用于评估患者PCI术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的乳酰化修饰蛋白标志物及其应用

本发明涉及一种用于评估患者pci术(经皮冠状动脉介入术)后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的乳酰化修饰蛋白标志物及其应用。本发明属于生物。

背景技术：

1、长期以来急性心肌梗死是全球最主要的死亡原因之一，尽管急性心梗患者的早期再灌注治疗和使用二级预防性药物治疗大大降低了短期病死率，并非所有心梗患者都能从相同的治疗中获益，幸存者在随后的数周、数月和数年内仍处于心源性死亡的风险中。事实上，心源性死亡占出院后所有死亡的20-40％之间，并且在急性心梗后的第一年风险特别高。虽然一些心梗患者对适当的治疗有反应，但疾病进展是高度可变和不可预测的，尤其是支持心肌梗死再灌注治疗后的不良预后的分子驱动因素在很大程度上仍然难以捉摸。因此，接受pci的心梗患者仍面临较高的院内死亡率和再灌注损伤风险，早期识别和治疗缺血再灌注损伤(ir)后死亡的高风险患者仍然是临床优先事项。

2、现有猝死可用的临床风险评分主要依赖心脏超声射血分数(lvef)。然而，多项临床队列研究揭示lvef在患者猝死风险分层上缺乏敏感性及特异性，其单独使用可能会忽略部分发生猝死但lvef并未表现出显著降低的患者，并且部分表现出达到预测意义的该指标的患者或许已经发展到临床严重阶段，甚至可能迅速死亡。因此，开发新的方法来早期评估哪些病例可能会变得临床严重，以及建立更精准的风险分层策略以便早期确定治疗的时间和有效性是至关重要的。

3、乳酰化修饰和心梗的病理变化密切相关，表观修饰对于蛋白的功能发挥有关键的调控作用，越来越多的蛋白乳酰化修饰被鉴定出来，并且证明和免疫炎症进展起着关键作用。蛋白的乳酰化修饰提高了心梗后不良重塑的风险，中性粒细胞是响应再灌注损伤的第一哨兵，然而对于再灌注治疗后中性粒细胞的蛋白乳酰化修饰的作用和靶点仍然是一片空白。

4、因此为了对心梗患者再灌注治疗后的心源性死亡高风险人群进行针对性的治疗，为高危患者的早期干预提供有益的管理和治疗线索，深入探索心肌缺血再灌注损伤的分子机制，鉴定全新可靠的生物标志物是非常有必要的。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种用于判断心肌缺血再灌注损伤和死亡的乳酰化修饰蛋白标志物及其应用。

2、为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

3、本发明通过蛋白组学和乳酰化修饰组学鉴定了急性心梗再灌注损伤早期显著上调的乳酰化修饰蛋白s100a9k26la，通过质谱进行验证，开发了检测s100a9k26la的特异性抗体，并构建了位点突变的小鼠验证其作用，最后依赖对前期大规模临床接受pci治疗的急性心肌梗死患者队列后续发生心源性猝死或幸存的随访结局，构建在性别、年龄、靶病变部位方面相匹配的死亡组及幸存者组，并利用保存于生物样本库中的其入院早期血浆样本进行两组患者血浆s100a9k26la的水平，检验了血浆s100a9k26la对于死亡患者的预测效能，发现其在死亡组显著上升，和肌钙蛋白以及促炎因子il-1β显著相关，hr值为1.831，并确定了判断死亡存活风险的临界值37.125*105pg/ml。

4、在上述研究的基础上，首先，本发明提出了一种用于评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的乳酰化修饰蛋白标志物，所述的乳酰化修饰蛋白标志物为s100a9k26la，其氨基酸序列如seq id no.1所示，其中乳酰化修饰位点位于k26。

5、进一步的，本发明还提出了所述的乳酰化修饰蛋白标志物在制备用于评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的试剂中的应用。

6、用于检测所述的乳酰化修饰蛋白标志物的抗体也在本发明的保护范围之内，其中，优选的，所述的抗体的氨基酸序列如seq id no.2所示，其中乳酰化修饰位点位于k26。

7、再进一步的，本发明还提出了所述的抗体在制备检测所述的乳酰化修饰蛋白标志物的试剂中的应用。以及所述的抗体在制备用于评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的试剂中的应用。

8、其中，优选的，所述的试剂为elisa检测试剂。

9、其中，优选的，判断心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的临界值为37.125*105pg/ml。

10、再进一步的，本发明还提出了评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的方法，包括如下步骤：

11、(1)收集pci术后24h内的患者血清样品，并以正常人血清样品作为对照；

12、(2)检测待测患者和正常人的血清样品中生物标志物s100a9k26la的含量，并将所得结果进行比对；

13、(3)根据比对结果指示待测患者是否为心肌缺血再灌注损伤和死亡患者。

14、其中，优选的，采用elisa方法检测血清样品中生物标志物s100a9k26la的含量。

15、相较于现有技术，本发明的有益效果是：

16、本发明基于在动物模型中利用蛋白组学和修饰组学鉴定的乳酰化修饰靶点蛋白——s100a9k26la，通过质谱进行验证，开发了检测s100a9k26la的特异性抗体，并构建了位点突变的小鼠在动物水平验证其作用，最后依赖对大规模临床接受pci治疗后发生心源性猝死或幸存的的急性心肌梗死患者队列进行验证，发现其在死亡组显著上升，和肌钙蛋白以及促炎因子il-1β显著相关，hr值为1.831，并确定了判断死亡存活风险的临界值37.125*105pg/ml。对心梗pci术后患者的早期诊断、远期预后及生活质量的改善具有较大的临床价值和实际意义。所筛选的s100a9k26la参与再灌注损伤的发病，并可作为评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡的诊断生物标志物和新的治疗靶点，这为临床急性心肌梗死早期诊断和预后评估提供了新的技术手段。

技术特征：

1.一种用于评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的乳酰化修饰蛋白标志物，其特征在于，所述的乳酰化修饰蛋白标志物为s100a9k26la，其氨基酸序列如seq id no.1所示，其中乳酰化修饰位点位于k26。

2.权利要求1所述的乳酰化修饰蛋白标志物在制备用于评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的试剂中的应用。

3.用于检测权利要求1所述的乳酰化修饰蛋白标志物的抗体。

4.如权利要求3所述的抗体，其特征在于，所述的抗体的氨基酸序列如seq id no.2所示，其中乳酰化修饰位点位于k26。

5.权利要求3或4所述的抗体在制备检测权利要求1所述的乳酰化修饰蛋白标志物的试剂中的应用。

6.权利要求3或4所述的抗体在制备用于评估急性心肌梗死患者pci术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的试剂中的应用。

7.如权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述的试剂为elisa检测试剂。

8.如权利要求5或6所述的应用，其特征在于，判断心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的临界值为37.125*105pg/ml。

技术总结
本发明公开了一种用于评估患者PCI术后心肌缺血再灌注损伤和死亡风险的乳酰化修饰蛋白标志物及其应用。本发明通过蛋白组学和乳酰化修饰组学鉴定了急性心梗再灌注损伤早期显著上调的乳酰化修饰蛋白S100A9K26la。依赖对大规模临床接受PCI治疗后发生心源性猝死或幸存的的急性心肌梗死患者队列进行验证，发现其在死亡组显著上升，和肌钙蛋白以及促炎因子IL‑1β显著相关，并确定了判断死亡存活风险的临界值37.125*105pg/ml。本发明的提出对心梗PCI术后患者的早期诊断、远期预后及生活质量的改善具有较大的临床价值和实际意义。所筛选的S100A9K26la可作为心肌缺血再灌注损伤和死亡的诊断生物标志物和新的治疗靶点，为临床接受再灌注治疗的急性心肌梗死患者的预后评估提供新的方向。

技术研发人员：张毛毛,王校琪,闫相煜,莽鸽,陈雨佳
受保护的技术使用者：哈尔滨医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/4/8