舒血宁制剂中木脂素类多指标成分定量分析方法与流程

本发明涉及药物检测，尤其涉及一种舒血宁制剂中木脂素类多指标成分定量分析方法。

背景技术：

1、舒血宁注射液为银杏叶或银杏叶提取物经加工制成的注射剂，在心脑血管疾病治疗方面应用广泛，具有扩张心脑血管、改善微循环、抗血小板激活因子、抗氧化清除和抑制氧自由基、抗病毒、抗菌消炎等药理作用。舒血宁注射液中主要含有黄酮类化合物、内酯类化合物及木脂素类化合物等成分。由于国内舒血宁注射液的生产企业较多，原料采收及工艺的差别，导致不同厂家成品质量存在差异。目前，对于舒血宁注射液的考察，主要是针对其中的黄酮类化合物、内酯类化合物等成分进行定量分析，鲜有针对其中的木脂素类化合物进行定量分析的。而木脂素类化合物作为在清除自由基方面发挥主要作用的成分，其含量的多少直接影响着舒血宁注射液的药效。因此，如何定量分析舒血宁注射液中木脂素类化合物的含量，对加强舒血宁注射液的质量控制有着深远影响。

技术实现思路

1、针对上述问题，本发明提供一种舒血宁制剂中木脂素类多指标成分定量分析方法。

2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

3、一种舒血宁制剂中木脂素类多指标成分定量分析方法，所述方法包括以下步骤：

4、取落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-7-metho xy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷、松脂醇-4-o-葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷和dihydrodehydrodiconiferyl alcohol9'-o-α-l-rhamnoside共7种木脂素类成分，制备对照品溶液；

5、取舒血宁制剂制备供试品溶液；

6、取对照品溶液和供试品溶液分别进行高效液相色谱串联质谱检测，并利用外标法，分别计算得舒血宁制剂中的落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-di hydro-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷、松脂醇-4-o-葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷和dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9'-o-α-l-rhamnoside的含量；

7、所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，采用乙腈-0.08～0.12wt％甲酸水溶液作为流动相，以梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱程序为：

8、0～30min，15％→15％乙腈；

9、30～75min，15％→35％乙腈。

10、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱是通过电喷雾离子源提取离子流进行检测，采用负离子模式，扫描范围为m/z100～800。

11、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱条件为：雾化气体积流量为780～820l/h、离子源温度为115～125℃，毛细管电压为3.0kv、锥孔电压为38～42v、补偿电压为78～82v。

12、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，色谱条件是采用agilentzorbax sb-c18(250mm×4.6mm，5.0μm)作为色谱柱，流速为0.45～0.55ml/min，柱温为38～42℃。

13、进一步的，所述对照品溶液中落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷的含量为0.21～6.68μg/ml、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]prop yl,(2r-trans)-(9ci)的含量为0.16～5.01μμg/ml、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷的含量为1.14～18.30μg/ml、松脂醇-4-o-葡萄糖苷的含量为0.23～3.66μg/ml、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷的含量为0.09～1.44μg/ml、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷的含量为0.31～5.00μg/ml、dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9'-o-α-l-rhamnoside的含量为0.28～4.50μg/ml。

14、一种舒血宁制剂中木脂素类多指标成分定量分析方法，所述方法包括以下步骤：

15、取落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-7-metho xy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷、松脂醇-4-o-葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷和dihydrodehydrodiconiferyl alcohol9'-o-α-l-rhamnoside共7种木脂素类成分，制备不同浓度的对照品系列溶液；

16、分别取不同浓度的对照品系列溶液进行高效液相色谱串联质谱检测，并根据各成分的浓度和相应成分对应浓度测定的提取离子流图中的峰面积，绘制各成分对应的标准曲线；

17、取舒血宁制剂制备供试品溶液；

18、取供试品溶液分别进行高效液相色谱串联质谱检测，所得各成分对应的提取离子流图中的峰面积代入各成分相应的标准曲线，分别计算得舒血宁制剂中的落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-7-metho xy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷、松脂醇-4-o-葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷和dihydrodehydrodiconiferyl alcohol9'-o-α-l-rhamnoside的含量；

19、所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，采用乙腈-0.08～0.12wt％甲酸水溶液作为流动相，以梯度洗脱的方式进行洗脱，洗脱程序为：

20、0～30min，15％→15％乙腈；

21、30～75min，15％→35％乙腈。

22、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，质谱是通过电喷雾离子源提取离子流进行检测，采用负离子模式，扫描范围为m/z100～800；

23、质谱条件为：雾化气体积流量为780～820l/h、离子源温度为115～125℃，毛细管电压为3.0kv、锥孔电压为38～42v、补偿电压为78～82v。

24、进一步的，所述高效液相色谱串联质谱检测过程中，色谱条件是采用agilentzorbax sb-c18(250mm×4.6mm，5.0μm)作为色谱柱，流速为0.45～0.55ml/min，柱温为38～42℃。

25、进一步的，所述不同浓度的对照品系列溶液中落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷的含量分别在0.21～6.68μg/ml之间、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)的含量分别在0.16～5.01μμg/ml之间、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷的含量分别在1.14～18.30μg/ml之间、松脂醇-4-o-葡萄糖苷的含量分别在0.23～3.66μg/ml之间、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷的含量分别在0.09～1.44μg/ml之间、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷的含量分别在0.31～5.00μg/ml之间、dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9'-o-α-l-rhamnoside的含量分别在0.28～4.50μg/ml之间。

26、进一步的，所述各成分对应的标准曲线分别为：

27、落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷对应的标准曲线为y＝103,817.1518x-1,800.0084，r2＝0.9998；

28、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-dihydro-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)对应的标准曲线为y＝120,282.4986x+824.8529，r2＝0.9987；

29、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷对应的标准曲线为y＝379,325.5301x-30,833.3333，r2＝0.9998；

30、松脂醇-4-o-葡萄糖苷对应的标准曲线为y＝301,991.9714x-83.3333，r2＝0.9996；

31、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷对应的标准曲线为y＝542,327.8140x-1,250.0000，r2＝0.9998；

32、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷对应的标准曲线为y＝630,655.0944x-36,666.6667，r2＝0.9996；

33、dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9'-o-α-l-rhamnoside对应的标准曲线为y＝147,438.6199x-8,208.3333，r2＝0.9989。

34、本发明的舒血宁制剂中木脂素类多指标成分定量分析方法的有益效果为：

35、本发明通过一次性定量分析舒血宁制剂中7种木脂素类成分，能够加强舒血宁制剂的质量控制，且在后期舒血宁制剂物质基础研究过程中，能够更加系统的对其所含木脂素类化合物进行活性研究，使之发挥更大的药用价值，为舒血宁制剂二次开发提供有力支撑；

36、本发明利用高效液相色谱串联质谱检测，通过改变色谱条件和质谱条件，一次性定量分析舒血宁制剂中落叶松脂醇-4,4-二葡萄糖苷、β-d-glucopyranoside,3-[2-[4-(β-d-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]-2,3-di hydro-3-(hydroxymethyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]propyl,(2r-trans)-(9ci)、(7s,8r)-二氢去氢二愈创木基醇4-o-β-d-葡萄糖苷、松脂醇-4-o-葡萄糖苷、(-)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷、(+)-丁香树脂酚-4-o-葡萄糖苷和dihydrodehydrodiconiferyl alcohol 9'-o-α-l-rhamnoside共7种木脂素类成分，实现对舒血宁制剂中木脂素类多指标成分的控制；

37、本发明通过调整色谱条件和质谱条件，能够同时定量分析舒血宁制剂中7种木脂素类成分，且测定结果准确，操作简单，快捷，易于掌握；

38、本发明的方法重复性高、稳定性高、线性关系良好。