分离克霉唑中遗传毒性杂质并测定其含量的GC-MS法的制作方法

本发明属于药物化学分析，具体涉及一种分离克霉唑中遗传毒性杂质并测定其含量的gc-ms法。

背景技术：

1、克霉唑(clotrimazole)属于吡咯类广谱抗真菌药，克霉唑的结构式如式ⅲ所示，主要用于治疗敏感菌所致的深部和浅部真菌病，如隐球菌脑膜炎、念珠菌肺炎、肠炎、组织胞浆病、体癣、手足癣等。克霉唑对多种真菌尤其是白色念珠菌具有较好抗菌作用，其作用机制是抑制真菌细胞膜的合成，以及影响其代谢过程。克霉唑中间体z1为克霉唑合成过程中的关键中间体，其中文化学名为1-氯-2-(氯二苯基甲基)苯，分子式为c19h14cl2，分子量为313.22，cas号为42074-68-0，克霉唑中间体z1的结构式如式ⅳ所示。

2、

3、杂质sm1为主要起始物料用于合成克霉唑中间体z1，克霉唑中间体z1中有少量杂质sm1检出；而杂质z1f为合成克霉唑中间体z1中过程的副产物，为了更好控制杂质水平，保障药品质量，需要对杂质sm1和杂质z1f进行严格控制。

4、现有技术中，公开号为cn113834885a的发明专利公开了一种克霉唑原料基因毒性杂质的hplc检测方法，该基因毒性杂质为甲醛和乙二醛。目前未查询到能用于克霉唑中杂质sm1和杂质z1f的控制的相关方法。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种gc-ms法分离克霉唑中遗传毒性杂质的方法，该方法专属性强，准确度高，稳定性好，可在13.5分钟内实现克霉唑中遗传毒性杂质的分离，为后续克霉唑中遗传毒性杂质的检测提供了技术支持。

2、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、gc-ms法分离克霉唑中遗传毒性杂质的方法，所述遗传毒性杂质包括杂质sm1和杂质z1f中的任一种或多种；所述杂质sm1的结构式如式ⅰ所示，所述杂质z1f的结构式如式ⅱ所示，所述克霉唑的结构式如式ⅲ所示；所述方法包括：采用5％苯基-甲基聚硅氧烷作为色谱柱固定液，载气为氦气，采用程序升温分离克霉唑中的遗传毒性杂质；

4、

5、杂质sm1为合成克霉唑中间体z1的主要起始物料，克霉唑中间体z1中有少量杂质sm1检出，因此选择在成品中对杂质sm1进行严格控制，z1f为合成z1中过程的副产物，为了更好控制杂质水平，在成品中进行控制。

6、进一步，所述程序升温包括：初始温度为70-90℃，维持运行1-3分钟；以5-15℃/min的速率升温至180-220℃；后运行：280-320℃保持5-10min。

7、作为优选，所述程序升温为：初始温度为80℃，维持运行2分钟；以10℃/min的速率升温至200℃；后运行：300℃保持6min。

8、进一步，柱流速为0.8-1.2ml/min，更优选为1ml/min。

9、进一步，分流比为5：1

10、作为优选，进样口温度为230-270℃，更优选为250℃。

11、作为优选，进样体积为1.5μl。

12、进一步，所述色谱柱为毛细管柱。

13、作为优选，所述质谱为单四级杆质谱。

14、作为优选，色谱柱规格为：30m*0.25mm*0.25μm。

15、本发明的目的之二在于提供一种定性鉴别克霉唑中遗传毒性杂质的方法，该方法可有效鉴别克霉唑中是否含有上述遗传毒性杂质，且检测限低至3ng/ml，具有灵敏度高的特点。

16、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

17、定性鉴别克霉唑中遗传毒性杂质的方法，采用前述方法分离克霉唑中的遗传毒性杂质，并采用质谱检测器进行检测，得到gc图；根据对照品与检测品的色谱行为的一致性，判断检测品中是否含有遗传毒性杂质。

18、进一步，所述质谱条件包括：采用ei离子源，sim扫描模式进行检测，离子源温度为210-250℃，四级杆温度为130-170℃，加热辅助器温度为260-300℃，溶剂延迟6-10分钟，增益因子为8-12。

19、作为优选，离子源温度为230℃，四级杆温度为150℃，加热辅助器温度为280℃，溶剂延迟8分钟，增益因子为10。

20、进一步，所述杂质sm1的定量离子为195m/z，定性离子为193m/z，驻留时间为100ms；所述杂质z1f的定量离子为167m/z，定性离子为202m/z，驻留时间为100ms。

21、进一步，保留时间为10.8±0.5min的是所述杂质sm1；保留时间为12.9±0.5min的是所述杂质z1f。

22、本发明的目的之三在于提供一种判断克霉唑中遗传毒性杂质含量是否合格的方法，该方法利用限度法对克霉唑中遗传毒性杂质进行定量，准确度高，重现性好。

23、为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

24、判断克霉唑中遗传毒性杂质含量是否合格的方法，包括如下步骤：

25、(1)以二氯甲烷为溶剂，配制待测样品和对照品；

26、(2)利用权利要求5-7任一项所述的方法对步骤(1)所述待测样品和对照品进行检测，得到gc图；

27、(3)建立色谱模型；

28、(4)根据步骤(3)所得色谱模型，判断待测样品中遗传毒性杂质含量是否合格。

29、进一步，若样品溶液中所述遗传毒性杂质的峰面积均小于对照品溶液中对应杂质的峰面积，表明样品合格；若样品溶液中所述遗传毒性杂质中任一种杂质的峰面积大于对照品溶液中对应杂质的峰面积，表明样品不合格。

30、作为优选的实施方案：

31、1.精密称取本品，如200mg，置50ml容量瓶中，加入二氯甲烷溶解并定容至刻度，摇匀，作为样品溶液；

32、2.精密称取杂质sm1对照品，如30mg置于50ml容量瓶中；精密称定，加二氯甲烷溶解并定容，得到杂质sm1对照品的储备液ⅰ；取储备液ⅰ如0.1ml，置于50ml容量瓶中，加二氯甲烷溶稀释定容得到杂质sm1对照品的储备液ⅱ；精密量取储备液ⅱ如0.5ml，置50ml容量瓶中，加二氯甲烷稀释定容，摇匀，得到杂质sm1的对照品溶液；

33、3.按步骤2所述方法配制杂质z1f的对照品溶液；

34、4.取步骤1-3配制得到的样品溶液和对照品溶液，如1.5μl，分别进样检测，记录色谱图。根据图谱结果对样品溶液中杂质sm1和杂质z1f进行定性和定量。

35、本发明的有益效果在于：

36、1.本发明建立的gc-ms方法，可以成功分离克霉唑中遗传毒性杂质sm1和z1f，并测定各杂质含量，杂质sm1和杂质z1f均是含有警示结构的遗传毒性杂质，限度要求3ppm(12ng/ml)，常规的lc或gc方法灵敏度无法满足要求；本发明提供的gc-ms方法检测限低至3ng/ml(0.75ppm)，具有灵敏度高的特点。

37、2.本发明通过调整gcms柱温箱升温程序，保证杂质sm1和杂质z1f两个杂质间能良好分离，克霉唑及其他杂质、基质不干扰测定，具有专属性强、准确度高、稳定性好的特点。

38、3.本发明方法可在13.5分钟内实现克霉唑中遗传毒性杂质sm1和z1f的测定，具有分析时间短的特点。