一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法与流程

本发明属于分析检测，具体涉及一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法。

背景技术：

1、氨基甲酸乙酯(ethyl carbamate，ec)是食物在发酵和储藏过程中天然产生的物质，普遍存在于发酵食品(酒精饮料、酱油、面包等)中。目前食品中氨基甲酸乙酯的检测方法有气相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法和酶抑制法等，前处理方法有衍生化、同位素内标、固相萃取、盐辅助液液萃取等，其中，盐辅助液液萃取是一种简单绿色的萃取方法，通过向液体样品和萃取溶剂的混合物中加入适当的无机盐，促使萃取溶剂更好地从混合物中分离萃取目标产物。

2、例如，现有技术(王雅楠等.盐辅助分散液液微萃取-气相色谱-串联质谱法检测葡萄酒中的氨基甲酸乙酯[j]食品安全质量检测学报，2020年第11卷第5期：1364～1368)公开了样品的前处理方法：将葡萄酒样品摇匀，加入ec-d5工作液、硫酸钠和二氯甲烷，涡旋，离心，取下层二氯甲烷相至进样瓶中备测。然而，上述现有技术中盐辅助分散采用的盐为硫酸钠(难挥发性盐)，进行盐析后用于质谱检测时，提取溶剂中残留的盐会进入离子源，导致目标物离子丰度降低，进而降低检测准确度。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明目的在于提供一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法，采用本发明提供的检测方法进行检测，准确度高。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法，包括以下步骤：

4、将待测液体调味品样品、可挥发性酸铵盐和有机萃取剂混合，进行盐析辅助液液萃取，得到待测样品液，所述有机萃取剂包括醇类溶剂和/或腈类溶剂；

5、将所述待测样品液与水混合，得到待测混合液；

6、对所述待测混合液进行超高效液相-串联质谱检测，得到检测结果；所述检测结果包括定性检测结果和定量检测结果。

7、优选的，所述可挥发性酸铵盐包括亚硫酸铵、碳酸铵和乙酸铵中的一种或几种。

8、优选的，所述液体调味品样品包括黄酒、醋、酱油和料酒中的一种或几种；

9、所述液体调味品样品和可挥发性酸铵盐的质量比为1∶0.2～0.5。

10、优选的，所述醇类溶剂包括正丁醇和/或正丙醇，所述腈类溶剂包括乙腈。

11、优选的，所述液体调味品样品和有机萃取剂的固液比为1g∶0.2～0.5ml。

12、优选的，所述盐析辅助液液萃取的温度为5～35℃，时间为3～10min。

13、优选的，所述盐析辅助液液萃取的方式为离心萃取；所述离心萃取的转速为3000～12000rpm。

14、优选的，所述待测混合液中还包括有机助溶剂；

15、所述有机助溶剂包括甲醇和/或乙腈；待测样品液和有机助溶剂的体积比为1∶0～0.5。

16、优选的，所述超高效液相色谱-串联质谱检测中的超高效液相色谱检测条件包括：色谱柱为c18色谱柱；流动相a为甲醇；流动相b为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.5％；洗脱方式为等度洗脱，所述等度洗脱过程中流动相a的体积分数为5～50％；流动相的流速为0.1～0.6ml/min；柱温为30～40℃；进样量为2～10μl。

17、优选的，所述超高效液相色谱-串联质谱检测中的串联质谱检测条件包括：检测方式为多反应监测；离子源为电喷雾正离子源；毛细管电压为2～5kv；脱溶剂气温度为250～400℃；脱溶剂气流速为5～10l/min；碎裂电压为20～60v；碰撞电压为15～25v；定性离子对为90.0＞44.0，定量离子对为90.0＞62.0。

18、本发明提供了一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法。本发明采用可挥发性酸铵盐作为盐析剂，对液体调味品进行盐析辅助液液萃取，得到的待测样品液进行检测时，待测样品液中残留的盐可在离子源中电离挥发而不会进入离子源，避免了难挥发性盐残留导致的抑制离子响应、目标物离子丰度降低以及对质谱造成污染的问题；将水、有机助溶剂和得到的待测样品液进行混合，得到待测混合液；对所述待测混合液进行超高效液相色谱-串联质谱检测，得到检测结果，相较于常规液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法，具有检出限低、操作简单的优点，灵敏度和准确度高；而且，本发明提供的检测方法操作简单，无需采用内标法进行检测，降低了检测成本，实用性强。

技术特征：

1.一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述可挥发性酸铵盐包括亚硫酸铵、碳酸铵和乙酸铵中的一种或几种。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述液体调味品样品包括黄酒、醋、酱油和料酒中的一种或几种；

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述醇类溶剂包括正丁醇和/或正丙醇，所述腈类溶剂包括乙腈。

5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述液体调味品样品和有机萃取剂的固液比为1g∶0.2～0.5ml。

6.根据权利要求1、2或4所述的检测方法，其特征在于，所述盐析辅助液液萃取的温度为5～35℃，时间为3～10min。

7.根据权利要求1、2或4所述的检测方法，其特征在于，所述盐析辅助液液萃取的方式为离心萃取；所述离心萃取的转速为3000～12000rpm。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待测混合液中还包括有机助溶剂；

9.根据根据权利要求1或8所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱检测中的超高效液相色谱检测条件包括：色谱柱为c18色谱柱；流动相a为甲醇；流动相b为甲酸水溶液，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.05～0.5％；洗脱方式为等度洗脱，所述等度洗脱过程中流动相a的体积分数为5～50％；流动相的流速为0.1～0.6ml/min；柱温为30～40℃；进样量为2～10μl。

10.根据根据权利要求1或8所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱检测中串联质谱检测条件包括：检测方式为多反应监测；离子源为电喷雾正离子源；毛细管电压为2～5kv；脱溶剂气温度为250～400℃；脱溶剂气流速为5～10l/min；碎裂电压为20～60v；碰撞电压为15～25v；定性离子对为90.0＞44.0，定量离子对为90.0＞62.0。

技术总结
本发明提供了一种液体调味品中氨基甲酸乙酯的检测方法，属于分析检测技术领域。本发明采用可挥发性酸铵盐作为盐析剂，对液体调味品进行盐析辅助液液萃取，得到的待测样品液进行检测时，待测样品液中残留的盐可在离子源中电离挥发而不会进入离子源，避免了难挥发性盐残留导致的抑制离子响应、目标物离子丰度降低以及对质谱造成污染的问题；将水和得到的待测样品液进行混合，得到待测混合液；对所述待测混合液进行超高效液相色谱‑串联质谱检测，得到检测结果，具有检出限低、操作简单的优点，灵敏度和准确度高；而且，本发明提供的检测方法操作简单，无需采用内标法进行检测，降低了检测成本，实用性强。

技术研发人员：王东旭,冯秋芳,王新财,胡奇杰
受保护的技术使用者：湖州市食品药品检验研究院（湖州市药品和医疗器械不良反应监测中心、湖州市医疗器械监督检验中心、湖州市食品认证审评和粮油质量监测中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17