中，高效液相色谱的检测器为二极管阵列检测器；0～12min检测波长为348nm；12min～14.5min检测波长为284nm；14.5min～30min检测波长为252nm。

27、本发明中，所述检测方法中，所述色谱柱为agilent poroshell ec c18，100mm×4.6mm，2.7μm。

28、本发明中，所述检测方法中的柱温为25℃、30℃或40℃，作为优选，柱温为30℃。

29、本发明中，所述检测方法中，流动相流速为1.4～1.6ml/min。一些实施例中，流动相流速为1.4ml/min、1.5ml/min或1.6ml/min，优选为1.5ml/min。

30、本发明中，所述检测方法中，进样量为1～10μl。一些实施例中，进样量为1μl、5μl或10μl，优选为5μl。

31、本发明中，所述木犀草苷与橙黄决明素的分离度为44.07～49.24，所述橙黄决明素与甘草酸铵的分离度为9.16～12.23。

32、本发明中，所述木犀草苷的线性范围为19.88～795.00ng，所述橙黄决明素的线性范围为11.33～566.5ng，所述甘草酸铵的线性范围为40.03～2001.25ng。

33、本发明中，所述含有石决明的中药制剂的制备原料包括：石决明250质量份、决明子250质量份、荆芥250质量份、菊花250质量份和甘草125质量份。

34、本发明中，所述含有石决明的中药制剂的制备方法包括：将石决明、决明子、荆芥、菊花和甘草，加水煎煮二次，加水量和煎煮时间分别为12倍水2h、10倍水1.5h，滤过，合并滤液，取滤液浓缩后加适量麦芽糖糊精，经制粒、干燥即得。

35、本发明提供的含有石决明中药制剂的检测方法，其至少具有如下有益效果：决明子为石决明中药制剂的君药，橙黄决明素是决明子的指标性成分之一，菊花和荆芥分别为石决明中药制剂的臣药和佐药，木犀草苷是菊花和荆芥共有的指标性成分之一，甘草是为石决明中药制剂的使药，甘草酸铵是甘草的指标性成分之一。本发明首次建立一种可以同时检测橙黄决明素、木犀草苷和甘草酸铵的方法，通过对方法中步骤参数进行合理的优化，本发明提供的方法操作简便，具有良好的专属性、溶液稳定性、线性关系，重复性和准确度。本发明提供的方法为含有石决明的中药制剂提供更加可靠的质量控制方法，保证药物临床疗效。