一种仿生皮肤在化妆品测试中的应用的制作方法

本发明涉及一种仿生皮肤在化妆品测试中的应用，尤其是一种3d打印仿生皮肤在化妆品测试中的应用，属于组织工程皮肤及化妆品测试。

背景技术：

1、化妆品一般有保湿、防晒、除皱等功效，根据化妆品行业的监督管理条例以及指导原则，化妆品功效宣称需要有充足的证据支撑，例如对于化妆品宣称的保湿功效，需要通过一定保湿功效测定方法进行评价。目前化妆品保湿功效的测定方法包括传统的体外称重法、皮肤试验法、角质层含水量测试法、细胞生物法等。另有中国药科大学吴建新团队在cn202110941436中披露的“一种化妆品保湿功效测定方法及装置”采用hacat细胞模拟生物皮肤细胞的失水量，基于mtt比色法进行化妆品保湿功效测定，一定程度上提高了测定结果的准确度。

2、随着3d打印仿生皮肤技术的逐渐成熟，其生理和功能特性与真实皮肤非常接近，这些模型可以模拟真实皮肤的层次结构、细胞类型和生理反应。以校方团队先期研究成果申请号为cn201810463765的“一种生物3d打印全定制皮肤及其制备方法”为例，采用三维扫描建模技术，分层打印，逐层堆叠的方法，打印出人体特定位置、特定厚度、特定形状的皮肤组织，做到了根据实际需要而3d打印仿生皮肤，可应用于皮肤病或皮肤损伤患者的皮肤修复。

3、上述技术除了指出3d打印仿生皮肤可用于人体皮肤修复，还提到3d打印仿生皮肤在体外皮肤模型的研究方面的用途，但并没有提出具体的可行性措施，目前也没有成熟的方案将3d打印仿生皮肤模型及其制备中的3d打印方案规划优势应用到化妆品保湿、防晒、除皱等功效的测试中。

技术实现思路

1、本发明为克服现有技术存在的不足，提供一种仿生皮肤在化妆品测试中的应用方法，尤其是一种3d打印仿生皮肤在化妆品测试中的应用方法，在测试效率和测试准确度方面实现新的突破。

2、本发明提出的具体技术方案为：

3、一种仿生皮肤在化妆品测试中的应用方法，采用3d打印的多个仿生皮肤样品代替受测人体皮肤或者受测细胞样品，用于化妆品功效测试。

4、优选地，在上述应用方法中，所述3d打印的多个仿生皮肤样品用于化妆品保湿、防晒、除皱等功效测试。

5、优选地，在上述应用方法中，所述3d打印的多个仿生皮肤样品用于化妆品保湿功效测试，其包括如下步骤：

6、s1、3d打印仿生皮肤制备

7、使用由人体皮肤组织分离培养的表皮干细胞和真皮干细胞，配合胶原骨架材料，在打印基底上采用3d逐层打印方式打印得到包含真皮细胞层、表皮细胞层和胶原骨架层的第1～m(m≥2)种三维仿生皮肤，经组织培养和融合，在每种三维仿生皮肤上分割出多个同尺寸待测样品，获得可用于化妆品保湿功效测试的多组3d打印仿生皮肤样品，每组包含所述的多个同尺寸受测样品；

8、其中，所述的1～m种三维仿生皮肤采用不同的3d打印规划方案打印而成；

9、s2、化妆品保湿功效测试

10、s2-1、在步骤s1中获得的第1～m组3d打印仿生皮肤受测样品中的每一组受测样品中，选择数量相等的三份受测样品：样品组a、样品组b和样品组c；其中样品组a为实验样品组，样品组b为对比样品组一，样品组c为对比样品组二；

11、s2-2、检测并记录样品组a、样品组b、样品组c中的每个受测样品的皮肤含水量数据；

12、s2-3、对样品组a的每个受测样品涂抹含有基础保水剂和待测化妆品功效原料的溶液，对样品组b和样品组c的每个受测样品涂抹仅含有基础保水剂的溶液，其中，对样品组b的受测样品涂抹的基础保水剂浓度等于对样品组a的受测样品涂抹的基础保水剂浓度，对样品组c的受测样品涂抹的基础保水剂浓度等于对样品组a的受测样品涂抹的基础保水剂和待测化妆品功效原料的合计浓度；

13、s2-4、达到设定时间后，检测并记录样品组a、样品组b、样品组c中的每个受测样品的新的皮肤含水量数据；

14、s2-5、根据步骤s2-2中测得的皮肤含水量数据和步骤s2-4中测得的皮肤含水量数据计算受测样品皮肤含水量变化数据，根据受测样品皮肤含水量变化数据对待测化妆品保湿功效进行评价；

15、s2-6、对由第1～m组3d打印仿生皮肤受测样品获得的化妆品保湿功效评价结果进行组间对照，获得化妆品保湿功效最优评价结果和三维仿生皮肤的最优3d打印方案。

16、优选地，在上述应用方法中，步骤s1包括如下步骤：

17、s1-1、细胞提取

18、人体皮肤组织经破碎、组织酶解、过滤、离心处理得到聚集的细胞，对细胞进行接种培养得到原代皮肤细胞；

19、s1-2、细胞培养

20、将一部分原代皮肤细胞添加rock抑制剂进行传代培养得到所需量的表皮干细胞，将一部分原代皮肤细胞不添加rock抑制剂进行传代培养得到所需量的真皮干细胞；

21、s1-3、3d打印仿生皮肤

22、使用步骤s1-2中得到的表皮干细胞和真皮干细胞，配合胶原骨架材料，在同一打印基底上采用3d逐层打印方式打印得到包含真皮细胞层、表皮细胞层和胶原骨架层的、具有不同的3d打印规划方案的第1～m种三维仿生皮肤，对得到的三维仿生皮肤进行组织培养；

23、s1-4、受测样品制备

24、步骤s1-3中得到的三维仿生皮肤经组织培养和融合后，在每种三维仿生皮肤上分割出多个同尺寸待测样品，获得可用于化妆品保湿功效测试的多组3d打印仿生皮肤样品，每组包含所述的多个同尺寸受测样品。

25、优选地，在上述应用方法中，步骤s1中，所述的不同的3d打印规划方案为不同的层厚规划方案和/或不同的细胞初始浓度规划方案。

26、优选地，在上述应用方法中，步骤s1中，所述三维仿生皮肤中分布的多层胶原骨架材料均通过交联剂固定。

27、优选地，在上述应用方法中，步骤s1中，所述的在每种三维仿生皮肤上分割出多个同尺寸待测样品是在每种三维仿生皮肤上选择厚度、品质均匀区域分割出多个同尺寸待测样品。

28、优选地，在上述应用方法中，步骤s2-3中，所述基础保水剂为所述待测化妆品本身所含成分之外的成分，或者，所述基础保水剂与所述待测化妆品本身存在相同成分。

29、优选地，在上述应用方法中，步骤s2-6中，对由第1～m组3d打印仿生皮肤受测样品获得的化妆品保湿功效评价结果进行组间对照包括：ⅰ、在各组评价结果中剔除明显失真的评价结果；和/或，ⅱ、在各组评价结果中挑选更接近经验值或理论值的结果。

30、优选地，在上述应用方法中，步骤s2-6中，通过一基于3d打印仿生皮肤的第二化妆品保湿功效测试方法对至少一组评价结果进行对照验证。

31、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

32、本发明采用3d打印的多个仿生皮肤样品代替受测人体皮肤或者受测细胞样品，用于化妆品保湿、防晒、除皱等功效尤其是保湿功效测试，能够提供更可靠的测试结果，相比于动物试验或人体试验，使用3d打印的仿生皮肤进行化妆品测试可以节省大量的时间和成本，同时，也便于进行大规模测试，这可以更准确地评估产品的安全性和效果，这有助于减少潜在的安全风险，并确保产品符合质量和安全标准。而且，由于3d打印工艺本身的可规划性，能够通过多种打印规划方案的受测样品设计，在测试过程中不断优化测试评估结果，还能根据测试评估结果反向优化仿生皮肤的3d打印规划方案。