GC-MS/MS测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法与流程

本申请涉及烟叶原料检测，特别是一种gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法中酮类香味成分方法。

背景技术：

1、初烤烟叶及以初烤烟叶为原料生产的再造烟叶均为烟草制品生产过程中的重要原料。以初烤烟叶、再造烟叶的香气直接关系到以其为原料生产的烟草制品的烟气吃味，而烟气中的酮类物质发挥着重要作用。无烟气烟草制品的吃味，亦受酮类物质等香味成分的影响。

2、酮类化合物是烟草原料产生烟气中的重要中性致香成分之一，对所得烟草制品的吃味具有显著影响，如香叶基丙酮具有新鲜的花香和果香香气，能够增强烟草制品的清甜香韵；异佛尔酮具有甜的、类似樟脑的香气，稀释后呈蜂蜜的香味，能够增强烟草制品的烟草本香和清香风味；苯乙酮具有甜的、很尖刺的香豆素香味、苦的芳香风味、山楂花香气以及类似金合欢和含羞草的香韵，能够与烟草香味协调，加强干草气息，改善烟草制品吸味品质。根据相关研究可知，烟草原料中酮类香味物质主要为28种，其结构式如图1所示。

3、目前关于烟草中酮类香味物质的测定方法主要有液相色谱法(lc)、液相色谱-质谱联用法(lc-ms)、液相色谱-串联质谱法(lc-ms/ms)、气相色谱法(gc)、气相色谱-质谱联用法(gc-ms)以及气相色谱-串联质谱法(gc-ms/ms)等。其中气相色谱-串联质谱法检测准确性相对较高，但该检测方法主要用于检测烟草制品中的次要生物碱(cn201710729655.6)、非脂肪类有机酸(cn201811106974.2)或农药及其他有害物质，无法实现对烟草原料物中酮类物质的全面检测。

4、现有酮类物质种类繁多，这导致现有检测方法无法有效区分二氢-β-紫罗兰酮与香叶基丙酮、法尼基丙酮与金合欢基丙酮两对同分异构体，影响对具体物质定量检测结果准确性。

5、公开于背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域普通技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、本申请针对上述技术问题提供了一种gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，该方法可实现对烟草原料中所含酮类物质的全面准确定量检测，尤其能够有效区分样品中的28种酮类香味物质中的二氢-β-紫罗兰酮与香叶基丙酮、法尼基丙酮与金合欢基丙酮两对同分异构体。

2、本申请提供了一种gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，包括以下步骤：

3、前处理后得到烟草及烟草制品样品的样品溶液，采用gc-ms/ms测定样品溶液中的酮类香味成分；

4、烟草及烟草制品包括烟叶、再造烟叶、烟草颗粒或无烟气烟草制品。

5、优选地，gc-ms/ms气相色谱-串联质谱法检测条件：

6、色谱柱为db-5ms ui，色谱柱尺寸为30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度为280℃；

7、升温程序：初温60℃，停留2min后以5℃/min升温至100℃并停留5min，再以2℃/min升温至120℃并停留1min，接着以5℃/min升温至200℃，然后以3℃/min升温至220℃并停留2min，最后以10℃/min升温至240℃；

8、所用载气为纯度99.999％的氮气，氮气流速为1.2ml/min；

9、所用猝灭气为纯度99.999％的氦气，氦气流速为2.25ml/min；

10、进样方式为分流进样，分流比为5:1；进样量为0.5μl；

11、质谱条件的扫描方式为mrm模式。

12、优选地，质谱条件中28种酮类香味物质的mrm参数为：

13、

14、

15、优选地，质谱条件：电离模式为ei；电离电压为70ev。

16、优选地，质谱条件的离子源温度为230℃；传输线温度为280℃；溶剂延迟2min。

17、优选地，前处理为：将烟草及烟草制品放入乙醇溶液中进行超声处理，超声处理后除去水分、过滤并用乙醇溶液稀释，得到样品溶液；

18、优选地，超声处理条件：40℃下超声功率为200w处理20min。

19、优选地，过滤所用过滤膜为0.22μm有机滤膜。

20、优选地，前处理中所用乙醇溶液中含内标物质，所含内标物的浓度为100ng/ml。

21、优选地，所用内标物质为：萘、乙酸苯乙酯、正十七烷，所用乙醇溶液的中内标物浓度为100ng/ml。

22、该方法具体的计算方法：采用dmrm方法对酮类香味成分标准溶液进行检测后绘制标准曲线，将标准系列溶液中待测物的含量与内标量之比对色谱图中待测物峰面积与内标面积的比值作图，得到工作曲线的a值和b值，得到28种酮类物质的线性回归方程及相关系数，然后通过下式计算样品溶液中酮类物质的含量：

23、

24、其中：mi为烟草中酮类物质i的含量，ng/g；ai为物质i的峰面积；a、b为由线性回归方程求出，将标准系列溶液中待测物的含量与内标量之比对色谱图中待测物峰面积与内标面积的比值作图，得到工作曲线的a值和b值；ms为样品溶液中的内标含量，ng；as为内标峰面积；v为样品溶液的体积，ml；m为进行本次分析的烟草制品质量，g。

25、取三次平行测定结果的算术平均值作为样品的最终测试结果，精确至0.01ng/g。

26、本申请能产生的有益效果包括：

27、1)本申请所提供的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，采用超声辅助提取初烤烟叶、再造烟叶、无烟气烟草制品中的酮类香味物质后，采用gc-ms/ms定量测定烟草及烟草制品中的28种酮类香味物质的含量。采用该方法能够有效区分样品中的28种酮类香味物质中的二氢-β-紫罗兰酮与香叶基丙酮、法尼基丙酮与金合欢基丙酮两对同分异构体，并分别对这两对同分异构体进行准确定性定量检测。

28、2)本申请所提供的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，该方法对28种酮类化合物的出限及定量限范围分别为0.65～2.77ng/ml和2.18～9.24ng/ml；28种酮类化合物的日内精密度范围在0.04％～3.51％之间，日间精密度在0.11％～3.36％之间，回收率在81.88％～119.32％之间，说明该方法对酮类物质的检测结果准确度能满足定量分析要求。

技术特征：

1.一种gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，gc-ms/ms气相色谱-串联质谱法检测条件：色谱柱为db-5ms ui，色谱柱尺寸为30 m× 0.25 mm × 0.25 μm；进样口温度为280℃；

3.根据权利要求1所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，质谱条件中28种酮类香味物质的mrm参数为：

4.根据权利要求1所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于， 质谱条件： 电离模式为ei； 电离电压为70 ev。

5.根据权利要求1所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，质谱条件的离子源温度为230℃；传输线温度为280℃；溶剂延迟2 min。

6.根据权利要求1～5中任意所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，前处理为：将烟草及烟草制品放入乙醇溶液中进行超声处理，超声处理后除去水分、过滤并用乙醇溶液稀释，得到样品溶液。

7.根据权利要求6所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，超声处理条件：40 ℃下超声功率为200 w处理20min。

8.根据权利要求6所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，过滤所用过滤膜为0.22 μm有机滤膜。

9.根据权利要求6所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，前处理中所用乙醇溶液中含内标物质，所含内标物的浓度为100 ng/ml。

10.根据权利要求9所述的gc-ms/ms测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，其特征在于，所用内标物质为：萘、乙酸苯乙酯、正十七烷，所用乙醇溶液的中内标物浓度为 100ng/ml。

技术总结
本申请公开了一种GC‑MS/MS测定烟草及烟草制品中酮类香味成分方法，包括以下步骤：前处理后得到烟草及烟草制品样品的样品溶液，采用GC‑MS/MS测定样品溶液中的酮类香味成分；该方法采用GC‑MS/MS定量测定烟草及烟草制品的28种酮类香味物质的含量。采用该方法能够有效区分样品中的28种酮类香味物质中的二氢‑β‑紫罗兰酮与香叶基丙酮、法尼基丙酮与金合欢基丙酮两对同分异构体，并分别对这两对同分异构体进行准确定性定量检测。

技术研发人员：蔡洁云,孙浩巍,顾健龙,李超,刘宇晨,王春琼,张轲,李海燕,张晓伟,龙杰,陈丹,李郸,宗达
受保护的技术使用者：云南省烟草质量监督检测站
技术研发日：
技术公布日：2024/5/16