本申请涉及一种化学检测分析领域，具体涉及一种氮亚硝基化合物衍生化定量方法。
背景技术：
1、n-亚硝胺类化合物因其代谢激活后具有很强的基因毒性，被认为是高度致癌的物质。世界卫生组织国际癌症研究机构(iarc)的致癌物清单中，n-亚硝基二甲胺(ndma)和n-亚硝基二乙胺(ndea)均被列为2a类致癌物。ich m7指南也明确指出该类化合物具有较高的致癌性。n-亚硝基类杂质的来源主要包括原料和工艺。例如，在沙坦类药物的合成过程中，为了引入四唑环或去除过量的原料，可能会引入ndma、ndea和n-亚硝基-n-甲基-4-氨基丁酸(nmba)等杂质。在二甲双胍、雷尼替丁和尼扎替丁的合成过程中，n-亚硝基类基因毒性杂质的产生则与使用二甲胺作为前体有关。
2、随着研究的深入，越来越多复杂结构的氮亚硝基杂质被发现。除了上述小分子外，同时存在氮亚硝基官能团直接结合上原料药的可能。以那屈肝素钙为例，由于在降解肝素的过程中使用了亚硝酸钠，使得亚硝基官能团直接结合上肝素的重复单元的支链上。类似于该情况的原料药氮亚硝基副产物分子量跨度大、组分复杂且结构不确定，极大限制了对氮亚硝基含量进行测定。此外，含有二级胺类结构的药物在制剂阶段也存在结合亚硝基结构的风险。
3、现有的对于此类未知结构、复杂组分的氮亚硝基化合物的检测方法为化学发光法进行检测，即以氮亚硝基二正丙胺为标样，通过氢溴酸将氮亚硝基官能团化学裂解为一氧化氮，通过一氧化氮和臭氧反应的能级跃迁产生的光进行定量分析。该方法受限于仪器以及化学裂解进程，得到的色谱图峰型差、拖尾严重，无法满足检测灵敏度以及定量分析的要求。
4、在杂质研究中，小分子的氮亚硝基杂质可以通过简单合成或购买得到标准品，但复杂体系中则需要购买大量标准品，极大增加了分析成本。而复杂结构的氮亚硝基标准品通常难以获得，进一步限制了分析方法的研究和开发。
5、本研究可以将未知结构、复杂组分的含氮亚硝基官能团的结构，通过衍生化方法将其转化为已知结构，可检测易检测的目标分析物，再借助现有方法对其进行定量分析，从而实现对氮亚硝基化合物的特异性定量检测。
技术实现思路
1、为解决现有技术中氮亚硝基化合物检测的困难，本申请提供一种检测方法：
2、一种氮亚硝基化合物衍生化定量方法，包括以下步骤：
3、步骤1：待测氮亚硝基化合物样品衍生化，将1,1-二苯乙烯和氮亚硝基化合物样品溶解于甲醇中，然后添加甲磺酸，在紫外灯的照射下光照，得到衍生化后的待测氮亚硝基化合物样品；
4、步骤2：液相分析衍生化后的氮亚硝基化合物样品，采用waterstmc18色谱柱(3.5μm，4.6×150nm)进行分离，柱温控制在35℃，流速为0.5ml/min，进样量为10μl，紫外检测波长为290nm，其中，流动相a相为含0.1％乙酸水，b相为含0.1％乙酸乙腈，采用流动相a:流动相b＝(60％～40％):(60％～40％)的比例进行分离；
5、步骤3：定量计算氮亚硝基化合物的含量，氮亚硝基化合物样品衍生化后转化为α-氨基肟衍生物，通过对α-氨基肟衍生物的定量分析，定量计算氮亚硝基化合物的含量。
6、本申请还提供所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法在检测领域中的应用。
7、有益效果：
8、目前对于复杂组分氮亚硝基化合物的检测大多是在尽可能分离，分别检测，这对分析方法以及仪器提出了很高要求。美国fda在2024年9月份最新的《人用药中亚硝胺杂质控制》中也给出了，如果在建立了完整的风险评估方法前提下，对于一些药物结构上没有特殊官能团、制药工艺中没有引入亚硝胺的风险的药物可以只对总的氮亚硝胺含量进行控制。
9、但目前没有很好的方法对总的氮亚硝胺进行检测，只有欧洲药典ep 10.0提供了一种化学反应-化学发光的方法。主要原理将氮亚硝基转化为no，通过于臭氧反应发光，将光信号转化为电信号，用于浓度检测。但是由于化学反应并非是瞬时完成的，造成出峰信号往往达不到分析检测要求。本申请是先将氮亚硝基进行捕获，将其转化为可检测易检测的α-氨基肟衍生物。在本申请实施例中，样品前处理进行研究，提出针对氮亚硝基化合物的最佳的反应条件，使得整个反应过程可控、方便和可重复，可以在液相中得到很好的检测信号。
10、本申请通过一种氮亚硝基标准品进行标定，用多种其他种类的氮亚硝基化合物进行验证，依然具有很好的检测准确性，表明该方法对于复杂组分中多种氮亚硝基化合物可以用同一种方法进行检测。极大的减轻了分析困难以及不同氮亚硝胺试剂的购买成本。
11、本申请还通过厄贝沙坦这一相对复杂结构药物进行实验证明，针对复杂药物结构或组分中的氮亚硝基也能很好的检测，为目前复杂结构中的氮亚硝基检测提供一种新的方法。
12、本申请建立了一种简便而灵敏的液相色谱定量分析方法，成功地实现了对氮亚硝基化合物的定量测定。该方法具有高度的选择性、灵敏度和准确性，适用于复杂样品中氮亚硝基化合物的准确测定。这一研究为将该方法进一步应用于环境监测、食品安全等领域，尤其是对复杂药物结构或复杂组分的总氮亚硝胺定量分析提供了可行的手段。
1.一种氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤1中，甲磺酸和氮亚硝基化合物的摩尔质量比为(0.5～2):1。
3.根据权利要求1所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤1中，所述紫外灯的波长范围为365nm～405nm。
4.根据权利要求3所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤1中，所述紫外灯的波长为290nm。
5.据权利要求1所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤1中，在紫外灯的照射下光照时间为0小时～8小时。
6.据权利要求5所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤1中，在紫外灯的照射下光照时间为2小时。
7.根据权利要求1所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤2中，液相检测方法的分析时间及梯度为：
8.根据权利要求1所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法，其特征在于，所述步骤3中，定量计算氮亚硝基化合物的方法为：根据步骤1和2的检测方法，检测标品并拟合标准曲线，并检测确认定量检出限，在根据骤1和2的检测方法，检测待测样品代入拟合曲线定量计算待测样品中氮亚硝基化合物的含量。
9.权利要求1-8中任一项所述的氮亚硝基化合物衍生化定量方法在检测领域中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括环境监测、食品检测以及药物工艺中基因毒的分析。