一种糖化血红蛋白线性物质及其制备方法与流程

本发明涉及糖化血红蛋白检测，具体的涉及一种糖化血红蛋白线性物质及其制备方法。

背景技术：

1、糖化血红蛋白(hba1c)是人血红细胞中血红蛋白和葡萄糖结合的复合物，与血液中葡萄糖的浓度成正比，可反映120天前的血糖水平，测定人血中的糖化血红蛋白浓度，对糖尿病的筛查和监控有重要意义。

2、常用的测定糖化血红蛋白的方法有离子交换层析、高效液相色谱、胶乳免疫比浊法、酶法等。不管采用什么测试方法，都需要在性能测试时进行糖化血红蛋白线性测试，因此线性物质制备显得尤为重要。线性测试样本优先选择天然临床样本，但是糖化血红蛋白极高值和极低值的天然临床样本收集比较困难，并且由于糖化血红蛋白项目的单位是比值，可获得的混合临床样本或在临床样本中添加糖化血红蛋白这种线性物质获取方式也不可行，因此线性物质的制备迫在眉睫。

3、对于低值线性物质，公开号为cn116625777b的中国专利公开了一种低水平冻干态糖化血红蛋白质控品及其制备方法，具体公开了：制备低水平糖化血红蛋白质控品的试剂组合，包括溶血剂和冻干保护剂；溶血剂包括磷酸盐缓冲液、叠氮化钠和表面活性剂；冻干保护剂包括nacl、bsa、tween-80、dtt、葡萄糖、海藻糖、乳糖、vc、tris-hcl、hepes和甘氨酸中的至少一种。

4、对于高值线性物质，通常采用先将人血红细胞里的血红蛋白糖基化再进行去基糖化的方法制备，例如公开号为cn115656526b的中国专利公开了一种糖化血红蛋白质控品的制备方法、复溶装置和复溶剂，具体公开了高值糖化血红蛋白溶液的制备方法，包括以人全血或动物全血为原料，用清洗液洗涤，然后离心处理，得到红细胞；用细胞破碎液对红细胞进行破碎处理；离心处理去掉杂质，得到纯净的血红蛋白溶液；向血红蛋白溶液中加入糖基化液进行反应，得到糖基化的血红蛋白溶液；透析糖基化的血红蛋白溶液，去掉杂质，得到高值糖化血红蛋白溶液。

5、然而，诸如上述专利提供的线性物质均是制成冻干品后进行储存，冻干品在使用前需要进行复溶，冻干粉在复溶过程中蛋白晶体不稳定，可能会导致其蛋白含量降低。使用冻干粉形态的糖化血红蛋白样本进行检测往往会造成检测结果不准确。由于冻干隔板可能存在不同位置温度不一致导致冻干品均匀性受影响。并且一般冻干瓶不能直接上仪器上测试，需要检验人员将复溶液手动转移到样品管中，操作繁琐。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术中冻干线性物质的缺陷，提供了一种糖化血红蛋白线性物质及其制备方法。

2、为了实现以上目的及其他目的，本发明是通过以下技术方案实现的：首先提供了一种糖化血红蛋白线性物质，包括糖化血红蛋白低值线性物质和糖化血红蛋白高值线性物质，所述糖化血红蛋白线性物质主要原材料包括血红蛋白、保护液、清洗液和糖基化液；所述保护液包括β-环糊精。

3、在一实施例中，所述保护液还包括缓冲盐、无机盐、防腐剂、蛋白保护剂以及稳定剂。

4、在一实施例中，所述缓冲盐是十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠中的一种或者两种的组合物；所述无机盐是氯化钠；所述防腐剂是proclin300；所述蛋白保护剂为酪蛋白；所述稳定剂是甘露醇。

5、在一实施例中，所述清洗液包括缓冲盐、无机盐和防腐剂。

6、在一实施例中，所述缓冲盐是十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠中的一种或者两种的组合物；所述无机盐是氯化钠；所述防腐剂是proclin300。

7、在一实施例中，所述糖基化液包括葡萄糖酸镁水合物、d-甘露糖、防腐剂、4-羟基苯甲酸甲酯、氟化钠、缓冲盐以及蛋白保护剂。

8、其次，本发明还提供了一种糖化血红蛋白线性物质的制备方法，用于制备上述任一项所述的糖化血红蛋白线性物质，包括糖化血红蛋白低值线性物质的制备和糖化血红蛋白高值线性物质的制备；

9、所述糖化血红蛋白低值线性物质的制备包括步骤：

10、s11，配制清洗液和保护液；

11、s12，处理红细胞样本，分别取10ml健康的人新鲜全血样本和猪血样本，剔除有溶血、脂血等异常状态的全血，弃去上层血浆，剩余红细胞作为原料使用；

12、s13，制备红细胞悬液，分别向s12中处理好的人红细胞和猪红细胞加入清洗液，离心弃去上层液体，重复用清洗液清洗直至上层液体无色澄清，将上层液体彻底去除，制备得到人红细胞悬液和猪红细胞悬液；

13、s14，制备糖化血红蛋白低值线性物质，向分别向s13中制备获得的人红细胞悬液和猪红细胞悬液加入保护液，直到血红蛋白量为120～160g/l后不再添加保护液，测出人糖化血红蛋白值5.0％，猪糖化血红蛋白值1.0％，并且将人糖化血红蛋白和猪糖化血红蛋白按照1：3的体积比混合后得到2％的糖化血红蛋白线性物质，获得糖化血红蛋白低值线性物质；

14、所述糖化血红蛋白高值线性物质的制备包括步骤：

15、s21，配置清洗液、糖基化液和保护液。

16、s22，处理红细胞样本；

17、取10ml健康的人新鲜全血样本，剔除有溶血、脂血等异常状态的全血，弃去上层血浆，剩余红细胞作为原料使用；

18、s23，糖基化血红蛋白，向红细胞中加入糖基化液孵育，在糖化血红蛋白浓度达到18.0％后停止孵育；

19、s24，去糖基化，将s23孵育后的红细胞悬液离心，弃去上层液体，再加入清洗液重复清洗直至上层液体无色澄清，加入保护液孵育，直到不稳定糖化血红蛋白在1.0％以下，制备获得红细胞悬液；

20、s25，制备糖化血红蛋白高值线性物质，收集s24中制备获得的红细胞悬液离心后去掉保护液，直到血红蛋白量为120～160g/l，即制备获得糖化血红蛋白高值线性物质。

21、在一实施例中，s11中所述清洗液包括如下组分原料：

22、

23、在一实施例中，s11中所述保护液包括如下组分原料：

24、

25、在一实施例中，s21中所述糖基化液包括如下组分原料：

26、

27、

28、本发明具备以下有益效果：

29、1、在保护液中添加β-环糊精，β-环糊精具有奇特的圆筒形空心结构的空间结构，因其分子外壁表现出较强的亲水性，分子内腔具有极强的疏水性，糖化血红蛋白与β-环糊精相互作用，对糖化血红蛋白有一定保护作用，增加了糖化血红蛋白稳定性，可以使血红蛋白以液态的形式稳定存储，使糖化血红蛋白线性物质更加稳定，从而方便糖化血红蛋白线性物质的使用，简化了操作。

30、2、本发明制备的液体的糖化血红蛋白低值线性物质最低可以达到2％，糖化血红蛋白高值线性物质可以达到18％，完全满足了市面上对糖化血红蛋白线性测试的浓度要求，并且，本发明制备的线性物质具有均匀性好、稳定性强的特点。

技术特征：

1.一种糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，包括糖化血红蛋白低值线性物质和糖化血红蛋白高值线性物质，所述糖化血红蛋白线性物质主要原材料包括血红蛋白、保护液、清洗液和糖基化液；所述保护液包括β-环糊精。

2.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，所述保护液还包括缓冲盐、无机盐、防腐剂、蛋白保护剂以及稳定剂。

3.根据权利要求2所述的一种糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，所述缓冲盐是十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠中的一种或者两种的组合物；所述无机盐是氯化钠；所述防腐剂是proclin300；所述蛋白保护剂为酪蛋白；所述稳定剂是甘露醇。

4.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，所述清洗液包括缓冲盐、无机盐和防腐剂。

5.根据权利要求4所述的一种糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，所述缓冲盐是十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠中的一种或者两种的组合物；所述无机盐是氯化钠；所述防腐剂是proclin300。

6.根据权利要求1所述的一种糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，所述糖基化液包括葡萄糖酸镁水合物、d-甘露糖、防腐剂、4-羟基苯甲酸甲酯、氟化钠、缓冲盐以及蛋白保护剂。

7.一种糖化血红蛋白线性物质的制备方法，用于制备如权利要求1～6任一项所述的糖化血红蛋白线性物质，其特征在于，包括糖化血红蛋白低值线性物质的制备和糖化血红蛋白高值线性物质的制备；

8.根据权利要求7所述的一种糖化血红蛋白线性物质的制备方法，其特征在于，s11中所述清洗液包括如下组分原料：

9.根据权利要求8所述的一种糖化血红蛋白线性物质的制备方法，其特征在于，s11中所述保护液包括如下组分原料：

10.根据权利要求7所述的一种糖化血红蛋白线性物质的制备方法，其特征在于，s21中所述糖基化液包括如下组分原料：

技术总结
本发明提供了一种糖化血红蛋白线性物质，包括糖化血红蛋白低值线性物质和糖化血红蛋白高值线性物质，所述糖化血红蛋白线性物质主要原材料包括血红蛋白、保护液、清洗液和糖基化液；所述保护液包括β‑环糊精。在保护液中添加β‑环糊精，β‑环糊精具有奇特的圆筒形空心结构的空间结构，因其分子外壁表现出较强的亲水性，分子内腔具有极强的疏水性，糖化血红蛋白与β‑环糊精相互作用，对糖化血红蛋白有一定保护作用，增加了糖化血红蛋白稳定性，可以使糖化血红蛋白以液态的形式稳定存储，从而方便糖化血红蛋白线性物质的使用，简化了操作。低值糖化血红蛋白最低可以达到2％，高值糖化血红蛋白可以达到18％，完全满足了市面上对糖化血红蛋白线性测试的浓度要求。

技术研发人员：马丽利,范文萍,邵建辉
受保护的技术使用者：精匠诊断技术（江苏）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10