一种基于QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留的分析方法与流程

本发明涉及一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）的分析方法，属于分析。

背景技术：

1、随着现代农业科技发展，我国已成为植物生长调节剂应用最广泛的国家之一。植物生长调节剂（plant growth regulators, pgrs)是一类人工合成的类植物激素，具有植物激素活性和相同的生理效应，可以有利于良种潜力的充分发挥，是一种用于调节植物生长发育的农药。这些植物生长调节剂虽然不是剧毒物质，但也存在一定的毒性。近年来，植物生长调节剂不当使用、超量使用等情形时有发生，农产品中植物生长调节剂残留已成为当前食品安全主要隐患之一。目前，在植物生长剂在农产品中残留限量规定及相应检测方法标准等法规正在不断完善之中。因此，为加强植物生长调节剂使用的管理控制，尽量避免植物生长调节剂滥用情况的发生，研究通用的植物生长调节剂检测新技术势在必行。

2、在食品检验方法国家标准体系中，植物调节生长剂在食品中残留限量的检测方法主要有气相色谱法（gc）、气相色谱－质谱法（gc-ms）、高效液相色谱法（hplc）、高效液相色谱－串联质谱法（lc-ms/ms）等，检验方法标准规定的前处理方法主要有液液萃取、固相萃取和quechers方等方法。但是，吲哚-3-丁酸（indole-3-butyric acid, iba）、吲熟酯（ethyhlozate）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-d）等植物生长调节没有相应检验检测方法标准。本发明立足于食品安全监管中pgrs在食品中残留的检验检测方法研究与开发，结合现有的检验检测技术标准基础上，采用 quechers-超高效液相色谱-串联质谱法，以柑橘和稻谷为基质，改进色谱条件，建立同时测定柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留检验新方法、新技术。

技术实现思路

1、本发明目的是提供一种柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）同时检测新方法。

2、本发明的技术方案：一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）的分析方法。采用quechers技术，用mrm模式监测，基质匹配的工作曲线外标法进行定量，结合uhplc-ms/ms分析技术同时测定柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）。

3、本发明主要包括以下几个步骤：超高效液相色谱-串联质谱条件；8种植物生长调节剂（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）标准品在基质溶液中检测；样品的前处理；样品的检测。

4、一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）的分析方法，其特征在于：主要包括以下几个步骤：

5、（1）超高效液相色谱-质谱条件

6、本发明中所使用的仪器是液相色谱串联三重四极杆质谱仪(美国，安捷伦公司)。

7、色谱条件：色谱柱：c18，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相：a相为乙腈，b相为含0.1%甲酸的水溶液；梯度洗脱程序：0min，95%b;2min，90%b;5min，50%b;8min，25%b;9min，5%b;10min，95%b保持2min。流速：0.3ml/min；柱温：35℃；进样量：10μl。

8、质谱条件：esi电喷雾离子源；干燥气温度300℃，干燥气流速11l/min，毛细管电压4000v，mrm多反应监测，分段扫描（0~5min，5.1~12min），待测化合物的监测母离子、子离子、碎裂电压、碰撞能、正负离子扫描模式等质谱参数见表1：

9、表1 8种植物生长调节剂的质谱优化参数和保留时间

10、

11、（2）8种植物生长调节剂（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）标准品在基质溶液中检测；本发明采用外标法进行定量，分别用柑橘和稻谷为基质配置一系列质量浓度的矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d混合标准工作溶液，在上述色谱-质谱条件下进行分析，以植物生长调节剂的浓度（ng/ml）为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程和相关系数r2，并推算出检出限(s/n=3时对应的目标化合物含量)和定量限(s/n=10时对应的目标化合物含量)。结果表明，8种植物生长调节剂的线性关系良好（r2≥0.995），lods和loqs分别在0.02-0.75µg/kgl和0.05-1.25µg/kg范围内。

12、（3）样品前处理

13、柑橘：将样品切碎后匀浆，准确称取5-10g试样，加入10ml乙睛和果蔬提取包（含4g硫酸镁，1g氯化钠，1g柠檬酸三钠，0.5g柠檬酸氢二钠），涡旋混匀、离心，吸取6ml上清液加到果蔬净化管（内含900mg硫酸镁，150mgpsa）中，涡旋混匀、离心，准确吸取2ml上清液，40℃水浴中氮气吹至近干，加入1 ml乙酸乙酯，过微孔滤膜后供uhplc-ms/ms测定。

14、稻谷：取样品400-500g，粉碎后过425pμm的标准网筛，称取5g试样，加10ml水涡旋混匀，静置后加入15ml乙腈-醋酸溶液(v/v,99:1)和谷物提取包（含6g硫酸镁，1.5g过氧乙酸钠）,涡旋混匀、离心，吸取8ml上清液加到谷物净化管（1200mg硫酸镁，400mg psa，400mgc18）中，涡旋混匀、离心，准确吸取2ml上清液，40℃水浴中氮气吹至近干。加入1ml乙酸乙酯，过微孔滤膜后供uhplc-ms/ms测定。

15、（4）样品检测

16、准确称取5-10g试样样品，试样中分别添加3个不同浓度水平的8种标准物质混合标准溶液，每个添加水平做6个平行样品，按上述优化好的条件进行前处理及样品的测定，用相应基质匹配的工作曲线定量计算，以得到平均回收率和相对标准偏差（rsd），以此评估方法的准确度和精密度。

17、本发明的有益效果在于：

18、本发明提供一种同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d）残留的新方法，填补了柑橘和稻谷中8种植物生长剂检验方法标准的空白，为食品安全的有效监管提供了新的技术支撑。

技术特征：

1.一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留的分析方法，其特征在于：所述8种植物生长调节剂为矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚-3-丁酸、噻苯隆、2,4-d，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留的分析方法，其特征在于：超高效液相色谱-质谱条件为：

3.如权利要求1所述的一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留的分析方法，其特征在于：8种植物生长调节剂标准品在基质溶液中检测具体为：

4.如权利要求1所述的一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留的分析方法，其特征在于：所述样品前处理具体为：

5.如权利要求1所述的一种基于quechers-超高效液相色谱-串联质谱同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留的分析方法，其特征在于：所述样品检测具体为：

技术总结
本发明公开了一种同时检测柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留（矮壮素、烯效唑、氯吡脲、吲熟酯、胺鲜酯、吲哚‑3‑丁酸、噻苯隆、2,4‑D）的QuEChERS‑超高效液相色谱‑串联质谱分析方法。随着植物调节剂在农业生产中的广泛应用，植物生长调节剂不当使用的情形时有发生，农产品中植物生长调节剂的残留已成为当前食品安全的隐患之一。目前，部分植物生长调节剂在农产品中的残留限量未出规定且没有检验标准。本发明立足于食品安全监管中PGRS在食品中残留的检验检测方法的研究与开发，采用QuEChERS样品前处理技术，并结合UHPLC‑MS/MS分析法，构建了一种柑橘和稻谷中8种植物生长调节剂残留同时检测的分析新方法。该分析方法的线性良好，相关系数均在0.995以上，回收率在70.1%~105.6%之间，RSD均小于10.8%（n=6）。本发明为食品安全的有效监管提供了新的技术支撑。

技术研发人员：孔锋,黄宁,袁丽,赵超,杨希
受保护的技术使用者：鹰潭市检验检测认证院（鹰潭市综合检验检测中心、江西省铜及铜产品质量检验检测中心）
技术研发日：
技术公布日：2024/4/17