一种检测外周血自身免疫抗体AQP4的组合物及试剂盒的制作方法

文档序号:38217303发布日期:2024-06-06 18:52阅读:92来源:国知局
技术特征:

1.一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:所述组合物包括aqp4-磁珠溶液、吖啶酯标记的aqp4-293t细胞。

2.根据权利要求1所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:

3.根据权利要求2所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:所述生物素标记的aqp4抗原的制备方法为:包括以下步骤:

4.根据权利要求1所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:所述吖啶酯标记的aqp4-293t细胞的制备方法为:取hek-293t细胞株,培养,得到汇合度为80-85%的培养后的hek-293t细胞;对aqp4质粒进行转染,加入培养后的hek-293t细胞,混匀,在恒温条件下培养至可消化,得到转染后的细胞;取转染后的细胞,固定,清洗,然后加入吖啶磺酰胺,室温孵育30-40min,清洗,最后加入pbs缓冲液悬浮,得到吖啶酯标记的aqp4-293t细胞。

5.根据权利要求4所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:所述aqp4质粒的序列如seq id no.1所示。

6.根据权利要求3所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:所述生物素溶液与aqp4抗原溶液的体积比为1:1;所述生物素标记液为浓度为0.01m,ph=7.4的磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求2所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的组合物,其特征在于:所述磁珠液为含0.1wt%吐温20、0.03wt%叠氮化钠、2wt%牛血清蛋白的磷酸缓冲液,ph为7.2。

8.一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的试剂盒,其特征在于:包括aqp4-磁珠溶液、吖啶酯标记的aqp4-293t细胞、预激发液、激发液、清洗液。

9.根据权利要求8所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的试剂盒,其特征在于:所述aqp4-磁珠溶液的浓度为1-1.2mg/ml。

10.根据权利要求8所述的一种检测外周血自身免疫抗体aqp4的试剂盒,其特征在于:所述清洗液为含有0.01wt%-0.1wt%吐温20的磷酸缓冲液,ph为7.2-7.6;预激发液为含1.00%(w/v)过氧化氢酸性溶液;激发液为0.35mol/l的氢氧化钠溶液。


技术总结
本发明涉及生物技术领域,具体为一种检测外周血自身免疫抗体AQP4的组合物及试剂盒。本发明依据AQP4的两侧臂的具有抗原结合点,一侧同包被磁珠的固相AQP4抗原相结合,另一侧则同随后加入的吖啶酯化的表达AQP4的293T细胞相结合,从而形成桥式结构,最后再利用吖啶酯与其底物的显色反应检测。本发明将荧光免疫细胞染色法法与化学发光法结合,使用了表达AQP4的293T细胞作为一种抗原,吖啶酯直接标记于细胞上,细胞起到了放大信号的作用,提高了检测的灵敏度。抗原直接表达于细胞上,其活性最高,可提高检测的灵敏度与特异性。在保证检测高灵敏度的同时实现了实验过程的省时省力,且定量判读结果,误差干扰小。

技术研发人员:刘基业,李瑞琴,赵天润,黄柳柳,沈佳炜,相鸿坤,高杰锋,吴晖东
受保护的技术使用者:上海柏慧康生物科技有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/6/5
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