本发明涉及生物，具体为一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物及试剂盒。
背景技术：
1、视神经脊髓炎谱系疾病(nmosd)是一组自身免疫介导的以视神经和脊髓受累为主的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病，主要累及脊髓和视神经，还可累及脑实质，好发于青壮年，女性居多，复发率及致残率高。多发性硬化(ms)和视神经脊髓炎(nmo)是较常见的两种不同的中枢神经系统脱髓鞘疾病。但是这两类中枢神经系统脱髓鞘疾病因其临床症状复杂多变，诊断和鉴别区分也相对困难。2004年科研人员首次在nmo患者血清中发现nmo-igg能与抗水通道蛋白4(aqp4)产生特异性结合，nmo-igg被证实为抗aqp4抗体。
2、aqp4抗体认为是视神经脊髓炎谱系疾病具有高度特异性的诊断标志物，特异度高达90％，敏感度约70％，对于nmosd疾病诊断和鉴别具有重要作用。aqp4抗体阳性的nmosd患者比抗体阴性的患者复发风险高，血清aqp4抗体滴度与患者的疾病活动度无关，但可提示疾病在发作期的严重程度。在急性期使用免疫治疗后其滴度可能会降低，可作为治疗疗效的评价指标。
3、目前，检测抗aqp4抗体的方法主要有以下几个：
4、cn107022548b一种人体抗aqp4自身抗体检测材料及其制备方法中提供了一种人体抗aqp4自身抗体检测材料及其制备方法，该方法采用的是免疫斑点法，先获取m1、m23亚型的aqp4全长目的基因，将其染入hek293细胞中，构建出表达m1、m23亚型aqp4的hek293/pci-neo-m1-aqp4细胞和hek293/pci-neo-m23-aqp4细胞；再提取上述细胞中的aqp4-细胞膜复合物；最后将aqp4-细胞膜复合物固化在载体上，即得到人体抗aqp4自身抗体检测材料。本发明以提取的aqp4-细胞膜复合物作为检测材料，可以减低造成背景着色的内源蛋白量，较目前使用细胞为检测材料进行的免疫荧光检测的方法进一步增加了检测灵敏度和特异性，使检测结果判读更加容易明确，能够简便快速的用于检测患者aqp4自身抗体。但是，该方法属于定性检测，且全程手工操作，耗时费力，结果人工判读，存在人为误差。
5、cn110982693a一种用于检测aqp4抗体的细胞爬片及应用中公开了一种用于检测aqp4抗体的细胞爬片及应用，所述细胞爬片是将hek293t细胞贴壁生长在盖玻片上，再用含aqp4基因的pcmv-ha-aqp4表达质粒转染hek293t细胞，获得表达aqp4蛋白的hek293t细胞并固定；同时未转染aqp4蛋白hek293t细胞固定于盖玻片上；然后将表达aqp4蛋白的hek293t细胞盖玻片和未转染aqp4蛋白的hek293t细胞盖玻片间隔固定在同一个载玻片的相同面上，分别作为反应区和对照区，获得所述细胞爬片。本方法可对细胞爬片成品细胞进行大量生产，且随取随用；检测人体内aqp4抗体的检验过程对设备的按要求相对较低，对技术要求低，时间花费少。但是，该方法属于定性检测，且全程手工操作，耗时费力，结果需要荧光显微镜人工判读，显微镜价格较高，且结果判读存在人为误差
6、cn111272998a一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体aqp4、mog和mbp的方法中公开了一种同时检测中枢脱髓鞘自身抗体aqp4、mog和mbp的方法，所述方法为：将aqp4、mog、mbp基因分别导入hek293t细胞中，分别与待测样品共同孵育，以转染空载体的hek293t细胞为对照，采用免疫荧光法进行检测，若荧光信号强于对照，则待测样品为阳性；荧光信号等于或小于对照信号，则为阴性。但是，该方法与上述专利无明显差异，属于定性检测，且全程手工操作，耗时费力，结果需要荧光显微镜人工判读，显微镜价格较高，且结果判读存在人为误差。
7、cn116819072a一种用于抗aqp4自身抗体检测的抗原蛋白组合物及化学发光检测试剂盒中提供一种用于抗aqp4自身抗体检测的抗原蛋白组合物及化学发光检测试剂盒。发明的抗原蛋白组合物包括特定序列的野生型aqp4蛋白和该野生型aqp4蛋白的两种特定突变方式形成的突变体蛋白。本发明以此抗原组合物作为检测抗aqp4自身抗体的抗原，进一步开发出了具有更高检测灵敏度的抗aqp4自身抗体化学发光检测试剂盒。但是，该方法属于定量检测，使用了2种aqp4突变体蛋白检测aqp4自身抗体。该方法存在灵敏度不高的劣势。
8、为了解决上述问题，实现实验过程的自动化和定量检测，同时保证检测高灵敏度，本发明提供了一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物及试剂盒。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物及试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。
2、为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物及试剂盒。
3、一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物，所述组合物包括aqp4-磁珠溶液、吖啶酯标记的aqp4-293t细胞。
4、较为优化地，所述aqp4-磁珠溶液的制备方法为：取链霉亲和素磁珠，使用磷酸缓冲液洗涤，加入生物素标记的aqp4抗原，旋转混匀30-40min，磁分离，洗涤，加入磁珠液，得到aqp4-磁珠溶液。
5、较为优化地，所述生物素标记的aqp4抗原的制备方法为：包括以下步骤：
6、s1：取sulfo-nhs-lc-lc-生物素，加入生物素标记液，得到生物素溶液；
7、s2：取aqp4抗原，加入生物素标记液，得到aqp4抗原溶液；
8、s3：将生物素溶液与aqp4抗原溶液混合；然后使用涡旋混匀仪震荡60-90min，去除生物素，得到生物素标记的aqp4抗原。
9、较为优化地，所述吖啶酯标记的aqp4-293t细胞的制备方法为：取hek-293t细胞株，培养，得到汇合度为80-85％的培养后的hek-293t细胞；对aqp4质粒进行转染，加入培养后的hek-293t细胞，混匀，在恒温条件下培养至可消化，得到转染后的细胞；取转染后的细胞，固定，清洗，然后加入吖啶磺酰胺，室温孵育30-40min，清洗，最后加入pbs缓冲液悬浮，得到吖啶酯标记的aqp4-293t细胞。
10、较为优化地，所述aqp4质粒的序列如seq id no.1所示；
11、aqp4质粒的序列如seq id no.1,具体为：
12、tgaaaacaaacagacaggttggtctgtttgtattataagtaaggactagtgaattcgccaccatgagtgacagacccacagcaaggcggtggggtaagtgtggacctttgtgtaccagagagaacatcatggtggctttcaaaggggtctggactcaagctttctggaaagcagtcacagcggaatttctggccatgcttatttttgttctcctcagcctgggatccaccatcaactggggtggaacagaaaagcctttaccggtcgacatggttctcatctccctttgctttggactcagcattgcaaccatggtgcagtgctttggccatatcagcggtggccacatcaaccctgcagtgactgtggccatggtgtgcaccaggaagatcagcatcgccaagtctgtcttctacatcgcagcccagtgcctgccagtgtggtgggaggcctgggagtcaccatggttcatggaaatcttaccgctggtcatggtctcctggttgagttgataatcacatttcaattggtgtttactatctttgccagctgtgattccaaacggactgatgtcaatagctttagcaattggattttctgttgcaattggacatttatttgcaatcaattatactggtgccagcatgaatcccgcccgatcctttggacctgcagttatcatgggaaattgtgaattcaaacgtcgttttaaagaagccttcagcaaagctgcccagcaaacaaaaggaagctacatggaggtggaggacaacaggagtcaggtagagacggatgacctgattctaaaacctggagtggtgcatgtgattgacgttgaccggggagaggagaagaaggggaaaga ccaatctggagaggtattgtcttcagtatctagagactacaaggatgacgatgacaaggattacaaagacgacgatgataactggctcaggactat。
13、较为优化地，所述生物素溶液与aqp4抗原溶液的体积比为1：1；所述生物素标记液为浓度为0.01m，ph＝7.4的磷酸盐缓冲液。
14、较为优化地，所述磁珠液为含0.1wt％吐温20、0.03wt％叠氮化钠、2wt％牛血清蛋白的磷酸缓冲液，ph为7.2。
15、一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的试剂盒，包括aqp4-磁珠溶液、吖啶酯标记的aqp4-293t细胞、预激发液、激发液、清洗液。
16、较为优化地，所述aqp4-磁珠溶液的浓度为1-1.2mg/ml。
17、较为优化地，所述清洗液为含有0.01wt％-0.1wt％吐温20的磷酸缓冲液，ph为7.2-7.6；预激发液为含1.00％(w/v)过氧化氢酸性溶液；激发液为0.35mol/l的氢氧化钠溶液。
18、与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：
19、(1)本发明依据aqp4的y型结构特点，aqp4的两侧臂的具有抗原结合点，一侧同包被磁珠的固相aqp4抗原相结合，另一侧则同随后加入的吖啶酯化的表达aqp4的293t细胞相结合，从而形成桥式结构，最后再利用吖啶酯与其底物的显色反应检测。本发明将荧光免疫细胞染色法法与化学发光法两个方法中的优点结合，使用了表达aqp4的293t细胞作为一种抗原，优势有两点：一是吖啶酯直接标记于细胞上，细胞起到了放大信号的作用，提高了检测的灵敏度。二是抗原直接表达于细胞上，其活性最高，可提高检测的灵敏度与特异性，同时实现了实验过程的自动化和定量检测。
20、本发明既保留了荧光免疫细胞染色法检测技术中抗原的高灵敏度，还实现了实验过程的自动化和定量检测，在保证检测高灵敏度的同时实现了实验过程的省时省力，且定量判读结果，避免了人为误差干扰。