一种煨木香及其制剂的HPLC特征图谱构建方法与流程

本发明涉及药物分析检测，尤其是涉及一种煨木香及其制剂的hplc特征图谱构建方法。

背景技术：

1、木香为菊科植物木香aucklandia lappa decne.的干燥根。秋、冬二季采挖，除去泥沙和须根，切段，大的再纵剖成瓣，干燥后撞去粗皮。煨木香为木香的加工炮制品。煨木香味辛、苦，温。归脾、胃、大肠、三焦、胆经。具有行气止痛，健脾消食。用于胸胁、脘腹胀痛，泻痢后重，食积不消，不思饮食。煨木香实肠止泻。用于泄泻腹痛。其化学成分类型较多，主要为萜类，还有生物碱、蒽醌、黄酮等其他类，萜类尤其倍半萜类成分受重点关注，为其主要活性成分。现代药理学研究表明，木香除具有解除平滑肌痉挛、降压、抗菌等作用，在抗癌、免疫、抗炎等方面也具有一定的活性。

2、《中国药典》2020版中木香的炮制品收录了去除杂质的木香和纸煨品煨木香，文献报道对木香的炮制品多关注于麦麸煨品的麸煨木香，而对纸煨品的煨木香及其相关制剂的质量控制方法进行研究较少，且并未对其特征图谱进行深入研究。

3、因此，构建一种高效液相特征图谱方法，全面反映煨木香的质量水平，并对煨木香与麸煨木香和木香的鉴别提供依据是非常必要的。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种煨木香及其制剂的hplc特征图谱，本发明构建的特征图谱方法稳定，可靠，可以对煨木香与麸煨木香和木香的质量进行控制，同时可以对上述药材进行鉴别。

2、本技术中，术语“和/或”，描述关联对象的关联关系，表示可以存在三种关系，例如，a和/或b，可以表示:单独存在a，同时存在a和b，单独存在b的情况。其中a,b可以是单数或者复数。

3、本技术中，“至少一个”是指一个或者多个，“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达，是指的这些项中的任意组合，包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。

4、应理解，在本技术的各种实施例中，上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后，部分或全部步骤可以并行执行或先后执行，各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定，而不应对本技术实施例的实施过程构成任何限定。

5、本发明公开了一种煨木香的高效液相特征图谱检测方法的构建及应用，该方法运用于煨木香及其相关制剂，指认了9个指标成分，确认了14个共有特征峰，并对其相对保留时间和相对峰面积进行了研究，规定其相对保留时间和相对峰面积，建立对照特征图谱，充分展示煨木香的化学成分特征，全面地反映出煨木香的质量信息，从而能够达到全面、有效地控制煨木香及其相关制剂的质量保证了其化学组成稳定性和使用安全性。

6、该方法运用于煨木香、麸煨木香及木香的鉴别，指认了9个指标成分，确认了14个共有特征峰，在进行不同炮制品制剂鉴别时，拥有14个共有特征峰，指认了9个指标成分，峰1相对峰面积不大于0.12，峰12相对峰面积不大于0.20的为煨木香。峰1相对峰面积不大于0.12，峰12相对峰面积不小于0.20的为木香。峰1相对峰面积不小于0.12，峰12相对峰面积不小于0.20的为麸煨木香。

7、本发明提供了一种煨木香及其制剂的hplc特征图谱构建方法，包括：

8、a)将供试品原料采用水煎煮后，再用溶剂提取，得到待测液；

9、b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到煨木香及其制剂的hplc特征图谱；

10、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％醋酸水溶液，梯度洗脱。

11、本发明提供的煨木香及其制剂的hplc特征图谱构建方法首先将供试品原料采用水煎煮。本发明所述将供试品原料和水的质量体积比为(0.3～1)g：50ml；

12、采用水煎煮后，再用溶剂提取，得到待测液。

13、所述溶剂优选为70％甲醇。

14、本发明采用上述提取溶剂色谱峰信息量大，色谱图峰形较好

15、本发明所述供试品原料包括煨木香饮片、煨木香颗粒、煨木香药材中的一种或几种。本发明对其不进行限定，上述原料皆可通过本发明的方法进行质量控制和定性检测。

16、本发明所述提取为超声提取；所述超声的功率为600w，频率40khz；超声时间为20～40min；更优选为30min。

17、本发明超声提取时间为20～40min；优选为30min，在不同提取时间条件下，色谱图效果基本一致。为保障提取充分，提取时间为30min时，色谱图峰形与分离度较好。

18、本发明其中一个具体实施例中，煨木香饮片供试品的制备可以为：

19、取煨木香饮片，加水，煎煮30分钟，取出，离心，取上清液，蒸干，残渣加70％甲醇10ml，超声处理(功率600w，频率40khz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

20、本发明还包括制备参照物溶液：分别取紫丁香苷、木香烃内酯、去氢木香内酯对照品，采用70％甲醇溶解，得到参照物溶液；

21、将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对煨木香及其制剂hplc特征图谱的成分进行定性。所述参照物溶液的浓度具体为：紫丁香苷0.1mg/ml，木香烃内酯为0.1mg/ml，去氢木香内酯为0.1mg/ml。

22、上述溶剂为70％的甲醇。70％甲醇作为提取溶剂时色谱峰信息量大且各色谱峰分离效果好。

23、流动相a为乙腈，流动相b为0.1％醋酸水溶液，梯度洗脱。

24、本发明所述梯度洗脱具体为：

25、0～10min，a相：5％～8％、b相：95～92％；

26、10～20min，a相：8％～15％、b相：92％～85％；

27、20～25min，a相：15％～19％、b相：85％～81％；

28、25～35min，a相：19％～23％、b相：81％～77％；

29、35～42min，a相：23％、b相：77％；

30、42～55min，a相：23％～35％、b相：77％～65％；

31、55～60min，a相：35％～65％、b相：65％～35％；

32、60～70min，a相：65％～75％、b相：35％～25％；

33、70～75min，a相：75％～100％、b相：25％～0％。

34、本发明在上述洗脱梯度下基线分离好，各个峰分离度好，基线平稳。

35、本发明色谱柱为c18柱；所述色谱柱为规格是250×4.6mm 5μm；

36、本发明人发现，c18上述规格的色谱柱都能满足本发明的检测要求。

37、特别优选的，可以选择agilent 5tc-c18色谱柱。

38、本发明柱温25℃。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于3000。

39、本发明在柱温为25℃时，色谱图峰形较为对称，分离度较好，保留时间较适宜。

40、本发明所述流动相流速为1.2ml/min；

41、本发明发现流速1.2ml/min下各色谱峰分离度较好，峰形较好，峰型对称且保留时间合适，作为最优选方案。

42、本发明检测波长为254nm；

43、本发明人发现，在254nm处色谱信息丰富，各成分均有较好吸收，响应值适中，色谱峰信息量较大，各峰分离度较好，基线平稳。

44、本发明进样量为10μl。

45、本发明还采用对照品溶液和木香对照药材溶液对煨木香特征图谱进行指认：其中峰2为新绿原酸；峰3为紫丁香苷；峰4为绿原酸；峰5为隐绿原酸；峰8为异绿原酸a；峰9为异绿原酸b；峰10为异绿原酸c；峰12为木香烃内酯；峰13为去氢木香内酯；

46、其中，所述对照品溶液的制备具体为：分别取紫丁香苷、木香烃内酯、去氢木香内酯、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸a、异绿原酸b、异绿原酸c对照品，采用70％甲醇溶解，得到对照品溶液；所述参照物溶液的浓度具体为：紫丁香苷0.1mg/ml，木香烃内酯为0.1mg/ml，去氢木香内酯为0.1mg/ml，绿原酸为0.1mg/ml，新绿原酸0.1mg/ml，隐绿原酸为0.1mg/ml，异绿原酸a为0.1mg/ml，异绿原酸b为0.1mg/ml，异绿原酸c为0.1mg/ml。

47、本发明指认了上述9个特征峰。

48、采用木香对照药材加水煎煮后，再采用70％甲醇提取，得到对照药材参照物溶液。

49、本发明采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对煨木香及其制剂的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由14个特征峰构成的hplc标准特征图谱，其中峰3为紫丁香苷，峰12木香烃内酯，峰13为去氢木香内酯。在所述煨木香及其制剂的特征图谱中，以紫丁香苷为参照峰s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：0.41(峰1)、0.77(峰2)、1.04(峰4)、1.11(峰5)、1.29(峰6)、1.83(峰7)、1.90(峰8)、1.93(峰9)、2.06(峰10)、2.89(峰11)、3.40(峰14)。

50、采用本发明所提供的方法能有效的监控不同批次煨木香的质量，使其质量稳定，方法具有精密度高、重现性好等特点，有利于全面监控产品的质量。

51、本发明还提供了一种煨木香、麸煨木香、木香及其制剂的特征图谱的鉴别方法，采用上述技术方案任一项所述的方法进行检测，分析检测结果；

52、煨木香相对峰面积规定：峰1不得大于0.12，峰12不得大于0.20；

53、木香相对峰面积规定：峰1不得大于0.12，峰12不得小于0.20；

54、麸煨木香相对峰面积规定：峰1不得小于0.12，峰12不得小于0.20。

55、本发明提供了一种煨木香及其制剂的hplc特征图谱构建方法，包括：a)将供试品原料采用水煎煮后，再用溶剂提取，得到待测液；b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到煨木香及其制剂的hplc特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％醋酸水溶液，梯度洗脱。本发明采用高效液相色谱法，选用乙腈-0.1％醋酸溶液为流动相进行梯度洗脱，以紫丁香苷、木香烃内酯、去氢木香内酯为参照物，建立了区别煨木香、麸煨木香、木香及其制剂的hplc特征图谱，充分展示煨木香的化学成分特征，全面地反映出煨木香的质量信息，从而能够达到全面、有效地控制煨木香及其相关制剂的质量保证了其化学组成稳定性和使用安全性。

56、(1)本发明建立了高效液相特征图谱方法用于煨木香饮片的检测。

57、(2)本发明建立了煨木香饮片的特征图谱，确认了14个共有特征峰，并对其相对保留时间和相对峰面积进行了研究，保证了其化学组成稳定性和使用安全性。指认了9个指标成分，克服了单一成分含量测定难以反映整体含量的缺陷，可以从整体上、宏观上控制煨木香及其相关制剂的内在质量，保证了药物的疗效，使其相关制剂得到了更为正规的质量控制。

58、(3)本发明建立了煨木香特征图谱可用于煨木香、麸煨木香及木香的鉴别，指认了9个指标成分，确认了14个共有特征峰，在进行不同炮制品鉴别时，拥有14个共有特征峰，指认了9个指标成分，峰1相对峰面积不大于0.12，峰12相对峰面积不大于0.20的为煨木香。峰1相对峰面积不大于0.12，峰12相对峰面积不小于0.20的为木香。峰1相对峰面积不小于0.12，峰12相对峰面积不小于0.20的为麸煨木香。

59、(4)本发明方法稳定性好、精密度高、重现性好、便捷且易于掌握。