一种左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法与流程

本技术涉及化学检测的，具体涉及一种左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法。

背景技术：

1、左卡尼汀是哺乳动物能量代谢中必需的体内天然物质，其主要功能是促进脂类代谢。它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进其氧化分解，为细胞提供能量，又能将线粒体内产生的短链脂酰基输出。左卡尼汀原料药的补充可缓解其因体内缺乏引起的脂肪代谢紊乱、骨骼肌和心肌等组织的功能障碍。

2、许多药品、保健食品、食品及添加剂等都含有左卡尼汀，左卡尼汀含有的有关杂质会对左卡尼汀原料药的安全性和有效性造成不利影响。现有标准中对左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法难以达到分离度要求，例如基线分离困难、各峰之间的分离度差、部分杂质未洗脱出来等。因此，为保证左卡尼汀原料药的使用安全性与有效性，急需提供一种专属性强、灵敏度高、分离度好的左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法显得至关重要。

技术实现思路

1、为了能够检测左卡尼汀原料药中的有关杂质，同时提高检测方法的精密度和准确度，本技术提供一种左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法。

2、本技术提供了一种左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法，包括以下步骤：

3、利用高效液相色谱法对待测样品进行检测；

4、所述有关杂质包括2-呋喃酮、杂质a、杂质c、杂质d；所述杂质a为4-(三甲基铵)丁-2-烯酸内盐，所述杂质c为(2r)-4-氨基-2-羟基-n,n,n-三甲基-4-氧代丁烷-1-胺，所述杂质d为4-氨基-n,n,n-三甲基-4-氧代丁基-2-烯-1-胺；

5、色谱条件具体为：采用聚丙烯酰胺键合硅胶为填充剂的色谱柱；以体积比为(28-33)：(67-72)的20-30mmol/l碳酸氢铵溶液-乙腈为流动相；流速为：0.8-1.5ml/min；柱温为23-27℃。

6、本技术中，2-呋喃酮(c4h4o2，分子量84.07)、杂质a(c7h13no2，分子量143.18)、杂质c(c7h17n2o2cl，分子量161.23)、杂质d(c7h15n2o，分子量143.21)的化学结构式分别如式(1)、式(2)、式(3)、式(4)所示；

7、其中，所述杂质a可以为(e)-4-(三甲基铵)丁-2-烯酸内盐或其异构体(z)-4-(三甲基铵)丁-2-烯酸内盐；所述杂质d为(e)-4-氨基-n,n,n-三甲基-4-氧代丁基-2-烯-1-胺或其异构体(z)-4-氨基-n,n,n-三甲基-4-氧代丁基-2-烯-1-胺。

8、

9、式(1)

10、

11、式(2)

12、

13、式(3)

14、

15、式(4)

16、本技术中，为了实现左卡尼汀原料药中2-呋喃酮、杂质a、杂质c、杂质d多种杂质的同时检测，通过大量实验探究，重新提供了左卡尼汀原料药中上述有关物质检测方法中的具体检测条件。利用特定的色谱柱和流动相、流速，并将分离检测过程的柱温控制23-27℃，能够快速、准确地同时检测左卡尼汀原料药中2-呋喃酮、杂质a、杂质c、杂质d，并且检测的专属性强、灵敏度高、分离度好；将上述检测方法用于左卡尼汀原料药的生产制备工艺中，能够实现制剂质量的有效把控。

17、优选地，所述流动相为体积比为(29-31)：(69-71)的碳酸氢铵溶液-乙腈混合溶液。

18、在一些实施方案中，所述碳酸氢铵溶液和乙腈的体积比可以为28-30：70-72、30-33：67-70。

19、在一个具体的实施方案中，所述碳酸氢铵溶液和乙腈的体积比可以为28：72、30：70、33：67。

20、优选地，所述流动相中，所述碳酸氢铵溶液的浓度为23-28mmol/l。

21、在一些实施方案中，所述碳酸氢铵溶液的浓度可以为20-23mmol/l、20-25mmol/l、20-28mmol/l、23-25mmol/l、23-30mmol/l、25-28mmol/l、25-30mmol/l、28-30mmol/l。

22、在一个具体的实施方案中，所述碳酸氢铵溶液可以为20mmol/l、23mmol/l、25mmol/l、28mmol/l、30mmol/l。

23、优选地，所述流动相中，所述碳酸氢铵溶液的ph为5.8-6.3。

24、在一些实施方案中，所述流动相中，所述碳酸氢铵溶液的ph为5.8-6.0、6.0-6.3。

25、在一个具体的实施方案中，所述流动相中，所述碳酸氢铵溶液的ph为5.8、6.0、6.3。

26、优选地，所述柱温为24-26℃。

27、在一些实施方案中，所述柱温为23-24℃、23-25℃、23-26℃、24-25℃、24-27℃、25-26℃、25-27℃、26-27℃。

28、在一个具体的实施方案中，所述柱温为23℃、24℃、25℃、26℃、27℃。

29、优选地，所述色谱柱为ultimate hilic amide 250×4.6mm，3μm。

30、优选地，所述色谱条件中，进样体积为15-25μl。

31、优选地，所述色谱条件中，检测波长为200-230nm。

32、在一些实施方案中，所述检测波长为205nm。

33、优选地，所述检测方法包括以下步骤：

34、供试品溶液的配制：取左卡尼汀原料药，加流动相溶解并定量稀释制成4mg/ml的溶液；

35、混合对照品溶液的配制：取左卡尼汀对照品、杂质a对照品、杂质c对照品、杂质d对照品、2-呋喃酮对照品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中含左卡尼汀及各杂质各4μg的混合溶液；

36、系统适用性溶液的配制：取左卡尼汀原料药与杂质a对照品、杂质c对照品、杂质d对照品、2-呋喃酮对照品，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含左卡尼汀4mg及杂质a、杂质c对照品、杂质d对照品、2-呋喃酮对照品各4μg的混合溶液；

37、测定法：取空白溶液、系统适用性溶液、供试品溶液与混合对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图

38、综上所述，本技术的技术方案具有以下效果：

39、本技术通过高效液相色谱法技术对左卡尼汀原料药中的有关杂质进行检测，提供了一种检测速度快、操作方法简单的检测方法。利用特定的色谱柱和流动相、流速，并将分离检测过程的柱温控制23-27℃，能够快速、准确地同时检测左卡尼汀原料药中2-呋喃酮、杂质a、杂质c、杂质d，并且检测的专属性强、灵敏度高、分离度好；将上述检测方法用于左卡尼汀原料药的生产制备工艺中，能够实现制剂质量的有效把控。

40、本技术通过对相关测试条件进行筛选与优化，2-呋喃酮、杂质a、杂质c、杂质d有关物质的检测方法获得的检测谱图的各峰的对称性好、峰高适宜、出峰位置居中、各物质的出峰位置相差较远，分离效果明显；提供的左卡尼汀原料药中有关杂质的检测方法具有检出限低、精密度高、重复性高、准确度高的优点。

41、本技术提供的左卡尼汀原料药中的有关杂质的检测方法解决了相关技术中存在的基线分离困难、各峰之间的分离度差、部分杂质未洗脱出来等问题，利用上述检测方法检测左卡尼汀原料药中的有关杂质，能够实现左卡尼汀原料药质量的有效把控。