诊断结核病的化合物和方法

专利名称：诊断结核病的化合物和方法
技术领域：
本发明总地涉及结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)感染的检测。本发明更具体地涉及包含结核分枝杆菌抗原、其一部分或其它变体的多肽，以及这些多肽用来血清诊断结核分枝杆菌感染的用途。
背景技术：
结核病是一种慢性传染性疾病，它通常由结核分枝杆菌感染引起。它在发展中国家中是主要的疾病，对于世界上的发达地区也是正增加的问题，每年有大约800万新的病例和300万死者。尽管感染可能在相当长的时间内没有症状，但是该病最常见的表现为肺部急性炎症，导致发热和干咳。若不治疗，通常会导致严重的并发症和死亡。
虽然结核病通常可用长期抗生素治疗来控制，但是这些治疗却不足以防止疾病的传播。受感染的个体可能没有症状，但有时有传染性。另外，虽然遵从治疗方案很关键，但是患者的行为很难监控。一些患者没有完成疗程，这样会导致治疗没有效果并产生抗药性。
抑制结核病的传播需要有效的疫苗接种和准确地早期诊断该疾病。当前，用活细菌免疫接种是诱导保护性免疫力最有效的方法。用于此目的的最常用的分枝杆菌是Bacillus Calmette-Guerin(BCG)卡介苗，一种牛分枝杆菌的无毒菌株。然而，BCG的安全性和有效性引起了争论，一些国家(如美国)不对一般公众接种该疫苗。诊断通常用皮肤试验来实现，该试验涉及真皮内接触结核菌素PPD(纯化的蛋白衍生物)。抗原特异性T细胞应答在注射后48-72小时在注射部位导致可测定的培育，表明接触过分枝杆菌抗原。然而，该试验的问题是敏感性和特异性，且不能区别接种过BCG疫苗的个体和感染的个体。
尽管已证明巨噬细胞起结核分枝杆菌免疫力的主要效应物的作用，但T细胞却是该免疫力的主要诱导物。T细胞在抵抗结核分枝杆菌感染的保护中所起的基本作用AIDS患者中通过结核分枝杆菌的发病频繁而得以阐明，这是由于人免疫缺陷病毒(HIV)感染伴有CD4 T细胞损耗。已经证明分枝杆菌反应性CD4 T细胞是γ干扰素(IFN-γ)的强效生产者，进而证明γ干扰素引发了小鼠体内巨噬细胞的抗分枝杆菌作用。尽管IFN-γ在人体内的作用尚不清楚，但是研究已经表明，单用1,25-二羟基-维生素D3或与IFN-γ或肿瘤坏死因子α合用激活了人巨噬细胞，从而抑制了结核分枝杆菌感染。另外，已知IFN-γ刺激人巨噬细胞产生1,25-二羟基-维生素D3。类似地，业已证明IL-12在刺激对结核分枝杆菌感染的抵抗力中起作用。关于结核分枝杆菌感染的免疫学的综述参见Chan和Kaufmann在《结核病发病机理、保护和控制》，Bloom编辑，ASM出版社，Washington,DC,1994。
因此，本领域中需要有改进的诊断方法来检测结核病。本发明实现了这一需求并且还提供了其它有关的优点。
发明概述简言之，本发明提供了诊断结核病的组合物和方法。一方面，本发明提供了多肽，该多肽含有可溶性结核分枝杆菌抗原的抗原性部分、或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的该抗原的变体。在该方面的一个实施方案中，可溶性抗原具有下列N-端序列中的一个序列
(a)Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu(SEQ ID NO:115)；(b)Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser(SEQ ID NO:116)；(c)Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg(SEQ ID NO:117)；(d)Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro(SEQ ID NO:118)；(e)Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val(SEQ ID NO:119)；(f)Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro(SEQ IDNO:120)；(g)Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO:121)；(h)Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly(SEQ ID NO:122)；(i)Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn(SEQ ID NO:123)；(j)Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser,(SEQ ID NO:129)(k)Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp；(SEQ ID NO:130)或(l)Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID NO:131)其中Xaa可以是任何氨基酸。
在一个相关的方面，提供了多肽，该多肽含有结核分枝杆菌抗原的免疫原性部分、或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的该抗原的变体，该抗原具有下列N-端序列之一(m)Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID NO:132)或(n)Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe；(SEQ ID NO:124)其中Xaa可以是任何氨基酸。
在另一个实施方案中，可溶性结核分枝杆菌抗原包含由DNA序列编码的氨基酸序列，该DNA序列选自SEQ ID NO:1、2、4-10、13-25、52、94和96中描述的序列、所述序列的互补序列、以及在中等严谨条件下与SEQ ID NO:1、2、4-10、13-25、52、94和96中描述的序列或其互补序列杂交的DNA序列。
在一个相关的方面，多肽包含结核分枝杆菌抗原的抗原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的该抗原的变体，其中抗原包含的氨基酸序列由DNA序列编码，该DNA序列选自SEQ ID NO:26-51、133、134、158-178、184-188、194-196、198、210-220、232、234、235、237-242、248-251、256-271、287、288、290-293和298-337中描述的序列、所述序列的互补序列、以及在中等严谨条件下与SEQ ID NO:26-51、133、134、158-178、184-188、194-196、198、210-220、232、234、235、237-242、248-251、256-271、287、288、290-293和298-337中描述的序列或其互补序列杂交的DNA序列。
在相关方面，还提供了编码上述多肽的DNA序列、含有这些DNA序列的重组表达载体以及转化或转染了这些表达载体的宿主细胞。
另一方面，本发明提供了融合蛋白，该蛋白含有第一种和第二种本发明的多肽，或者本发明的多肽与一种已知的结核分枝杆菌抗原。
在本发明的另一方面，提供了检测患者结核病的方法和诊断试剂盒。该方法包括(a)使生物样品与至少一种上述多肽接触；和(b)检测样品中结合上述多肽的抗体是否存在，从而检测生物样品中结核分枝杆菌的感染。合适的生物样品包括全血、痰液、血清、血浆、唾液、脑脊液和尿液。诊断试剂盒包含一种或多种上述多肽与检测试剂联合使用。
本发明还提供检测结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)从患者获得生物样品；(b)使样品在聚合酶链反应中与至少一个寡核苷酸引物接触，该寡核苷酸引物对编码上述多肽的DNA序列有特异性；和(c)检测样品中在第一和第二寡核苷酸引物存在下扩增的DNA序列。在一个实施方案中，寡核苷酸引物含有该DNA序列的至少大约10个连续的核苷酸。
另一方面，本发明提供了检测患者结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)获得患者的生物样品；(b)使样品与对编码上述多肽的DNA序列有特异性的寡核苷酸探针接触；和(c)检测样品中与寡核苷酸探针杂交的DNA序列。在一个实施方案中，寡核苷酸探针包含该DNA序列的至少约15个连续的核苷酸。
另一方面，本发明提供了与上述多肽结合抗体(单克隆抗体和多克隆抗体)，以及它们在检测结核分枝杆菌感染中的用途。
在参看了下列详细描述和所附附图后，本发明的这些方面和其它方面将是显而易见的。本文公开的所有文献均全部纳入本文作参考，正如每一份文献单独纳入本文一样。
附图简述和序列说明

图1A和B说明了实施例1中描述的14Kd,20Kd和26Kd抗原分别刺激第一和第二结核分枝杆菌免疫供体T细胞的增殖和干扰素γ产生情况。
图2A-D描述了针对分泌型结核分枝杆菌蛋白(已知的结核分枝杆菌抗原85b)以及本发明抗原Tb38-1和TbH-9产生的抗血清，分别与结核分枝杆菌裂解液(泳道2)、结核分枝杆菌分泌性蛋白(泳道3)、重组Tb38-1(泳道4)、重组TbH-9(泳道5)以及重组85b(泳道5)的反应性。
图3A描述了分泌型结核分枝杆菌蛋白、重组TbH-9以及对照抗原TbRa11刺激TbH-9特异性T细胞克隆增殖。
图3B描述了分泌型结核分枝杆菌蛋白、PPD和重组TbH-9刺激TbH-9-特异性T细胞克隆产生干扰素γ。
图4描述了两种典型的多肽与感染了结核分枝杆菌的个体以及未感染个体的血清的反应性与细菌裂解液反应性的比较。
图5显示了四种典型的多肽与感染及未感染结核分枝杆菌的个体的血清的反应性，与38kD抗原反应性的比较。
图6显示了重组38kD和TbRa11抗原与结核分枝杆菌患者、PPD阳性献血员以及正常献血员的血清的反应性。
图7显示了抗原TbRa2A与38kD阴性血清的反应性。
图8显示了SEQ ID NO:60的抗原与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清的反应性。
图9描述了重组抗原TbH-29(SEQ ID NO:137)与结核分枝杆菌患者、PPD阳性献血员和正常献血员的血清经间接ELISA测得的反应性。
图10描述了重组抗原TbH-33(SEQ ID NO:140)与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清、以及与结核分枝杆菌患者合并血清的直接和间接ELISA测得的反应性。
图11描述了浓度增加的重组抗原TbH-33(SEQ ID NO:140)与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清经ELISA测得的反应性。
图12A-E分别描述了重组抗原MO-1、MO-2、MO-4、MO-28和MO-29分别与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清经ELISA测得的反应性。
SEQ ID NO:1是TbRa1的DNA序列。
SEQ ID NO:2是TbRa10的DNA序列。
SEQ ID NO:3是TbRa11的DNA序列。
SEQ ID NO:4是TbRa12的DNA序列。
SEQ ID NO:5是TbRa13的DNA序列。
SEQ ID NO:6是TbRa16的DNA序列。
SEQ ID NO:7是TbRa17的DNA序列。
SEQ ID NO:8是TbRa18的DNA序列。
SEQ ID NO:9是TbRa19的DNA序列。
SEQ ID NO:10是TbRa24的DNA序列。
SEQ ID NO:11是TbRa26的DNA序列。
SEQ ID NO:12是TbRa28的DNA序列。
SEQ ID NO:13是TbRa29的DNA序列。
SEQ ID NO:14是TbRa2A的DNA序列。
SEQ ID NO:15是TbRa3的DNA序列。
SEQ ID NO:16是TbRa32的DNA序列。
SEQ ID NO:17是TbRa35的DNA序列。
SEQ ID NO:18是TbRa36的DNA序列。
SEQ ID NO:19是TbRa4的DNA序列。
SEQ ID NO:20是TbRa9的DNA序列。
SEQ ID NO:21是TbRaB的DNA序列。
SEQ ID NO:22是TbRaC的DNA序列。
SEQ ID NO:23是TbRaD的DNA序列。
SEQ ID NO:24是YYWCPG的DNA序列。
SEQ ID NO:25是AAMK的DNA序列。
SEQ ID NO:26是TbL-23的DNA序列。
SEQ ID NO:27是TbL-24的DNA序列。
SEQ ID NO:28是TbL-25的DNA序列。
SEQ ID NO:29是TbL-28的DNA序列。
SEQ ID NO:30是TbL-29的DNA序列。
SEQ ID NO:31是TbH-5的DNA序列。
SEQ ID NO:32是TbH-8的DNA序列。
SEQ ID NO:33是TbH-9的DNA序列。
SEQ ID NO:34是TbM-1的DNA序列。
SEQ ID NO:35是TbM-3的DNA序列。
SEQ ID NO:36是TbM-6的DNA序列。
SEQ ID NO:37是TbM-7的DNA序列。
SEQ ID NO:38是TbM-8的DNA序列。
SEQ ID NO:39是TbM-9的DNA序列。
SEQ ID NO:40是TbM-12的DNA序列。
SEQ ID NO:41是TbM-13的DNA序列。
SEQ ID NO:42是TbM-15的DNA序列。
SEQ ID NO:43是TbH-4的DNA序列。
SEQ ID NO:44是TbH-4-FWD的DNA序列。
SEQ ID NO:45是TbH-12的DNA序列。
SEQ ID NO:46是Tb38-1的DNA序列。
SEQ ID NO:47是Tb38-4的DNA序列。
SEQ ID NO:48是TbL-17的DNA序列。
SEQ ID NO:49是TbL-20的DNA序列。
SEQ ID NO:50是TbL-21的DNA序列。
SEQ ID NO:51是TbH-16的DNA序列。
SEQ ID NO:52是DPEP的DNA序列。
SEQ ID NO:53是DPEP的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:54是DPV N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:55是AVGS N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:56是AAMK N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:57是YYWC N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:58是DIGS N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:59是AEES N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:60是DPEP N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:61是APKT N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:62是DPAS N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:63是TbM-1肽的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:64是TbRa1的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:65是TbRa10的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:66是TbRa11的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:67是TbRa12的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:68是TbRa13的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:69是TbRa16的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:70是TbRa17的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:71是TbRa18的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:72是TbRa19的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:73是TbRa24的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:74是TbRa26的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:75是TbRa28的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:76是TbRa29的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:77是TbRa2A的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:78是TbRa3的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:79是TbRa32的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:80是TbRa35的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:81是TbRa36的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:82是TbRa4的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:83是TbRa9的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:84是TbRaB的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:85是TbRaC的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:86是TbRaD的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:87是YYWCPG的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:88是TbAAMK的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:89是Tb38-1的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:90是TbH-4的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:91是TbH-8的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:92是TbH-9的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:93是TbH-12的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:94是DPAS的DNA序列。
SEQ ID NO:95是DPAS的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:96是DPV的DNA序列。
SEQ ID NO:97是DPV的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:98是ESAT-6的DNA序列。
SEQ ID NO:99是ESAT-6的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:100是TbH-8-2的DNA序列。
SEQ ID NO:101是TbH-9FL的DNA序列。
SEQ ID NO:102是TbH-9FL的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:103是TbH-9-1的DNA序列。
SEQ ID NO:104是TbH-9-1的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:105是TbH-9-4的DNA序列。
SEQ ID NO:106是TbH-9-4的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:107是Tb38-1F2 IN的DNA序列。
SEQ ID NO:108是Tb38-1F2 RP的DNA序列。
SEQ ID NO:109是Tb37-FL的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:110是Tb38-IN的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:111是Tb38-1F3的DNA序列。
SEQ ID NO:112是Tb38-1F3的推导的氨基酸序列。
SEQ ID NO:113是Tb38-1F5的DNA序列。
SEQ ID NO:114是Tb38-1F6的DNA序列。
SEQ ID NO:115是DPV的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:116是AVGS的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:117是AAMK的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:118是YYWC的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:119是DIGS的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:120是AAES的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:121是DPEP的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:122是APKT的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:123是DPAS的推导的N-端氨基酸序列。
SEQ ID NO:124是DPPD N-端抗原的蛋白质序列。
SEQ ID NO:125-128是四个DPPD溴化氰片段的蛋白质序列。
SEQ ID NO:129是XDS抗原的N-端蛋白质序列。
SEQ ID NO:130是AGD抗原的N-端蛋白质序列。
SEQ ID NO:131是APE抗原的N-端蛋白质序列。
SEQ ID NO:132是XYI抗原的N-端蛋白质序列。
SEQ ID NO:133是TbH-29的DNA序列。
SEQ ID NO:134是TbH-30的DNA序列。
SEQ ID NO:135是TbH-32的DNA序列。
SEQ ID NO:136是TbH-33的DNA序列。
SEQ ID NO:137是TbH-29的预计氨基酸序列。
SEQ ID NO:138是TbH-30的预计氨基酸序列。
SEQ ID NO:139是TbH-32的预计氨基酸序列。
SEQ ID NO:140是TbH-33的预计氨基酸序列。
SEQ ID NO:141-146是用于制备含有TbRa3,38kD和Tb38-1的融合蛋白的PCR引物。
SEQ ID NO:147是含有TbRa3,38kD和Tb38-1的融合蛋白的DNA序列。
SEQ ID NO:148是含有TbRa3,38kD和Tb38-1的融合蛋白的氨基酸序列。
SEQ ID NO:149是结核分枝杆菌抗原38kD的DNA序列。
SEQ ID NO:150是结核分枝杆菌抗原38kD的氨基酸序列。
SEQ IDNO:151是XP14的DNA序列。
SEQ ID NO:152是XP24的DNA序列。
SEQ ID NO:153是XP31的DNA序列。
SEQ ID NO:154是XP32的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:155是XP32的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:156是XP14的预计氨基酸序列。
SEQ ID NO:157是XP14反向互补序列编码的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:158是XP27的DNA序列。
SEQ ID NO:159是XP36的DNA序列。
SEQ ID NO:160是XP4的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:161是XP5的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:162是XP17的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:163是XP30的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:164是XP2的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:165是XP2的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:166是XP3的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:167是XP3的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:168是XP6的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:169是XP6的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:170是XP18的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:171是XP18的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:172是XP19的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:173是XP19的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:174是XP22的5＇DNA 序列。
SEQ ID NO:175是XP22的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:176是XP25的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:177是XP25的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:178是TbH4-XPI的全长DNA序列。
SEQ ID NO:179是TbH4-XP1的预计氨基酸序列。
SEQ ID NO:180是TbH4-XP1的反向互补序列编码的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:181是XP36编码的第一个预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:182是XP36编码的第二个预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:183是XP36的反向互补序列编码的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:184是RDIF2的DNA序列。
SEQ ID NO:185是RDIF5的DNA序列。
SEQ ID NO:186是RDIF8的DNA序列。
SEQ ID NO:187是RDIF10的DNA序列。
SEQ ID NO:188是RDIF11的DNA序列。
SEQ ID NO:189是RDIF2的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:190是RDIF5的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:191是RDIF8的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:192是RDIF10的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:193是RDIF11的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:194是RDIF12的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:195是RDIF12的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:196是RDIF7的DNA序列。
SEQ ID NO:197是RDIF7的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:198是DIF2-1的DNA序列。
SEQ ID NO:199是DIF2-1的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:200-207是用来制备含有TbRa3(38kD)、Tb38-1和DPEP的融合蛋白(后称TbF-2)的PCR引物。
SEQ ID NO:208是融合蛋白TbF-2的DNA序列。
SEQ ID NO:209是融合蛋白TbF-2的氨基酸序列。
SEQ ID NO:210是MO-1的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:211是MO-2的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:212是MO-4的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:213是MO-8的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:214是MO-9的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:215是MO-26的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:216是MO-28的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:217是MO-29的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:218是MO-30的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:219是MO-34的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:220是MO-35的5＇DNA序列。
SEQ ID NO:221是MO-1的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:222是MO-2的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:223是MO-4的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:224是MO-8的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:225是MO-9的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:226是MO-26的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:227是MO-28的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:228是MO-29的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:229是MO-30的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:230是MO-34的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:231是MO-35的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:232是MO-10的测定的DNA序列。
SEQ ID NO:233是MO-10的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:234是MO-27的3＇DNA序列。
SEQ ID NO:235是DPPD的全长DNA序列。
SEQ ID NO:236是DPPD的预计全长氨基酸序列。
SEQ ID NO:237是LSER-10的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:238是LSER-11的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:239是LSER-12的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:240是LSER-13的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:241是LSER-16的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:242是LSER-25的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:243是LSER-10的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:244是LSER-12的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:245是LSER-13的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:246是LSER-16的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:247是LSER-25的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:248是LSER-18的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:249是LSER-23的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:250是LSER-24的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:251是LSER-27的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:252是LSER-18的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:253是LSER-23的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:254是LSER-24的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:255是LSER-27的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:256是测得的LSER-1的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:257是测得的LSER-3的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:258是测得的LSER-4的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:259是测得的LSER-5的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:260是测得的LSER-6的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:261是测得的LSER-8的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:262是测得的LSER-14的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:263是测得的LSER-15的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:264是测得的LSER-17的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:265是测得的LSER-19的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:266是测得的LSER-20的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:267是测得的LSER-22的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:268是测得的LSER-26的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:269是测得的LSER-28的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:270是测得的LSER-29的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:271是测得的LSER-30的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:272是LSER-1的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:273是LSER-3的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:274是LSER-5的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:275是LSER-6的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:276是LSER-8的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:277是LSER-14的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:278是LSER-15的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:279是LSER-17的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:280是LSER-19的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:281是LSER-20的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:282是LSER-22的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:283是LSER-26的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:284是LSER-28的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:285是LSER-29的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:286是LSER-30的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:287是LSER-9的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:288是LSER-6的反向互补序列的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:289是LSER-6的反向互补序列的预计的氨基酸序列。
SEO ID NO:290是MO-12的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:291是MO-13的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:292是MO-19的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:293是MO-39的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:294是MO-12的预计的氨基酸序列。
SEO ID NO:295是MO-13的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:296是MO-19的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:297是MO-39的预计的氨基酸序列。
SEQ ID NO:298是Erdsn-1的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:299是Erdsn-2的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:300是Erdsn-4的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:301是Erdsn-5的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:302是Erdsn-6的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:303是Erdsn-7的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:304是Erdsn-8的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:305是Erdsn-9的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:306是Erdsn-10的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:307是Erdsn-12的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:308是Erdsn-13的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:309是Erdsn-14的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:310是Erdsn-15的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:311是Erdsn-16的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:312是Erdsn-17的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:313是Erdsn-18的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:314是Erdsn-21的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:315是Erdsn-22的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:316是Erdsn-23的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:317是Erdsn-25的测得的5＇cDNA序列。
SEQ ID NO:318是Erdsn-1的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:319是Erdsn-2的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:320是Erdsn-4的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:321是Erdsn-5的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:322是Erdsn-7的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:323是Erdsn-8的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:324是Erdsn-9的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:325是Erdsn-10的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:326是Erdsn-12的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:327是Erdsn-13的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:328是Erdsn-14的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:329是Erdsn-15的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:330是Erdsn-16的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:331是Erdsn-17的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:332是Erdsn-18的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:333是Erdsn-21的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:334是Erdsn-22的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:335是Erdsn-23的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:336是Erdsn-25的测得的3＇cDNA序列。
SEQ ID NO:337是Erdsn-24的测得的cDNA序列。
SEQ ID NO:338是结核分枝杆菌85b前体类似物的测得的氨基酸序列。
SEQ ID NO:339是spot1的测得的氨基酸序列。
SEQ ID NO:340是spot2的测得的氨基酸序列。
SEQ ID NO:341是spot2的测得的氨基酸序列。
SEQ ID NO:342是spot4的测得的氨基酸序列。
SEQ ID NO:343是引物PDM-157的序列。
SEQ ID NO:344是引物PDM-160的序列。
SEQ ID NO:345是融合蛋白TbF-6的DNA序列。
SEQ ID NO:346是融合蛋白TbF-6的氨基酸序列。
SEQ ID NO:347是引物PDM-176的序列。
SEQ ID NO:348是引物PDM-175的序列。
SEQ ID NO:349是融合蛋白TbF-8的DNA序列。
SEQ ID NO:350是融合蛋白TbF-8的氨基酸序列。
发明详述如上所述，本发明总地涉及诊断结核病的组合物和方法。本发明的组合物包括多肽，该多肽包含结核分枝杆菌抗原的至少一个抗原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的该抗原的变体。在本发明范围内的多肽包括，但不局限于，可溶性结核分枝杆菌抗原。“可溶性结核分枝杆菌抗原”是已知结核分枝杆菌来源的蛋白质，它存在于结核分枝杆菌培养物渗滤液中。本文所用的术语“多肽”包括具有任何长度的氨基酸链，包括全长蛋白质(即抗原)，其中氨基酸残基通过共价肽键连接。因此，包含上述抗原之一的抗原性部分的多肽可以全部由抗原性部分组成，或可含有附加的序列。附加的序列可以衍生自天然的结核分枝杆菌抗原，或可以是异源的，这些序列可能(但不必)有抗原性。
一个抗原的“抗原性部分”(可能是可溶或不可溶的)是能与结核分枝杆菌感染个体获得的血清反应的部分(即在本文描述的代表性ELISA试验中，用受感染个体的血清获得的吸收值读数比未感染个体获得的血清的吸收值高出至少3个标准差)。“结核分枝杆菌感染的个体”是感染了结核分枝杆菌的人(例如，对PPD的皮内测试反应直径至少为0.5厘米)。受感染的个体可能显示出结核病症状，或可能没有疾病症状。通常可单用或合用含有本文描述的一种或多种结核分枝杆菌抗原的至少抗原部分的多肽来检测患者的结核病。
本发明的组合物和方法还包括上述多肽以及DNA分子的变体。本文所用的多肽“变体”是仅仅在保守性置换和/或修饰中与所述多肽不同的多肽，从而保留了多肽的治疗性、抗原性和/或免疫原性性能。多肽变体宜表现出与鉴定的多肽至少约70％、更佳的约90％、最佳的约95％的相同性。对于具有免疫反应性性能的多肽，可通过修饰上述多肽之一的氨基酸序列并评价修饰后的多肽的免疫反应性来鉴定这些变体。对于用来产生诊断结合试剂的多肽，可通过评价经修饰的多肽产生检测结核病存在与否的抗体的能力来鉴定变体。这些修饰的序列可用例如本文描述的典型程序来制备和测试。
本文所用的“保守性取代”是一个氨基酸被具有相似性质的另一个氨基酸取代，因而肽化学领域技术人员可以预计到该多肽的二级结构和亲水性基本不变。通常，下列氨基酸组代表了保守性变化:(1)ala,pro,gly,glu,asp,gln,asn,set,thr；(2)cys,ser,tyr,thr；(3)val,ile,leu,met,ala,phe；(4)lys,arg,his；和(5)phe,tyr,trp,his。
变体可以另外含有其它修饰，包括对多肽的抗原性、二级结构和亲水性性能影响很小的氨基酸缺失或增加。例如，多肽可以和在共同翻译时或翻译后指导蛋白质转移的蛋白质N端的信号(或前导)序列偶联。多肽还可与接头或为便于合成、纯化或鉴定多肽(例如poly-His)或与增强多肽与固相载体结合的其它序列偶联。例如，多肽可以和免疫球蛋白Fc区偶联。
核苷酸“变体”是与所述核苷酸序列不同的、有一个或多个核苷酸缺失、取代或增加的序列。这种修饰易用标准诱变技术(例如Adelman等人(DNA,2:183,1983)指出的寡核苷酸定点特异性诱变)来导入。核苷酸变体可以是天然存在的等位基因变体或非天然存在的变体。核苷酸序列变体宜表现出与所述序列的相同性至少约为70％，更佳的至少约为80％，最佳的约为90％。这些核苷酸序列变体通常会在严谨条件下与所述的核苷酸序列杂交。本文所用的“严谨条件”指在6×SSC,0.2％SDS的溶液中预洗涤；在65℃、6×SSC、0.2％SDS中杂交过夜；然后在1×SSC、0.1％SDS中65℃洗两次各30分钟，并在0.2×SSC、0.1％SDS中65℃洗涤两次各30分钟。
在一个有关的方面，公开了组合或融合多肽。“融合多肽”是一种多肽，它包含至少一个上述抗原性部分和一个或多个附加的抗原性结核分枝杆菌序列，它们通过肽键连接成一条氨基酸链。序列可以直接连接(即没有介入的氨基酸)或可通过接头序列(例如Gly-Cys-Gly)连接，而接头不会显著减少组分多肽的抗原性。
通常，结核分枝杆菌抗原以及编码这些抗原的DNA序列可以用各种不同方法的任何一种来制备。例如，可以用本领域普通技术人员已知的程序(包括阴离子交换和反相层析)从结核分枝杆菌培养渗滤液中分离出可溶性抗原。然后评价纯化抗原的所需要的性质，例如与结核分枝杆菌感染个体血清反应的能力。这些筛选可用本文描述的代表性方法来进行。然后，可用传统的Edman化学方法对抗原作部分测序。见Edman和Berg,Eur.J.Biochem.80:116-132,1967。
抗原还可用编码该抗原的DNA序列重组产生，将该序列插入表达载体内并在合适的宿主内表达。可用针对可溶性结核分枝杆菌抗原的特异性抗血清(例如家兔)筛选合适的结核分枝杆菌表达文库来分离编码可溶性抗原的DNA分子。编码可能是或不是可溶的抗原的DNA序列可通过这样的方法来鉴定用感染过结核分枝杆菌的患者血清来筛选合适的结核分枝杆菌基因组或cDNA表达文库。这些筛选的进行通常可采用本领域熟知的技术(例如Sambrook等人《分子克隆实验指南》,Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY,1989中描述的那些技术)。
编码可溶性抗原的DNA序列还可这样获得在合适的结核分枝杆菌cDNA或基因组DNA文库中，筛选能与衍生自分离的可溶性抗原的部分氨基酸序列的简并寡核苷酸杂交的DNA序列。可以设计并合成用于该筛选的简并寡核苷酸序列，筛选可以如Sambrook等人《分子克隆实验指南》,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold SpringHarbor,NY(及其中引用的文献)中描述的那样进行。也可采用聚合酶链反应(PCR)，采用本领域熟知方法的上述寡核苷酸，以从cDNA或基因组文库中分离出核酸探针。然后可以用分离的探针来进行文库筛选。
不论制备方法如何，本文描述的抗原均具有“抗原性”。更具体地说，抗原具有与结核分枝杆菌感染个体血清反应的能力。反应性例如可用本文描述的代表性ELISA试验来评价，其中用感染个体血清获得的吸收值读数比用未感染个体的血清获得的吸收值高出至少3个标准偏差方认为是阳性。
结核分枝杆菌抗原的抗原性部分可用熟知的技术(例如在Paul《基础免疫学》第3版，Raven出版社，1993,243-247及其引用的参考文献中归纳的那些技术)来制备和鉴定。这些技术包括筛选天然抗原多肽部分的抗原特性。本文描述的代表性ELISA通常可用于这些筛选。多肽的抗原性部分是在这些代表性试验中产生的信号与全长抗原所产生的信号基本上相似的部分。换句话说，结核分枝杆菌抗原的抗原性部分在本文描述的ELISA模型中产生的信号是全长抗原所诱导的信号的至少大约20％，较佳的大约100％。
结核分枝杆菌抗原的部分和其它变体可用合成或重组方法产生。可以用本领域熟知的技术来产生少于约100个氨基酸、通常少于约50个氨基酸的合成多肽。例如，这些多肽可以用任何市售的固相技术来合成，这些技术例如是Merrifield固相合成方法，其中向生长的氨基酸链依次增加氨基酸。见Merrifield,J.Am.Chem.Soc.85:2149-2146,1963。自动化合成多肽的装置购自供应商如Applied BioSystems,Inc.,Foster City,CA，并可根据生产商说明书来操作。天然抗原的变体通常可用标准的诱变技术(如寡核苷酸定点特异性诱变)来制备。还可用标准技术除去DNA序列的部分，以制备截短的多肽。
含有天然抗原的一部分和/或变体的重组多肽易用本领域普通技术人员熟知的各种技术从编码该多肽的DNA序列制得。例如，可以首先用市售的滤膜来浓缩将重组蛋白分泌入培养基的合适的宿主/载体系统的上清液。浓缩后，可将浓缩液上样于合适的纯化基质如亲和基质或离子交换树脂上。最后，可以采用一步或多步反向HPLC步骤来进一步纯化重组蛋白。
本领域普通技术人员已知的各种表达载体的任何一种可用来如本文所述的那样表达重组多肽。表达可在已经转化或转染了含有编码重组多肽之DNA分子的表达载体的任何合适的宿主细胞中进行。合适的宿主细胞包括原核生物、酵母和较高等真核细胞。较佳的，所用的宿主细胞是大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞系，如COS或CHO。以这种方式表达的DNA序列可编码天然存在的抗原、天然存在的抗原的一部分或它们的其它变体。
通常，不论制备方法如何，本文公开的多肽以基本纯的形式制得。较佳的，多肽至少为大约80％纯，更佳的至少大约90％纯，最佳的至少大约99％纯。然而，为了用于本文描述的方法，这些基本上纯的多肽可以组合。
在某些具体的实施方案中，本发明公开了多肽，该多肽含有可溶性结核分枝杆菌抗原(或该抗原的变体)的至少一个抗原性部分，其中抗原具有下列N-端序列中的一个
(a)Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu(SEQ ID NO:115)；(b)Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser(SEQ ID NO:116)；(c)Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg(SEQ ID NO:117)；(d)Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro(SEQ ID NO:118)；(e)Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val(SEQ ID NO:119)；(f)Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro(SEQ IDNO:120)；(g)Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO:121)；(h)Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly(SEQ ID NO:122)；(i)Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Gln-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn(SEQ ID NO:123)；(j)Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser,(SEQ ID NO:129)(k)Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp；(SEQ ID NO:130)或(l)Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID NO:131)其中Xaa可以是任何氨基酸，较佳的是半胱氨酸残基。SEQ ID NO:52中提供了编码上述(g)确定的抗原的DNA序列，它的推导的氨基酸序列提供在SEQ ID NO:53中。编码上述(a)中确定的抗原的DNA序列提供在SEQ ID NO:96中；其推导的氨基酸序列提供在SEQID NO:97中。对应于上述(d)抗原的DNA序列提供在SEQ ID NO:24中，对应于抗原(c)的DNA序列提供在SEQ ID NO:25中，对应于抗原(Ⅰ)的DNA序列公开在SEQ ID NO:94中，其推导的氨基酸序列提供在SEQ ID NO:95中。
在另一个具体的实施方案中，本发明公开了多肽，它包含具有下列N-端序列之一的结核分枝杆菌抗原的至少一个免疫原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰方面不同的它的变体
(m)Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Prp-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID NO:132)或(n)Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe；(SEQ ID NO:124)其中Xaa可以是任何氨基酸，较佳的是半胱氨酸残基。编码上述(n)抗原的DNA序列提供在SEQ ID NO:235中，其对应的预计的全长氨基酸序列提供在SEQ ID NO:236中。
在其它具体的实施方案中，本发明公开的多肽包含了可溶性结核分枝杆菌抗原(或该抗原的变体)的至少一个抗原性部分，它包含的一个或多个氨基酸序列由(a)SEQID NO:1、2、4-10、13-25、52、94和96的DNA序列、(b)这些DNA序列的互补序列、或(c)与(a)或(b)中序列基本上同源的DNA序列来编码。
在另一个具体的实施方案中，本发明公开的多肽包含结核分枝杆菌抗原(或该抗原的变体)的至少一个抗原性部分，它可以是可溶的或不可溶的，它包含的一个或多个氨基酸序列由(a)SEQ ID NO:26-51、133、134、158-178、184-188、194-196、198、210-220、232、234、235、237-242、248-251、256-271、287、288、290-293和298-337的DNA序列、(b)这些DNA序列的互补序列或(c)与(a)或(b)中的序列基本上同源的DNA序列来编码。
在一个有关的方面，本发明提供了融合蛋白，它包含第一种和第二种本发明多肽，或者，包含本发明的一个多肽以及一种已知的结核分枝杆菌抗原，如Andersen和Hansen,Infect.Immun.57:2481-2488,1989中描述的38kD抗原(Genbank登录号No.M30046)或ESAT-6(SEQ ID NO:98和99)，本发明还提供了这些融合蛋白的变体。本发明的融合蛋白还可以包括在第一和第二多肽之间的接头肽。
编码本发明的融合蛋白的DNA序列可用已知的重组DNA技术来构建，将编码第一和第二多肽的分开的DNA序列装配到合适的表达载体中。编码第一多肽的DNA序列的3＇端可通过或不通过接头肽与编码第二多肽的DNA序列的5＇端连接，从而使序列的读框同相，使两个DNA序列的mRNA翻译成一个融合蛋白，它保留了第一和第二多肽生物学活性。
可用肽接头序列来使第一和第二多肽分开足够的距离，以确保每个多肽折叠成其二级和三级结构。这样的肽接头序列可用本领域熟知的标准技术插入融合蛋白内。合适的肽接头序列可根据下列因素来选择(1)它们适应灵活伸展构型的能力；(2)它们不能采用与第一和第二多肽上的功能性表位相互作用的二级结构；以及(3)缺少可能会与多肽功能性表位反应的疏水性或带电残基。较佳的肽接头序列含有Gly,Asn和Ser残基。接头序列中也可采用其它接近中性的氨基酸，如Thr和Ala。可用作接头的氨基酸序列包括在Maratea等人Gene 40:39-46,1985；Murphy等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83:8258-8562,1986；美国专利No.4,935,233和美国专利No.4,751,180中描述的那些。接头序列的长度可以从1到50个氨基酸。当第一和第二多肽具有可用来隔开功能性结构域并防止空间位阻的非必需的N-端氨基酸区域时，不需要肽接头序列。
另一方面，本发明提供了用上述多肽诊断结核病的方法。在该方面，提供了单用或合用上述一种或多种多肽来检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法。在采用多个多肽的实施方案中，可以包括除本文具体描述的那些多肽以外的多肽，例如Andersen和Hansen,Infect.Immun.57:2481-2488,1989中描述的38kD抗原。如本文所用的，“生物样品”是从患者获得的任何含抗体的样品。较佳的，样品是全血、痰液、血清、血浆、唾液、脑脊液和尿液。更佳的，样品是从患者或血液供应商处得到的血液、血清或血浆样品。将多肽用于如下所述的试验中，以确定样品中是否存在针对这些多肽的抗体(相对于预定的截断值(cut-off))。这些抗体的存在表明先前已受分枝杆菌抗原致敏，这可能是结核病的指针。
在采用多个多肽的实施方案中，所用的多肽宜是互相补充的(即，一个多肽组分检测样品中的感染，而感染不被另一多肽组分检测到)。互相补充的多肽通常可通过单独用每种多肽评价已知感染了结核分枝杆菌的一系列患者的血清样品来确定。在确定了用每种多肽使那些样品测试呈阳性(如下所述)后，可以配制两种或多种多肽的组合，该组合能检测大多数或所有测试样品中的感染。这些多肽是互相补充的。例如，约25-30％的结核病感染个体的血清对任何单个蛋白(如上述的38kD抗原)的抗体呈阴性。因此，可以将互相补充的多肽与38kD抗原组合使用，以改进诊断试验的灵敏度。
本领域普通技术人员己知有各种试验采用一种或多种多肽来检测样品中的抗体。例如参见，Harlow和Lane《抗体实验手册》，Cold Spring Harbor Laboratory,1988，该书纳入本文作参考。在一个较佳的实施方案中，试验涉及采用固定在固相载体上的多肽来结合并取出样品中的抗体。然后可用含有报道基团的检测剂检测该结合的抗体。合适的检测剂包括与抗体/多肽复合物以及标记了报道基团的游离多肽(例如在半竞争性试验中)结合的抗体。或者，可以采用竞争性试验，其中结合多肽的抗体标记有报道基团，在与样品中的抗原培育后和固定的抗原结合。样品组分抑制标记抗体与多肽结合的程度表明了样品与固定多肽的反应性。
固相载体可以是本领域普通技术人员己知的能连接抗原的固体材料。例如，固相载体可以是微量滴定板中的测试孔或硝酸纤维素膜或其它合适的膜。另外，载体可以是珠粒或圆片，如玻璃、玻璃纤维、乳胶或塑料材料如聚苯乙烯或聚氯乙烯。载体还可以是磁性颗粒或光纤传感器，例如在美国专利No.5,359,681中公开的那些。
多肽可用本领域普通技术人员已知的各种技术与固相载体结合，这些技术在专利和科学文献中详细的描述。在本发明的内容中，术语“结合(的)”既指非共价缔合，如吸附，也指共价连接(抗原和载体上的官能团之间可以直接连接或可通过交联剂连接)。通过吸附到微量滴定板中孔内或膜上的结合是较佳的。在这样的情况下，吸附可这样进行使合适缓冲液中的多肽与固相载体接触适当长的时间。接触时间随温度而异，但通常在大约1小时和1天之间。通常，塑料微量滴定板(如聚苯乙烯或聚氯乙烯)的孔与大约10纳克至1微克(较佳的约100ng)的多肽接触就足以结合足量的抗原。
多肽与固相载体的共价连接通常这样实现首先使载体与能和载体以及多肽上的官能团(如羟基或氨基)反应的双功能试剂反应。例如，利用苯醌，或通过载体上的醛基团与多肽上的胺以及活性氢缩合，多肽可以与具有合适聚合物涂层的载体结合(例如参见，Pierce Immunotechnology Catalog and Handkbook,1991,A12-A13)。
在某些实施方案中，试验是酶联免疫吸附试验(ELISA)。该试验可这样进行首先使已经固定在固相载体(通常是微量滴定板的孔)上的多肽抗原与样品接触，从而使样品中针对多肽的抗体与固定的多肽结合。然后，从固定的多肽中除去未结合的样品，加入能结合固定的抗体-多肽复合物的检测剂。然后，用适合特定检测剂的方法测定保持与固相载体结合的检测剂的量。
更具体地说，如上所述一旦多肽固定在载体上，通常要封闭载体上其余的蛋白质结合部位。本领域普通技术人员已知的任何合适的封闭剂，如牛血清白蛋白或吐温20TM(Sigma Chemical Co.,St.Louis,MO)均可采用。然后，使固定的多肽与样品培育，使抗体与抗原结合。在培育前，样品可用合适的稀释剂(如磷酸盐缓冲液)稀释。通常，合适的接触时间(即培育时间)是足以检测感染了结核分枝杆菌的样品中存在抗体的时间。较佳的，接触时间足以达到结合与未结合的抗体之间达到平衡的至少95％的结合水平。本领域普通技术人员会认识到，达到平衡所需的时间易通过测定一段时间内产生的结合水平来确定。在室温下，大约30分钟的培育时间就足够了。
然后用合适的缓冲液(如含有0.1％吐温20TM的PBS)洗涤固相载体，除去未结合的样品。然后，可将检测剂加到固相载体上。合适的检测剂是能结合固定的抗体-多肽复合物并能用本领域技术人员已知的各种方法检测的化合物。较佳的，检测剂含有与报道基团偶联的结合剂(例如蛋白质A、蛋白质G、免疫球蛋白、凝集素或游离的抗原)。较佳的报道基团包括酶(如辣根过氧化物酶)、底物、辅因子、抑制剂、染料、放射性核素、发光基团、荧光基团、生物素和胶体颗粒，如胶体金和硒。结合剂和报道基团的偶联可用本领域普通技术人员已知的标准方法来实现。偶联了各种报道基团的常见结合剂还可购自许多商业来源(例如Zymed Laboratories,SanFrancisco,CA和Pierce,Rockford,IL)。
然后使检测剂和固定的抗体-多肽复合物培育足够长的时间，以检测结合的抗体。合适的时间通常可根据生产商说明书来确定，或通过在一段时间内测定结合水平来确定。然后除去未结合的检测剂，用报道基团检测结合的检测剂。用来检测报道基团的方法取决于报道基团的性质。对于放射活性基团而言，闪烁计数或放射自显影方法通常是合适的。光谱方法可用来检测染料、发光基团和荧光基团。生物素可用偶联了不同报道基团(通常是放射活性基团或荧光基团或酶)的亲和素来检测。酶-报道基团通常可通过加入底物来检测(通常进行特定的时间)，然后用光谱法或其它方法分析反应产物。
为了测定样品中是否存在抗结核分枝杆菌抗体，通常将保持结合于固相载体的报道基团检测到的信号与对应于预定截断值的信号比较。在一个较佳的实施方案中，截断值是固定抗原与未感染患者的样品培育后所得的平均信号。通常，认为产生信号比预定截断值高3个标准偏差的样品为结核病阳性。在另一个较佳的实施方案中，根据Sackett等人《临床流行病学临床医学基础科学》Little Brown and Co.,1985,106-107页中的方法，用接受者-操作者曲线(Receiver Operator Curve)确定截断值(cut-off)。简言之，在该实施方案中，截断值可从对应于诊断测试结果每个可能的截断值的数对真阳性率(即敏感性)和假阳性率(100％特异性)的曲线来确定。曲线上最接近左上角的截断值(即围住最大面积的数值)是最准确的截断值，经该方法测得产生信号高于截断值的样品可认为是阳性。或者，截断值可以沿曲线向左侧移动，以最大程度地减小假阳性率，或向右侧移动，以最大程度地减小假阴性率。通常，经该方法测得产生信号高于截断值的样品认为是结核病阳性。
在有关的实施方案中，试验以快速流穿或试条形式进行，其中抗原被固定在膜(如硝酸纤维素膜)上。在流穿试验中，当样品通过膜时，样品内的抗体与固定的多肽结合。然后，当含有检测剂的溶液流动通过膜时，检测剂(例如蛋白质A-胶体金)与抗体-多肽复合物结合。然后如上所述检测结合的检测剂。在试条形式中，将结合了多肽的膜的一端浸在含有样品的溶液内。样品沿膜迁移通过含有检测剂的区域，并迁移至固定多肽的区域。检测剂在多肽处浓集表明样品中存在抗结核分枝杆菌抗体。通常检测剂在该部位的浓缩产生了一种可用肉眼观察的图案(如线条)。不存在该图案则表示阴性结果。通常，当生物样品含有的抗体水平足以在上述ELISA中产生阳性信号时，选择固定在膜上的多肽的量，以产生肉眼可区分的图案。较佳的，固定在膜上的多肽量范围为25ng至约1微克，更佳的约50ng至500ng。这些测试通常可用非常少量(如一滴)的患者血清或血液来进行。
当然，还有其它许多试验方案也适合与本发明的多肽一起使用。上述描述只是列举性的。
另一方面，本发明提供了针对本发明多肽的抗体。抗体可用本领域普通技术人员已知的各种技术制备，例如参见Harlow和Lane《抗体实验手册》,Cold SpringHarbor Laboratory,1988。在一种这样的技术中，最初将包含抗原性多肽的免疫原注入各种哺乳动物(如小鼠、大鼠、家兔、绵羊和山羊)。在该步骤中，本发明的多肽可不经修饰作为免疫原。另外，特别是对于较小的多肽，如果将该多肽与载体蛋白(如牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白)连接，则可能会引发超级免疫应答。将免疫原注入动物宿主，较佳的是根据预定的方案插入一次或多次强化免疫，然后定期对动物取血。然后可以通过例如亲和层析用偶联于合适的固相载体的多肽，将对多肽有特异性的多克隆抗体从这些抗血清中纯化出来。
对感兴趣的抗原性多肽的特异性单克隆抗体可以用Kohler和Milestein,Eur.J.Immunol.6:511-519,1976的技术及其改进方法制得。简言之，这些方法涉及制备能产生具有所需特异性(即与感兴趣多肽的反应性)的抗体的无限增殖细胞系。这些细胞系可以从如上所述免疫的动物的脾细胞产生。然后使脾细胞无限增殖，例如通过与骨髓瘤细胞融合伴侣(较佳的是与受免疫动物同系)融合。可以采用各种融合技术。例如，可以用非离子洗涤剂使脾细胞和骨髓瘤细胞结合数分钟，然后低密度接种在支持杂交细胞生长但不支持骨髓瘤细胞生长的选择培养基上。较佳的选择技术采用HAT(次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷)选择。足够长的时间(通常约1-2周)后，观察杂交菌落。选出单菌落，测试其对多肽的结合活性。优选出具有高反应性和特异性的杂交瘤。
单克隆抗体可以从生长的杂交瘤集落的上清液分离得到。另外，可以采用各种技术来提高产量，例如将杂交瘤细胞系注射入合适脊椎动物宿主(如小鼠)的腹膜腔内。然后可以从腹水或血液中收获单克隆抗体。污染物可用常规技术(如层析、凝胶过滤、沉淀和抽提)从抗体中除去。本发明的多肽可用于纯化方法，例如亲和层析步骤中。
抗体可用于诊断试验，用类似于上文详细描述的试验以及本领域技术人员熟知的其它技术检测结核分枝杆菌抗原的存在，从而提供了检测患者结核分枝杆菌感染的方法。
本发明的诊断剂还包含编码上述一种或多种多肽或其一个或多个部分的DNA序列。例如，在以聚合酶链反应(PCR)为基础的试验中可以用至少两个寡核苷酸引物来扩增衍生自生物样品的结核分枝杆菌特异性cDNA，其中至少一个寡核苷酸引物对编码本发明多肽的DNA分子有特异性。然后，用本领域熟知的技术(如凝胶电泳)检测所扩增cDNA的存在。类似地，对编码本发明多肽的DNA分子有特异性的寡核苷酸探针可用于杂交试验，以检测生物样品中本发明多肽的存在。
本文所用的术语“对DNA分子有特异性的寡核苷酸/探针”指寡核苷酸序列与所涉及的DNA分子有至少约80％的相同性，较佳的有至少约90％的相同性，更佳的有至少约95％的相同性。可用于本发明诊断方法的寡核苷酸引物和/或探针宜具有至少大约10-40个核苷酸。在一个较佳的实施方案中，寡核苷酸引物包含编码本文公开的多肽之一的DNA分子的至少约10个连续的核苷酸。较佳的，用于本发明诊断方法的寡核苷酸探针包含可编码本文公开的多肽之一的DNA分子的至少大约15个毗连的寡核苷酸。PCR为基础的试验以及杂交试验的技术均是本领域所熟知的(例如参见，Mullis等人，Ibid；Ehrlich,Ibid)。因此，引物或探针可用来检测生物样品中的结核分枝杆菌特异性序列。包含上述寡核苷酸序列的DNA探针或引物可单独使用，或相互组合使用，或与以前鉴定的序列(如上述38kD抗原的序列)合用。
提供下列实施例是为了进行描述，而不是为了限制。
实施例实施例1从结核分枝杆菌培养渗滤液纯化多肽并特性分析本实施例描述了从培养渗滤液制备结核分枝杆菌可溶性多肽。除非另有描述，下列实施例中的所有百分数均为重量/体积。
将结核分枝杆菌(H37Ra,ATCC No.25177或H37Rv,ATCC No.25618)37℃培养在无菌GAS培养基中14天。然后，将培养基通过0.45μ滤膜真空过滤到无菌的2.5升瓶内(留下细胞团块)。然后将培养基通过0.2μ滤膜过滤到无菌的4升瓶内。然后在培养渗滤液中加入NaN3至浓度为0.04％。然后将瓶置于4℃冷藏室内。
对培养渗滤液进行浓缩，将滤液置于12升经高压蒸气灭菌的贮器内，将滤液加入400毫升Amicon搅拌装置内，该装置用乙醇清洗过并含有10000kDa MWCO膜。用氮气维持压力在60psi。该步骤将12升的体积减少至大约50毫升。
然后用8000kDa MWCO纤维素酯膜将培养渗滤液透析入0.1％碳酸氢铵内，更换碳酸氢铵溶液两次。然后用市售的BCA试验试剂(Pierce,Rockford,IL)测定蛋白质浓度。
然后将透析的培养渗滤液冻干，将多肽重悬于蒸馏水中。然后用0.01mM 1,3双[三(羟甲基)-甲氨基]丙烷(pH7.5)(Bis-Tris丙烷缓冲液)(这是阴离子交换层析的初始条件)对多肽透析。在经0.01mM Bis-Tris丙烷缓冲液(pH7.5)平衡的POROS 146Ⅱ Q/M阴离子交换柱(4.6mm×100mm,Perseptive Biosystems,Framingham,MA)上，用凝胶灌流(profusion)层析进行分级。用线性0-0.5M NaCl梯度将多肽洗脱到上述缓冲液系统内。在220nm波长下监测柱洗脱液。
用蒸馏水对离子交换柱洗脱下的多肽合并物透析，并冻干。将得到的物质溶于含0.1％三氟乙酸(TFA)的水(pH1.9)中，在Detla-Pak C18柱(Waters,Milford,MA，孔径300埃，粒径5微米(3.9×150mm))上纯化多肽。用0-60％稀释缓冲液(含0.1％TFA的乙腈)线性梯度将多肽洗脱下柱。流速为0.75毫升/分钟，在214nm下用HPLC监测洗脱液。收集含有洗脱多肽的组分，以最大程度地纯化各份样品。获得约200的纯化多肽。
然后筛选纯化多肽在PBMC制备物中诱导T-细胞增殖的能力。将已知PPD皮肤试验测试呈阳性且T细胞显示对PPD以及对MTB粗制可溶性蛋白起增殖反应的献血员的PBMC培养在含有RPMI 1640的培养基中，该培养基中添加了10％合并的人血清和50微克/毫升庆大霉素。以0.5至10微克/毫升的浓度加入纯化的多肽，一式两份。在96孔圆底平板中200微升的体积内培养6天后，从各孔中取出50微升培养基如下所述测定IFN-γ水平。然后在平板每孔内脉冲加入1μCi氚化的胸苷再培育18小时，收获并用气相闪烁计数器测定氚的摄入量。在两份样品中均导致增殖比培养在单用培养基中所见的细胞增殖大3倍的级分被认为呈阳性。
用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IFN-γ。在室温下用含有针对人IFN-γ的小鼠单克隆抗体(Chemicon)包被ELISA测试板4小时。然后在室温下用含有5％(W/V)脱脂奶粉的PBS封闭诸孔1小时。再用PBS/0.2％吐温-20洗板6次，使ELISA板中以培养基中作1∶2稀释的样品室温培育过夜。然后再次洗涤测试板，在每个孔内加入1∶3000稀释于PBS/10％正常山羊血清中的多克隆家兔抗-人IFN-γ血清。然后，室温培育测试板两小时，洗涤，加入以PBS/5％脱脂奶粉1∶2000稀释的辣根过氧化物酶偶联的抗家兔IgG(Jackson Labs.)。再室温培育2小时后，洗涤平板并加入TMB底物。20分钟后用1N硫酸终止反应。用570nm作为参照波长，在450nm下测定光密度。在两份样品中导致OD比培养在单用培养基中的平均OD大两倍加上3个标准差的级分被认为呈阳性。
为了进行测序，将多肽分别干燥在BiobreneTM(Perkin Elmer/Applied BiosystemsDivision,Foster City,CA)处理的玻璃纤维滤膜上。将带有多肽的滤膜载于PerkinElmer/Applied BioSystems Division Procise 492蛋白质测序仪上。用传统的Edman化学试剂从氨基端测定多肽的序列。通过比较PTH氨基酸衍生物对合适的PTH衍生物标准品的滞留时间，确定每个多肽的氨基酸序列。
采用上述程序，分离出具有下列N-端序列的抗原(a)Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Xaa-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu(SEQ ID NO:54)；(b)Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser(SEQ ID NO:55)；(c)Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg(SEQ ID NO:56)；(d)Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro(SEQ ID NO:57)；(e)Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Gln-Gln-Xaa-Ala-Val(SEQ ID NO:58)；(f)Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro(SEQ IDNO:59)；(g)Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Pro-Ala(SEQ ID NO:60)；和(h)Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly(SEQ ID NO:61)；其中Xaa可以是任何氨基酸。
除了上述程序外，用微孔HPLC纯化步骤分离其它的抗原。具体地说，在PerkinElmer/Applied Biosystems Division Model 172 HPLC中，在孔径7微米、柱体积1mm×100mm的Aquapore C18柱(Perkin Elmer/Applied Biosystems Division,Foster City,CA)上纯化含有前述层析纯化步骤得到的抗原混合物每级分20微升。用含1％微量乙腈(含0.05％TFA)线性梯度的水(0.05％TFA)以80微升/分钟的流速从柱上洗脱级分。在250nm处监测洗脱物。将原始的级分分离成4个主峰以及其它较小的组分，获得一种多肽，其显示出分子量为12.054Kd(通过质谱法)，具有下列N-端序列(i)Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Gln-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Asn-Leu-Ala-Asp-Pro-Asp-Val-Ser-Phe-Ala-Asp(SEQ ID NO:62)。
用上述试验显示出该多肽在PBMC制备物中诱导增殖和IFN-γ产生。
如下所述从结核分枝杆菌培养渗滤液中分离出其它可溶性抗原。如上所述制备结核分枝杆菌培养渗滤液。在用Bis-Tris丙烷缓冲液(pH5.5)透析后，用阴离子交换层析在经Bis-Tris丙烷缓冲液(pH5.5)平衡的Poros QE柱4.6×100mm(PerseptiveBiosystems)上进行分级。在上述缓冲液系统中用0-1.5M NaCl线性梯度以10毫升/分钟的流速洗脱多肽。在214nm下监测柱洗脱液。
合并从离子交换柱上洗脱的级分，用Poros R2柱4.6×100mm(PerseptiveBiosystems)进行反相层析。用0-100％乙腈(0.1％TFA)的线性梯度以5毫升/分钟的流速从柱上洗脱多肽。在214nm下监测洗脱液。
将含有洗脱多肽的级分冻干，重悬于80微升0.1％TFA水溶液中，在Vydac C4柱4.6×150nm(Western Analytical,Temecula,CA)上用0-100％乙腈(0.1％TFA)的线性梯度以2毫升/分钟的流速进行进一步的反相层析。在214nm下监测洗脱液。
具有生物活性的级分被分离为一个主峰和其它较小的组分。将该峰Western印迹到PVDF膜上，结果显示分子量为14Kd,20Kd和26Kd的三条主要条带。测得这些多肽分别具有下列N-端序列(j)Xaa-Asp-Ser-Glu-Lys-Ser-Ala-Thr-Ile-Lys-Val-Thr-Asp-Ala-Ser,(SEQ ID NO:129)(k)Ala-Gly-Asp-Thr-Xaa-Ile-Tyr-Ile-Val-Gly-Asn-Leu-Thr-Ala-Asp；(SEQ ID NO:130)和(1)Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gla-Ala-Gly；(SEQ ID NO:131)利用上述试验，这些多肽显示出能在PBMC制备物中诱导增殖和IFN-γ产生。图1A和B分别显示了用第一和第二献血员的PBMC制备物所做的这些试验结果。
用32p末端标记的对应于N-端序列并含有结核分枝杆菌密码子偏性的简并寡核苷酸，筛选结核分枝杆菌基因组文库，获得编码上述(a),(c),(d)和(g)的抗原的DNA序列。用对应于上述抗原(a)的探针进行的筛选鉴定出具有序列SEQ ID NO:96的克隆。SEQ ID NO:96编码的多肽提供在SEQ ID NO:97中。用对应于上述抗原(g)的探针进行的筛选鉴定出具有序列SEQ ID NO:52的克隆。SEQ ID NO:52编码的多肽提供在SEQ ID NO:53中。用对应于上述抗原(d)的探针进行的筛选鉴定出具有序列SEQ ID NO:24的克隆，用对应于抗原(c)的探针进行的筛选鉴定出具有序列SEQ IDNO:25的克隆。
用DNA STAR系统对上述氨基酸序列和基因库中已知的氨基酸序列进行比较。检索的数据库含有大约173000种蛋白质，它是Swiss,PIR数据库以及翻译的蛋白质序列(87版)的组合。没有检测到抗原(a)-(h)和(l)的氨基酸序列的明显同源物。
发现抗原(i)的氨基酸序列与麻风分枝杆菌(M.leprae)的一个序列同源。用从GENEBANK获得的序列从基因组DNA扩增全长麻风分枝杆菌序列。然后用该序列筛选结核分枝杆菌文库，获得结核分枝杆菌同系物的全长拷贝(SEQ ID NO:94)。
发现抗原(j)的氨基酸序列与一个DNA序列翻译的已知结核分枝杆菌蛋白同源。据发明者所知，该蛋白以前未显示具有T-细胞刺激活性。发现抗原(k)的氨基酸序列与麻风分枝杆菌的一个序列有关。
在上述增殖和IFN-γ试验中，用三个PPD阳性献血员，上文提供的代表性抗原的结果显示在表1中表1PBMC增殖和IFN-γ试验的结果

在表1中，产生刺激指数(SI)在2和4(与单独培养在培养基中的细胞相比)之间的反应评为+,SI为4-8或在1微克或更低浓度下SI为2-4评为++,SI大于8评为+++。发现序列(i)的抗原在增殖和IFN-γ试验中对于一个献血员有高的SI(+++)，对于其它两个献血员有较低的SI(++和+)。这些结果表明这些抗原能诱导增殖和/或干扰素-γ产生。
实施例2用患者血清来分离结核分枝杆菌抗原本实施例描述了用结核分枝杆菌感染的个体的血清筛选来从结核分枝杆菌裂解液中分离抗原。
将干燥的结核分枝杆菌H37Ra(Difco Laboratories)加入到2％NP40溶液中，交替匀浆并超声处理3次。使所得悬浮液在微量离心管中13000rpm离心，使上清液通过0.2微米针筒式滤器。使滤液与Macro Prep DEAE珠粒(BioRad,Hercules,CA)结合。用20毫摩尔Tris pH7.5彻底洗涤珠粒，用1M NaCl洗脱结合的蛋白质。用10毫摩尔Tris,pH7.5透析NaCl洗脱液过夜。用0.05毫克/毫升DNA酶和RNA酶室温下处理透析溶液30分钟，然后用0.5U/毫克α-D-甘露糖苷酶在pH4.5下室温处理3-4小时。在回复至pH7.5后，通过FPLC在Bio Scale-Q-20柱(BioRad)上对材料分级。将级分合并成9份合并物，在Centriprep 10(Amicon,Beverley,MA)中浓缩，用感染结核分枝杆菌患者的与本发明其它抗原没有免疫反应的合并血清作Western印迹筛选血清学活性。
使最具反应性的级分进行SDS-PAGE，并转移至PVDF。切下约85Kd的条带，产生下列序列(m)Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID NO:132)，其中Xaa可以是任何氨基酸。
将该序列与上述基因库中的那些序列比较，结果显示与已知序列没有明显同源性。
用对应于SEQ ID NO:137N-端序列的标记的简并寡核苷酸筛选基因组结核分枝杆菌Erdman菌株文库，获得编码上述(m)抗原的DNA序列。鉴定出具有DNA序列SEQ ID NO:198的一个克隆。发现该序列编码SEQ ID NO:199的氨基酸序列。将这些序列与基因库中的那些序列比较，结果发现与以前在结核分枝杆菌以及牛分枝杆菌中鉴定的序列有一些相似。
实施例3编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列的制备本实施例描述了用感染了结核分枝杆菌的患者获得的血清或针对结核分枝杆菌抗原产生的抗血清筛选结核分枝杆菌表达文库，制备编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列。
A．用针对结核分枝杆菌上清液的家兔抗血清制备结核分枝杆菌可溶性抗原从结核分枝杆菌菌株H37Ra分离基因组DNA。随机切割该DNA，并用于以λZAP表达系统(Stratagene,La Jolla,CA)构建表达文库。用结核分枝杆菌培养物的浓缩上清液免疫家兔，产生针对结核分枝杆菌菌株H37Ra,H37Rv和Erdman的分泌性蛋白的家兔抗血清。具体地说，首先用总体积为2毫升(含有100微克胞壁酰二肽(Calbiochem,La Jolla,CA)和1毫升不完全Freund佐剂)的200微克蛋白抗原皮下免疫家兔。4周后，用含100微克抗原的不完全Freund佐剂对家兔作皮下强化免疫。最后，4周后用50微克蛋白抗原对家兔作静脉内免疫。如Sambrook等人《分子克隆实验指南》，Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY,1989中描述的那样，用抗血清筛选表达文库。纯化表达免疫反应性抗原的噬菌体噬斑。挽救噬斑的噬菌粒，推导出结核分枝杆菌克隆的核苷酸序列。
纯化得到32个克隆。其中有25个代表的序列以前未曾在结核分枝杆菌中得到鉴定。如Skeiky等人，J.Exp.Med.181:1527-1537,1995中描述的那样，用IPTG诱导蛋白质，并通过凝胶洗脱纯化。在该筛选中鉴定的DNA分子的代表性部分序列提供在SEQ ID NO:1-25中。对应的预计氨基酸序列显示在SEQ ID NO:64-88中。
在用上述数据库比较这些序列与基因库中已知序列后，发现后文称为TbRA2A,TbRA16,TbRA18和TbRA29的克隆(SEQ ID NO:77,69,71,76)显示出与以前鉴定的麻风分枝杆菌(但不是结核分枝杆菌)中的序列有一些同源性。发现TbRA2A是一种脂蛋白，有一个6残基脂化序列与一疏水性分泌性序列毗邻。TbRA11,TbRA26,TbRA28和TbDPEP(SEQ ID NO:66,74,75,55)在结核分枝杆菌中已有鉴定。发现与TbRA1,TbRA3,TbRA4,TbRA9,TbRA10,TbRA13,TbRA17,TbRA19,TbRA29,TbRA32,TbRA36以及重叠的克隆TbRA35和TbRA12(分别为SEQ ID NO:64,78,82,65,68,76,72,76,79,81,80,67)没有明显的同源性。克隆TbRa24与克隆TbRa29重叠。
B．用肺结核以及胸膜结核病患者的血清鉴定编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列用活动性结核病患者的合并血清筛选上述基因组DNA文库以及附加的H37Rv文库。为了制备H37Rv文库，分离结核分枝杆菌菌株H37Rv基因组DNA，进行部分Sau3A消化，用于以λZAP表达盒(Stratagene,La Lolla,Ca)构建表达文库。在表达筛选中，采用三种不同的合并血清，每种所含血清获自三位患有活动性肺结核或胸膜结核病的个体。合并血清命名为TbL,TbM和TbH，指在ELISA和免疫印迹中与H37Ra裂解液的相对反应性(即，TbL=低反应性，TbM=中等反应性，TbH=高反应性)。另外还采用了来自7位活动性肺结核患者的第四份合并血清。所有血清与重组38kD结核分枝杆菌H37Ra磷酸结合蛋白的反应性均不增加。
如Sambrook等人《分子克隆实验指南》,Cold Spring Harbor Laboratory,ColdSpring Harbor,NY,1989中所述的那样，用大肠杆菌裂解液预先吸附所有合并血清，并用来筛选H37Ra和H37Rv表达文库。纯化得到表达免疫反应性抗原的噬菌体噬斑。挽救噬斑的噬菌粒，推导出结核分枝杆菌克隆的核苷酸序列。
纯化获得了32个克隆。其中31个克隆显示出的序列以前未曾在人结核分枝杆菌中鉴定过。鉴定出的DNA分子的代表性序列提供在SEQ ID NO:26-51以及100中。其中，TbH-8-2(SEQ ID NO:100)是TbH-8的部分克隆，TbH-4(SEQ ID NO:43)和TbH-4-FWD(SEQ ID NO:44)是来自同一克隆的不连续的序列。后文鉴定为Tb38-1,TbH-4,TbH-8,TbH-9和TbH-12的抗原的氨基酸序列显示在SEQ ID NO:89-93中。用上述鉴定的数据库比较这些序列与基因库中已知的序列，结果显示与TbH-4,TbH-8,TbH-9和TbM-3没有明显的同源性，虽然发现与TbH-9有弱的同源性。发现TbH-12与以前在副结核分枝杆菌(M.paratuberculosis)(登录号S28515)中鉴定的34kD抗原性蛋白同源。发现Tb38-1位于以前在牛分枝杆菌(登录号U34848)和结核分枝杆菌(Sorensen等人，Infec.Immun.63:1710-1717,1995)中鉴定的抗原ESAT-6开放读框上游34碱基对处。
用衍生自Tb38-1和TbH-9(均从H37Ra文库分离出)的探针鉴定H37Ra文库中的克隆。Tb38-1与Tb38-1F2,Tb38-1F3,Tb38-1F5以及Tb38-1F6(SEQ ID NO:107,108,111,113以及114)杂交。(SEQ ID NO:107和108是克隆Tb38-1F2的不连续的序列。)推导出Tb38-1F2中的两个开放读框；一个对应于Tb37FL(SEQ ID NO:109)，第二个部分序列可能与Tb38-1同源，称为Tb38-1N(SEQ ID NO:110)。Tb38-1F3的推导氨基酸序列显示在SEQ ID NO:112中。TbH-9探针在H37Rv文库中鉴定出三个克隆TbH-9-FL(SEQ ID NO:101)，它可能与TbH-9(R37Ra)同源，TbH-9-1(SEQ ID NO:103)，以及TbH-8-2(SEQ ID NO:105)是TbH-8的部分克隆。这三个克隆的推导氨基酸序列显示在SEQ ID NO:102、104和106中。
如上所述，进一步筛选结核分枝杆菌基因组DNA文库，导致发现另10个反应性克隆，代表了7种不同的基因。这些基因中的一个经鉴定是上文讨论的38Kd抗原，一个经确定与以前表明存在于结核分枝杆菌中的14Kdα晶体蛋白热休克蛋白相同，第三个经确定与上述抗原TbH-8相同。其余5个克隆(后文称TbH-29,TbH-30,TbH-32和TbH-33)的确定的DNA序列分别提供在SEQ ID NO:133-136中，其对应的预计的氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:137-140中。将这些抗原的DNA和氨基酸序列与上述基因库中的那些序列比较。发现与TbH-29的5＇端(它含有反应性开放读框)没有同源性，但是发现TbH-29的3＇端与结核分枝杆菌粘粒Y227相同。发现TbH-32和TbH-33分别与以前鉴定的结核分枝杆菌插入元件IS6110以及结核分枝杆菌粘粒Y50相同。发现与TbH-30没有明显的同源性。
如Sambrook等人(同上)所述的那样，用来自该附加筛选的阳性噬菌粒感染大肠杆菌XL-1 Blue MRF＇。通过加入IPTG，实现了重组蛋白的诱导。使诱导的和未经诱导的裂解液进行SDS-PAGE，一式两份，并转移到硝酸纤维素膜上。使滤膜与能与TbH反应的人结核分枝杆菌血清(1∶200稀释度)以及能与lacZ的N端4Kd部分反应的家兔血清(1∶200或1∶250稀释度)反应。室温培育血清2小时。加入125Ⅰ标记的蛋白质A，随后使膜曝光16小时至11天的不同时间，检测结合的抗体。免疫印迹的结果总结在表2中。
表2抗原 人结核分枝杆菌血清 抗-lacZ血清TbH-29 45Kd 45KdTbH-30 没有反应性 29KdTbH-32 12Kd 12KdTbH-33 16Kd 16Kd重组人结核分枝杆菌抗原与人结核分枝杆菌血清以及抗lacZ血清的阳性反应表明，人结核分枝杆菌血清的反应性针对融合蛋白。对抗lacZ血清有反应性但对人结核分枝杆菌血清没有反应性的抗原，可能是人结核分枝杆菌血清识别构型性表位的结果，或抗原-抗体结合动力学可能这样的情况，即免疫印迹中2小时的血清接触不够充分。
进行了研究以确定抗原TbH-9和Tb38-1是否代表细胞蛋白还是分泌到结核分枝杆菌培养基内。在第一个研究中，用基本上如实施例3A所述的程序，产生的家兔血清针对下列蛋白(A)结核分枝杆菌的分泌性蛋白，(B)已知的分泌性重组结核分枝杆菌抗原85b，(C)重组Tb38-1和(D)重组TbH-9。在变性凝胶上分辨了结核分枝杆菌总裂解液、结核分枝杆菌培养物浓缩上清液以及重组抗原85b,TbH-9和Tb38-1，固定在硝酸纤维素膜上，用上述家兔血清探测一式两份的印迹。
图2A-D中分别显示了用对照血清(面板Ⅰ)、针对分泌性蛋白、重组85b、重组Tb38-1以及重组TbH-9的抗血清(面板Ⅱ)的该分析结果，其中泳道编号如下1)分子量蛋白标准品；2)5微克结核分枝杆菌裂解液；3)5微克分泌性蛋白；4)50ng重组Tb38-1；5)50ng重组TbH-9和6)50ng重组85b。重组抗原经基因工程加上了6个末端组氨酸残基，因此预计迁移时的移动比天然蛋白约大1kD。在图2D中，重组TbH-9缺少全长42kD抗原的大约10kD，因此裂解液泳道中免疫反应性天然TbH-9抗原的大小明显不同(用箭头表示)。这些结果证明Tb38-1和TbH-9是胞内抗原，并非由结核分枝杆菌主动分泌的。
通过测定TbH-9-特异性人T细胞克隆与重组TbH-9、分泌性结核分枝杆菌蛋白和PPD的反应性，确证了TbH-9是胞内抗原的发现。从健康PPD阳性献血员的PBMC了产生TbH-9-特异性T细胞克隆(命名为131TbH-9)。通过如实施例1所述的那样测定氚化胸苷的摄入，确定了131TbH-9对分泌性蛋白、重组TbH-9以及对照结核分枝杆菌抗原TbRa11的增殖反应。如图3A所示，克隆131TbH-9对TbH-9有特异性反应，说明TbH-9并非结核分枝杆菌分泌性蛋白的重要组分。图3B显示了从健康PPD阳性献血员的PBMC制得的第二种TbH-9特异性T细胞克隆(称为PPD 800-10)在用分泌性蛋白、PPD或重组TbH-9刺激T细胞克隆后的IFN-γ产生情况。这些结果进一步确证TbH-9不是结核分枝杆菌分泌的。
C．用肺外结核病患者的血清鉴定编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列从结核分枝杆菌Erdman菌株分离出基因组DNA，随机剪切并用于以λZAP表达系统(Stratagene,La Jolla,CA)来构建表达文库。如实施例3B所述的那样，所得文库用肺外结核病个体的合并血清来筛选，第二抗体是偶联了碱性磷酸酶的山羊抗人IgG+A+M(H+L)。
纯化获得18个克隆。发现其中4个克隆(后称XP14、XP24、XP31和XP32)与己知的序列有一些相同性。测得的XP14、XP24和XP31的DNA序列分别提供在SEQID NO:151-153中,XP32的5＇和3＇DNA序列分别在SEQ ID NO:154和155中。XP14的预计氨基酸序列提供在SEQ ID NO:156中。发现XP14的反向互补序列编码了SEQID NO:157中的氨基酸序列。
将其余14个克隆(后称XP1-XP6,XP17-19,XP22,XP25,XP27,XP30和XP36)的序列与上述基因库中的那些序列比较，结果表明，除了发现XP2和XP6的3＇端与已知的结核分枝杆菌粘粒有一些同源性以外，没有同源性。XP27以及XP36的DNA序列分别显示在SEQ ID NO:158和159中,XP4,XP5,XP17和XP30的5＇序列分别显示在SEQ ID NO:160-163中,XP2、XP3、XP6、XP18、XP19、XP22和XP25的5＇和3＇序列分别显示在SEQ ID NO:164和165；166和167；168和169；170和171；172和173；174和175；176和177中。发现XP1与上述TbH4的DNA序列重叠。TbH4-XP1的全长DNA序列提供在SEQ ID NO:178中。发现该DNA序列含有的开放读框编码了SEQ ID NO:179所示的氨基酸序列。发现TbH4-XP1的反向互补序列含有的开放读框编码SEQ ID NO:180的氨基酸序列。发现XP36的DNA序列含有的两个开放读框编码了SEQ ID NO:181和182所示的氨基酸序列，反向互补序列含有的开放读框编码了SEQ ID NO:183所示的氨基酸序列。
如上实施例3B所述的那样，制备重组XP1蛋白，用金属离子亲和层析柱来纯化。发现重组XP1在分离自结核分枝杆菌-免疫献血员的T细胞中刺激细胞增殖和IFN-γ产生。
D．用结核病患者的裂解液阳性合并血清鉴定编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列如下文实施例6所述，从结核分枝杆菌Erdman菌株分离得到基因组DNA，随机剪切，并用于以λ筛选表达系统(Novagen,Madison,WI)来构建表达文库。如实施例3B所述，用从结核分枝杆菌感染患者获得的且显示与结核分枝杆菌裂解液反应(但不与以前表达的蛋白质38kD、Tb38-1、TbRa3、TbH4、DPEP和TbRa11反应)的合并血清来筛选表达文库，第二抗体是偶联碱性磷酸酶的山羊抗人IgG+A+M(H+L)。
纯化得到27个克隆。比较这些克隆测得的cDNA序列，结果表明与10个克隆(后称LSER-10、LSER-11、LSER-12、LSER-13、LSER-16、LSER-18、LSER-23、LSER-24、LSER-25和LSER-27)没有显著同源性。测得的LSER-10、LSER-11、LSER-12、LSER-13、LSER-16和LSER-25的5＇cDNA序列分别提供在SEQ ID NO:237-242中，对应于LSER-10、LSER-12、LSER-13、LSER-16和LSER-25的预计氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:243-247中。测得的LSER-18、LSER-23、LSER-24和LSER-27的全长cDNA序列分别显示在SEQ ID NO:248-251中，其对应的预计氨基酸序列提供在SEQ ID NO:252-255中。发现其余17个克隆与以前在结核分枝杆菌中鉴定的未知序列相似。这些克隆中16个克隆(后称LSER-1、LSER-3、LSER-4、LSER-5、LSER-6、LSER-8、LSER-14、LSER-15、LSER-17、LSER-19、LSER-20、LSER-22、LSER-26、LSER-28、LSER-29和LSER-30)的测得的5＇cDNA序列分别提供在SEQ IDNO:256-271中，对应于LSER-1、LSER-3、LSER-5、LSER-6、LSER-8、LSER-14、LSER-15、LSER-17、LSER-19、LSER-20、LSER-22、LSER-26、LSER-28、LSER-29和LSER-30的预计氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:272-286中。SEQ ID NO:287中提供了克隆LSER-9测得的全长cDNA序列。发现LSER-6的反向互补序列(SEQ IDNO:288)编码了SEQ ID NO:289的预计氨基酸序列。
E．用针对结核分枝杆菌分级蛋白产生的家兔抗血清制备结核分枝杆菌可溶性抗原如实施例2所述制备结核分枝杆菌裂解液。所得物质用HPLC分级，用结核分枝杆菌感染患者的显示出与本发明其它抗原没有或有很少免疫反应性的合并血清通过Western印迹筛选级分的血清学活性。用实施例3A所述的方法针对最具反应性的级分产生家兔抗血清。用该抗血清来筛选如上所述制备的结核分枝杆菌Erdman菌株基因组DNA表达文库。纯化表达免疫反应性抗原的噬菌体噬斑。挽救噬斑的噬菌粒，测定结核分枝杆菌克隆的核苷酸序列。
纯化得到10个不同的克隆。其中发现一个是上述的TbRa35，一个是以前鉴定的结核分枝杆菌抗原HSP60。在其余的8个克隆中，发现6个克隆(后称RDIF2、RDIF5、RDIF8、RDIF10、RDIF11和RDIF12)与以前鉴定的结核分枝杆菌序列具有一定相似性。RDIF2、RDIF5、RDIF8、RDIF10和RDIF11测得的DNA序列分别提供在SEQ ID NO:184-188中，其对应的预计氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:189-193中。RDIF12的5＇和3＇DNA序列分别提供在SEQ ID NO:194和195中。发现与抗原RDIF-7没有显著的同源性。RDIF7测得的DNA序列以及预计的氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:196和197中。还分离出另一个克隆，称为RDIF6，然而，发现它与RDIF5相同。
如上所述制备重组的RDIF6、RDIF8、RDIF10和RDIF11。发现这些抗原在分离自结核分枝杆菌-免疫献血员的T细胞中刺激细胞增殖和IFN-γ产生。
实施例4从结核菌素纯化的蛋白质衍生物纯化多肽并作特性分析如下所述，从结核菌素纯化蛋白质衍生物(PPD)中分离得到结核分枝杆菌多肽。
PPD如公开的那样稍作改动来制备(Seibert,F．等人，″结核菌素纯化的蛋白质衍生物。大量标准品的制备和分析″The American Review of Tuberculosis 44:9-25,1941)。使结核分枝杆菌Rv菌株在转瓶中合成培养基中37℃生长6周。然后在水蒸汽中加热含有细菌生长的瓶至100℃3小时。用0.22μ滤膜对培养物作无菌过滤，用3kD截断膜将液相浓缩20倍。用50％硫酸铵溶液沉淀蛋白质一次，用25％硫酸铵溶液沉淀8次。得到的蛋白质(PPD)用C18柱(7.8×300mM；Waters,Milford,MA)在BiocadHPLC系统(Preseptive Biosystems,Framingham,MA)中通过反相液相层析(RP-HPLC)分级。用0-100％缓冲液(含0.1％TFA的乙腈)的线性梯度从柱上洗脱各级分。流速为10毫升/分钟，在214nm和280nm下监测洗脱液。
收集到6个级分，干燥，分别悬于PBS中，在感染结核分枝杆菌的豚鼠中测试6个级分诱导迟发型超敏(DTH)反应的情况。发现一个级分诱导了强的DTH反应，随后将此级分在Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Model 172 HPLC中在微孔Vydac C18柱(目录号218TP5115)上通过RP-HPLC进一步分级。用5-100％缓冲液(含0.05％TFA的乙腈)的线性梯度以80微升/分钟的流速洗脱各级分。在215nm下监测洗脱液。收集到8个级分，测试其在感染了结核分枝杆菌的豚鼠中诱导DTH的情况。发现一个级分诱导可约16毫米硬块的强DTH反应。其它级分没有诱导出可检测的DTH。对该阳性级分再进行SDS-PAGE凝胶电泳，发现有大约12kD分子量的单个蛋白条带。
如上所述，用Perkin Elmer/Applied Biosystems Division Procise 492型蛋白测序仪从氨基端起对该多肽(后称DPPD)测序，发现N端序列如SEQ ID NO:124所示。如上所述将该序列与基因库中的已知序列比较，结果表明没有已知的同源物。分离DPPD的四个溴化氰片段，发现具有如SEQ ID NO:125-128所示的序列。随后搜寻由基因组搜寻委员会(Institute for Genomic Research)发布的结核分枝杆菌基因组数据库，结果表明DPPD部分氨基酸序列与结核分枝杆菌粘粒MTY21C12中的序列匹配。鉴定出336bp的一个开放读框。DPPD的全长DNA序列提供在SEQ ID NO:235中，其对应的全长氨基酸序列提供在SEQ ID NO:236中。
实施例5用感染结核病的猴血清鉴定编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列从结核分枝杆菌Erdman菌株分离得到基因组DNA，随机剪切并用于以λZAP表达系统(Stratagene,La Jolla,CA)构建表达文库。从感染结核分枝杆菌Erdman菌株后18、33、51和56天的猕猴获得血清样品。合并这些样品，用实施例3C所述的步骤筛选结核分枝杆菌基因组DNA表达文库。
纯化得到20个克隆。SEQ ID NO:210-220中分别提供了称为MO-1、MO-2、MO-4、MO-8、MO-9、MO-26、MO-28、MO-29、MO-30、MO-34和MO-35的克隆所测得的5＇DNA序列，其对应的预计氨基酸序列提供在SEQ ID NO:221-231中。克隆MO-10的全长DNA序列提供在SEQ ID NO:232中，其对应的预计氨基酸序列提供在SEQ ID NO:233中。克隆MO-27的3＇DNA序列提供在SEQ ID NO:234中。
发现克隆MO-1、MO-30和MO-35与以前鉴定的未明结核分枝杆菌序列以及粘粒MTCI237有高度相关并表现出某些同源性。发现MO-2与结核分枝杆菌的天冬氨酸激酶有一些同源性。发现MO-3、MO-7和MO-27是相同的，并与MO-5高度相关。所有这四种克隆表现出与结核分枝杆菌热休克蛋白70有一些同源性。发现MO-27与结核分枝杆菌粘粒MTCY339有一些同源性。发现MO-4和MO-34与粘粒SCY21B4以及耻垢分枝杆菌整合宿主因子有一些同源性，还发现两者与以前鉴定的未知的结核分枝杆菌序列有一些同源性。发现MO-6与结核分枝杆菌热休克蛋白65有一些同源性。发现MO-8、MO-9、MO-10、MO-26和MO-29彼此高度相关，且与结核分枝杆菌二氢硫辛酰胺琥珀酰转移酶有一些同源性。发现MO-28、MO-31和MO-32是相同的，并显示出与以前鉴定的结核分枝杆菌蛋白质有一些同源性。发现MO-33与以前鉴定的14kDa结核分枝杆菌热休克蛋白有一些同源性。
用上述方案作进一步研究，导致分离得到另四个克隆，后称MO-12、MO-13、MO-19和MO-39。这些克隆所测得的5＇cDNA序列分别提供在SEQ ID NO:290-293中，其对应的预计蛋白质序列分别提供在SEQ ID NO:294-297中。如上所述将这些序列与基因库中的那些序列比较，结果揭示与MO-39没有显著的同源性。发现MO-12、MO-13和MO-19与以前从结核分枝杆菌分离的未知序列有一些同源性。
实施例6通过筛选新的表达文库分离编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列本实施例描述了通过用结核分枝杆菌感染患者的血清筛选新的表达文库来分离编码结核分枝杆菌抗原的DNA序列，该血清显示与一组重组结核分枝杆菌抗原TbRa11,TbRa3,Tb38-1,TbH4,TbF和38kD不反应。
将来自结核分枝杆菌Erdman菌株的基因组DNA随机剪切至平均大小为2kb，用Klenow聚合酶使末端变成平头，然后加入EcoRⅠ衔接物。随后将插入物连接入筛选噬菌体载体(Novagen,Madison,WI)，用PhageMaker抽提物(Novagen)体外包装。如实施例3B所述的那样，用来自几个结核分枝杆菌献血员的已显示对一组以前鉴定的结核分枝杆菌抗原呈阴性(反应)的血清筛选得到的文库。
总共分离得到22个不同的克隆。相比，用同血一清筛选上述λZAP文库没有得到一个阳性命中物。发现一个克隆代表了上述的TbRa11。其余21个克隆中的19个克隆(后称Erdsn1,Erdsn2,Erdsn4-Erdsn10,Erdsn12-18,Erdsn21-Erdsn23以及Erdsn25)所测得的5＇cDNA序列分别提供在SEQ ID NO:298-317中,Erdsn1,Erdsn2,Erdsn4,Erdsn5,Erdsn7-Erdsn10,Erdsn12-Erdsn18,Erdsn21-Erdsn23以及Erdsn25所测得的3＇cDNA序列分别提供在SEQ ID NO:318-336中。克隆Erdsn24的全部cDNA插入序列提供在SEQ ID NO:337中。将测得的cDNA序列与基因库中的那些序列比较，结果表明与SEQ ID NO:304、311、313-315、317、319、324、326、329、331、333、335和337提供的序列没有显著同源性。发现SEQ ID NO:298-303、305-310、312、316、318、320-321、324-326、328、330、332、334和336的序列与以前在结核分枝杆菌中鉴定的未知序列有一些同源性。
实施例7用质谱法分离可溶性结核分枝杆菌抗原本实施例描述用质谱法鉴定可溶性结核分枝杆菌抗原。
在第一个方法中，用结核病感染个体的血清通过Western分析筛选结核分枝杆菌培养渗滤液。从银染凝胶上切下反应条带，用质谱法测定氨基酸序列。一个分离抗原所测得的氨基酸序列提供在SEQ ID NO:338中。将该序列与基因库中的那些序列比较，结果揭示与以前在结核分枝杆菌中鉴定的85b前体抗原同源。
在第二个方法中，研究了结核分枝杆菌培养上清液的高分子量区域。该区域可能含有可用于诊断结核分枝杆菌感染的免疫优势抗原。通过Western分析，两个已知的单克隆抗体IT24和IT57(购自Center for Disease Control,Atlanta,GA)显示出与此邻近的抗原有反应性，但是该抗原的身份仍然未知。另外，未知的高分子量蛋白质已被描述成含有HIV阳性个体中结核分枝杆菌感染的替代制造者(Jnl.Infect.Dis.,176:133-143,1997)。为了确定这些抗原的身份，用抗体IT57和IT42进行了二维凝胶电泳和二维Western分析。鉴定出高分子量区域的5个蛋白质斑点，单独切下，酶促消化并进行质谱分析。
这些斑点中的三个(称为斑点1、2和4)所测得的氨基酸序列分别提供在SEQ IDNO:339,340-341和342中。将这些序列与基因库中的那些序列比较，结果表明斑点1是以前鉴定的Pck-1(一种磷酸烯醇丙酮酸激酶)。分离自斑点2的两个序列经测定来自两个DNAks，它们以前在结核分枝杆菌中鉴定为热休克蛋白。斑点4被确定是以前鉴定的结核分枝杆菌蛋白质Kat G。就发明人所知，Pck-1和两个DNAks以前均未显示可用来诊断结核分枝杆菌感染。
实施例8合成性多肽的合成可通过FMOC化学试剂用HPTU(O-苯并三唑-N,N,N＇,N＇-四甲基脲六氟磷酸)激活在Millipore 9050肽合成仪上合成多肽。可将Gly-Cys-Gly序列与肽的氨基端连接，提供一种对肽的偶联或标记方法。用下列切割混合物可将肽从固相载体上切割下来三氟乙酸∶乙二硫醇∶苯硫基甲烷∶水∶苯酚(40∶1∶2∶2∶3)。切割2小时后，可将肽沉淀在冷的甲基叔丁基醚中。然后将肽沉淀溶于含有0.1％三氟乙酸(TFA)的水中，冻干，然后用C18反相HPLC纯化。可用含0-60％梯度乙腈(含有0.1％TFA)的水(含有0.1％TFA)洗脱肽。在将纯级分冻干后，可用电喷射质谱法和氨基酸分析对肽作特性分析。
用该步骤合成了含有一个半TbM-1序列重复序列的TbM-1肽。TbM-1肽具有序列GCGDRSGGNLDQIRLRRDRSGGNL(SEQ ID NO:63)。
实施例9代表性抗原在结核病血清学诊断中的用途本实施例描述了几个代表性抗原的诊断性质。
在96孔板上进行试验，测试板上包被了稀释在50微升碳酸盐包被缓冲液(pH9.6)的200ng抗原。4℃下包被诸孔过夜(37℃2小时)。然后除去孔中物质，用200微升PBS/1％BSA封闭诸孔2小时。封闭步骤后，用PBS/0.1％吐温20TM洗孔5次。然后在各孔中加入50微升1∶100稀释在PBS/0.1％吐温20TM/0.1％BSA中的血清，室温培育30分钟。然后用PBS/0.1％吐温20TM再洗板5次。
然后将酶偶联物(辣根过氧化物酶-蛋白质A,Zymed,San Francisco,CA)1∶10000稀释在PBS/0.1％吐温20TM/0.1％BSA中，在各孔中加入50微升稀释的偶联物，室温培育30分钟。培育后，用PBS/0.1％吐温20TM洗涤孔5次。加入100微升四甲基联苯胺过氧化物酶(TMB)底物(Kirkegaard and Perry Laboratories,Gaithersburg,MD)，不稀释，培育大约15分钟。在每个孔内加入100微升1N硫酸终止反应，在450nm平板读数。
图4显示了用结核分枝杆菌阳性和阴性患者的血清以及实施例3方法A的两个重组抗原(TbRa3和TbRa9)的ELISA反应性。将这些抗原的反应性与分离自结核分枝杆菌菌株H37Ra(Difco,Detroit,MI)的细菌裂解液比较。在两种情况下，重组抗原均能区别阳性和阴性血清。根据从接受者-操作者曲线(receiver-operator curve)获得的截断值，TbRa3检测出87份阳性血清中的56份，TbRa9检测出165份阳性血清中的111份。
图5描述了用实施例3方法B分离的代表性抗原的ELISA反应性。将重组抗原TbH4,TbH12,Tb38-1和肽TbM-1的反应性(如实施例4所述)与Andersen和Hansen,Infect.Immun.57:2481-2488,1989中描述的38kD抗原的反应性比较。同样，测试的所有多肽均能区别阳性和阴性血清。根据从接受者-操作者曲线获得的截断值，TbH4检测出126份阳性血清中的67份，TbH12检测出125份阳性血清中的50份，38-1检测出101份阳性血清中的61份，TbM-1肽检测出30份阳性血清中的25份。
还检查了四种抗原(TbRa3,TbRa9,TbH4和TbH12)与一组结核分枝杆菌感染患者的血清(此血清在痰液的抗酸细菌染色中有不同的反应性(Smithwick和David,Tubercle 52:226,1971))的反应性，并与结核分枝杆菌裂解液以及38kD抗原的反应性比较。结果显示在下表3中表3抗原与结核分枝杆菌患者血清的反应性


根据从接受者-操作者曲线获得的截断值，TbRa3检测出27份阳性血清中的23份，TbRa9检测出27份中的22份，TbH4检测出27份中的18份，TbH12检测出27份的15份。如果合用，这四种抗原理论上的敏感性是27份中检出27份，这表明在结核分枝杆菌感染的血清学检测中，这些抗原应互相补充。另外，几种重组抗原检测出用38kD抗原未能检测出的阳性血清，这表明这些抗原可能与38kD抗原互补。
如上所述，用ELISA测定重组抗原TbRa11和显示对38kD抗原呈阴性的结核分枝杆菌患者血清以及PPD阳性和正常献血员血清的反应性。结果显示在图6中。结果表明TbRa11尽管对PPD阳性和正常献血员的血清呈阴性，却检测出对38kD抗原呈阴性的血清。在测试的13份38kD阴性血清中，有9份对TbRa11呈阳性，这表明该抗原可能与38kD抗原阴性血清的一个亚组反应。相反，在一组与TbRa1l反应的38kD阳性血清中，TbRa11的平均OD450低于38kD抗原的平均OD450。此数据表明TbRa11活性和38kD阳性之间成相反的关系。
在间接ELISA试验中测试了抗原TbRa2A，试验开始时用50微升稀释度为1∶100的血清在室温下反应30分钟，然后用PBS吐温洗涤，并与稀释度为1∶10000的生物素化蛋白质A(Zymed,San Francisco,CA)培育30分钟。洗涤后，加入1∶10000稀释的链霉亲和素辣根过氧化物酶(Zymed)，培育混合物30分钟。洗涤后，如上所述用TMB底物使试验显色。表4中显示了TbRa2A与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清的反应性。TbRa2A与结核分枝杆菌患者血清的反应性的平均值为0.444，标准偏差为0.309。与正常献血员的血清的反应性平均值为0.109，标准偏差为0.029。38kD阴性血清的测试(图7)也表明TbRa2A抗原能检测出该范畴中的血清。
表4TBRA2A与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清的反应性


如上所述，用ELISA测定重组抗原(g)(SEQ ID NO:60)与结核分枝杆菌患者以及正常献血员的血清的反应性。图8显示了全都和38kD抗原反应的四份结核分枝杆菌阳性血清以及四份供体血清滴定抗原(g)的结果。所有四份阳性血清都与抗原(g)反应。
如上所述，用间接ELISA测定了重组抗原TbH-29(SEQ ID NO:137)与结核分枝杆菌患者、PPD阳性献血员以及正常献血员的血清的反应性。结果显示在图9中。TbH检测出60份结核分枝杆菌血清中的30份，8份PPD阳性血清中的2份以及27份正常血清中的2份。
图10显示了用结核分枝杆菌患者的血清、正常献血员的血清以及结核分枝杆菌患者的合并血清对抗原TbH-33(SEQ ID NO:140)进行ELISA测试(直接和间接)的结果。证实结核分枝杆菌患者血清的OD450平均值高于正常献血员的血清，间接ELISA中的OD450平均值显著高于直接ELISA中的OD450平均值。图11是重组TbH-33与结核分枝杆菌患者血清以及正常献血员血清的反应性的滴定曲线，该曲线显示OD450随抗原浓度增加而增加。
如上所述，用ELISA测定重组抗原RDIF6、RDIF8和RDIF10(分别为SEQ ID NO:184-187)与结核分枝杆菌患者血清以及正常献血员血清的反应性。RDIF6检测出32份结核分枝杆菌血清中的6份，15份正常血清中的0份；RDIF8检测出32份结核分枝杆菌血清中的14份，15份正常血清中的0份；RDIF10检测出27份结核分枝杆菌血清中的4份，15份正常血清中的1份。另外，发现RDIF10检测出5份PPD阳性献血员血清中的0份。
在大肠杆菌中表达了上述实施例5中的抗原MO-1、MO-2、MO-4、MO-28和MO-29，并用六组氨酸尾纯化。如上所述用ELISA检测这些抗原与结核分枝杆菌阳性以及阴性血清的反应性。图12A-E中分别显示了在对四份结核分枝杆菌阳性血清和四份结核分枝杆菌阴性血清测试时在不同固相包被水平下MO-1、MO-2、MO-4、MO-28和MO-29的反应性。在HIV阳性/结核病(HIV/TB)阳性和肺外血清组中对克隆中的三个克隆MO-1、MO-2和MO-29作进一步测试。MO-1检测出20份肺外血清中的3份，38份HIV/TB血清中的2份。在同一血清组中，MO-2检测出20份中的2份，38份中的10份，MO-29检测出20份血清中的2份，38份中的8份。这三个克隆组合将检测出20份肺外血清中的4份，38份HIV/TB血清中的16份。另外，在17份已显示仅与结核分枝杆菌裂解液反应但不与本发明的38kD或其它抗原反应的血清中，MO-1检测出6份。
实施例10结核分枝杆菌融合蛋白的制备和特性分析如下制备含有TbRa3,38kD抗原和Tb38-1的融合蛋白。
用PCR修饰各个DNA构建物TbRa3,38kD和Tb38-1，以促进它们的融合级融合蛋白TbRa3-38kD-Tb38-1随后的表达。用TbRa3,38kD和Tb38-1的DNA进行PCR，采用的引物分别为PDM-64和PDM-65(SEQ ID NO:141和142),PDM-57和PDM-58(SEQ ID NO:143和144),PDM-69和PDM-60(SEQ ID NO:145-146)。在每一例中，用10微升10X Pfu缓冲液、2微升10mM dNTP、2微升10微摩尔的各种PCR引物、81.5微升水、1.5微升Pfu DNA聚合酶(Stratagene,La Jolla,CA)和1微升70ng/μl(对于TbRa3而言)或50ng/μl(对于38kD和Tb38-1而言)的DNA进行DNA扩增。对于TbRa3，进行94℃变性2分钟，然后进行40轮的96℃15秒和72℃1分钟，最后72℃4分钟。对于38kD,96℃变性2分钟，然后进行40轮的96℃30秒，68℃15秒和72℃3分钟，最后72℃4分钟。对于Tb38-1,94℃变性2分钟，然后进行10轮的96℃15秒、68℃15秒、72℃1.5分钟，30轮的96℃15秒、64℃15秒和72℃1.5分钟，最后72℃4分钟。
用NdeⅠ和EcoRⅠ消化TbRa3 PCR片段，用NdeⅠ和EcoRⅠ位点直接克隆到pT7＾L2IL1载体中。用Sse8387I消化38kD PCR片段，用T4 DNA聚合酶处理变为平头，然后用EcoRⅠ消化，直接克隆到经StuⅠ和EcoRⅠ消化的pT7＾L2Ra3-1载体中。用Eco47Ⅲ和EcoRⅠ消化38-1PCR片段，直接亚克隆到经相同酶消化的pT7＾L2Ra3/38kD-17中。然后利用NdeⅠ和EcoRⅠ位点将整个融合物转移到pET28b中。通过DNA测序确认融合构建物。
将表达构建物转化到BLR plys S大肠杆菌(Novagen,Madison,WI)中在含卡那霉素(30微克/毫升)和氯霉素(34微克/毫升)的LB肉汤中生长过夜。用该培养物(12毫升)接种500毫升含相同抗生素的2XYT，在OD650为0.44时用IPTG诱导培养物至最终浓度为1.2毫摩尔。诱导4小时后，收获细菌并在20毫摩尔Tris(8.0)、100毫摩尔NaCl、0.1％DOC、20微克/毫升亮抑酶肽、20毫摩尔PMSF中超声处理，然后26000Xg离心。将得到的沉淀重悬于8M尿素、20毫摩尔Tris(8.0)、100毫摩尔NaCl中并结合到Pro-bond nickel树脂(Invitrogen,Carlsbad,CA)。用上述缓冲液洗柱数次，然后用咪唑梯度(50毫摩尔、100毫摩尔、500毫摩尔咪唑加入8M尿素、20毫摩尔Tris(8.0)、100毫摩尔氯化钠中)洗脱。然后用10毫摩尔Tris(8.0)透析含有感兴趣蛋白质的洗脱液。
SEQ ID NO:147和148分别提供了所得融合蛋白(后称TbRa3-38kD-Tb38-1)的DNA序列和氨基酸序列。
用类似于上文的方法制备含有两个抗原TbH-9和Tb38-1但无铰链序列(后称TbH9-Tb38-1)的融合蛋白。SEQ ID NO:151中提供了TbH9-Tb38-1融合蛋白的DNA序列。
如下制备含有TbRa3、抗原38kD、Tb38-1和DPEP的融合蛋白。
基本上如上所述的那样，用PCR修饰各个DNA构建物TbRa3、38kD和Tb38-1，并克隆到载体中，引物PDM-69(SEQ ID NO:145)和PDM-83(SEQ ID NO:200)用于Tb38-1A片段的扩增。Tb38-1A与Tb38-1不同之处在于编码区3＇端有DraⅠ位点，该位点维持最终氨基酸完整同时产生了符合读框的平头限制性位点。然后用NdeⅠ和EcoRⅠ位点将TbRa3/38kD/Tb38-1A融合物转移到pET28b中。
用DPEP DNA进行PCR，采用引物PDM-84和PDM-85(分别为SEQ ID NO:201和202)以及1微升50ng/μl DNA。94℃变性2分钟，然后进行10轮96℃15秒、68℃15秒和72℃1.5分钟；30轮96℃15秒、64℃15秒和72℃1.5分钟；最后72℃4分钟。用EcoRⅠ和Eco72Ⅰ消化DPEP PCR片段，直接克隆到经DraⅠ和EcoRⅠ消化的pET28Ra3/38kD/38-1A构建物中。用DNA测序确认融合构建物的正确。如上所述制备重组蛋白。得到的融合蛋白(后称TbF-2)的DNA和氨基酸序列分别提供在SEQID NO:203和204中。
如下制备含有TbRa3、抗原38kD、Tb38-1和TbH4的融合蛋白。
用结核分枝杆菌基因组DNA来PCR全长TbH4(FL TbH4)，采用引物PDM-157和PDM-160(分别为SEQ ID NO:343和344)和2微升100ng/μl的DNA。96℃变性2分钟，然后进行40轮的96℃30秒、61℃20秒和72℃5分钟；最后72℃退火10分钟。用EcoRⅠ和ScaⅠ(New England Biolabs)消化FL TbH4 PCR片段，直接克隆到上述经DraⅠ和EcoRⅠ消化的pET28Ra3/38kD/38-1A构建物中。用DNA测序确认融合构建物正确。如上所述制备重组蛋白。得到的融合蛋白(后称TbF-6)的DNA和氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:345和346中。
如下制备含有由接头隔开的抗原38kD和DPEP的融合蛋白。
用38kD DNA进行PCR，采用引物PDM-176和PDM-175(分别为SEQ ID NO:347和348)以及1微升110ng/μl的PET28Ra3/38kD/38-1/Ra2A-12 DNA。96℃变性2分钟，然后进行40轮的96℃30秒、71℃15秒和72℃5分钟40秒；最后72℃退火4分钟。两组引物PDM-171、PDM-172和PDM-173、PDM-174通过95℃加热2分钟然后以0.1℃/秒的速度降至25℃来退火。如上所述用DPEP DNA进行PCR。用EcoRⅠ(New England Biolabs)消化38kD片段，并克隆到经Eco72Ⅰ(Promega)和EcoRⅠ切割的修饰的pT7ΔL2载体中。修饰的pT7ΔL2构建物设计成在紧靠Eco72Ⅰ位点的5＇有符合读框的MGHHHHHH氨基酸编码区。用Kpn2Ⅰ(Gibco,BRL)和PstⅠ(NewEngland Biolabs)消化构建物，克隆入退火的一组磷酸化的引物(PDM-171、PDM-172和PDM-173、PDM-174)。用EcoRⅠ和Eco72Ⅰ消化DPEP PCR片段，克隆到经过Eco47Ⅲ(New England Biolabs)和EcoRⅠ消化的此第二构建物中。用Panvera(Madison,WI)的连接试剂盒进行连接。得到的构建物用NdeⅠ(New England Biolabs)和EcoRⅠ消化，转移到修饰的pET28载体中。通过DNA测序确认融合构建物的正确。
基本上如上所述制备重组蛋白。所得融合蛋白(后称TbF-8)的DNA和氨基酸序列分别提供在SEQ ID NO:349和350中。
实施例11结核分枝杆菌融合蛋白在结核病血清学诊断中的应用用ELISA检查上述制得的融合蛋白TbRa3-38kD-Tb38-1在结核病感染的血清学诊断中的效果。
ELISA程序如上文实施例6所述，每孔包被200ng融合蛋白。从经ELISA或Western印迹分析已显示与三种抗原之一或其组合起反应的一组结核病患者中选出一组血清。该组血清能分辨融合蛋白的血清学反应性，以确定是否所有三个表位均与融合蛋白作用。如表5所示，用融合蛋白仅能检测到所有四份与TbRa3反应的血清。仅与Tb38-1反应的三份血清也是可检测的，与单单38kD反应的两份血清也是如此。根据阴性平均值+3个标准偏差的试验中的截断值，其余的15份血清均对融合蛋白呈阳性。该数据证明了融合蛋白中所有三个表位均有功能活性。
表5三肽融合蛋白与结核分枝杆菌患者血清的反应性



用上文描述的方法通过ELISA检查融合蛋白TbF-2与结核分枝杆菌感染患者血清的反应性。这些研究的结果(表6)证明所有四种抗原在融合蛋白中独立地起作用。
表6TBF-2融合蛋白与TB(结核病)以及正常血清的反应性


本领域技术人员将会理解，融合蛋白中的各抗原次序可以改变，并且预计将提供相当的活性，只要每个表位仍然在功能上有效。另外，在构建融合蛋白时可以采用含有活性表位的蛋白质截短形式。
从前述内容可以理解，尽管本文出于说明的目的描述了本发明的具体实施方案，但仍可不脱离本发明精神和范围而作各种变动。
序列表(1)一般信息(ⅰ)申请人Reed,Steven G.
Skeiky,Yasir A.W.
Dillon,Davin C.
Campos-Neto,AntoniaHoughton,RaymondVedvick,Thomas S.
Twardzik,Daniel R.
Lodes,Michael J.
Hendrickson,Ronald(ⅱ)发明名称诊断结核病的化合物和方法(ⅲ)序列数目350(ⅳ)通信地址(A)地址SEED and BERRY LLP(B)街道6300 Columbia Center,701 Fifth Avenue(C)城市Seattle(D)州Washington(E)国家USA(F)ZIP:98104-7092(ⅴ)计算机可读形式(A)记录介质类型软盘(B)计算机IBM PC兼容型(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件PatentIn Release#1.0,Version#1.30(ⅵ)本申请资料(A)申请号(B)申请日1998年5月5日(C)分类(ⅷ)律师/代理人信息(A)姓名Maki,David J.
(B)登记号31,392(C)参考/案卷号210121.417C9(ⅸ)通讯信息(A)电话(206)622-4900(B)电传(206)682-6031(2)SEQ ID NO:1的信息(ⅰ)序列特征(A)长度766碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:1:CGAGGCACCG GTAGTTTGAA CCAAACGCAC AATCGACGGG CAAACGAACG GAAGAACACA 60ACCATGAAGA TGGTGAAATC GATCGCCGCA GGTCTGACCG CCGCGGCTGC AATCGGCGCC 120GCTGCGGCCG GTGTGACTTC GATCATGGCT GGCGGCCCGG TCGTATACCA GATGCAGCCG 180GTCGTCTTCG GCGCGCCACT GCCGTTGGAC CCGGCATCCG CCCCTGACGT CCCGACCGCC 240GCCCAGTTGA CCAGCCTGCT CAACAGCCTC GCCGATCCCA ACGTGTCGTT TGCGAACAAG 300GGCAGTCTGG TCGAGGGCGG CATCGGGGGC ACCGAGGCGC GCATCGCCGA CCACAAGCTG 360AAGAAGGCCG CCGAGCACGG GGATCTGCCG CTGTCGTTCA GCGTGACGAA CATCCAGCCG 420GCGGCCGCCG GTTCGGCCAC CGCCGACGTT TCCGTCTCGG GTCCGAAGCT CTCGTCGCCG 480GTCACGCAGA ACGTCACGTT CGTGAATCAA GGCGGCTGGA TGCTGTCACG CGCATCGGCG 540ATGGAGTTGC TGCAGGCCGC AGGGNAACTG ATTGGCGGGC CGGNTTCAGC CCGCTGTTCA 600GCTACGCCGC CCGCCTGGTG ACGCGTCCAT GTCGAACACT CGCGCGTGTA GCACGGTGCG 660GTNTGCGCAG GGNCGCACGC ACCGCCCGGT GCAAGCCGTC CTCGAGATAG GTGGTGNCTC720GNCACCAGNG ANCACCCCCN NNTCGNCNNT TCTCGNTGNT GNATGA766(2)SEQ ID NO:2的信息(ⅰ)序列特征(A)长度752碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID 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(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:29:GATCGTGGAG CTGTCGATGA ACAGCGTTGC CGGACGCGCG GCGGCCAGCA CGTCGGTGTA 60GCAGCGCCGG ACCACCTCGC CGGTGGGCAG CATGGTGATG ACCACGTCGG CCTCGGCCAC 120CGCTTCGGGC GCGCTACGAA ACACCGCGAC ACCGTGCGCG GCGGCGCCGG ACGCCGCCGT 180GG182(2)SEQ ID NO:30的信息(ⅰ)序列特征(A)长度308碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:30:GATCGCGAAG TTTGGTGAGC AGGTGGTCGA CGCGAAAGTC TGGGCGCCTG CGAAGCGGGT 60CGGCGTTCAC GAGGCGAAGA CACGCCTGTC CGAGCTGCTG CGGCTCGTCT ACGGCGGGCA 120GAGGTTGAGA TTGCCCGCCG CGGCGAGCCG GTAGCAAAGC TTGTGCCGCT GCATCCTCAT 180GAGACTCGGC GGTTAGGCAT TGACCATGGC GTGTACCGCG TGCCCGACGA TTTGGACGCT 240CCGTTGTCAG ACGACGTGCT CGAACGCTTT CACCGGTGAA GCGCTACCTC ATCGACACCC 300ACGTTTGG 308(2)SEQ ID NO:31的信息(ⅰ)序列特征(A)长度267碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:31:CCGACGACGA GCAACTCACG TGGATGATGG TCGGCAGCGG CATTGAGGAC GGAGAGAATC 60CGGCCGAAGC TGCCGCGCGG CAAGTGCTCA TAGTGACCGG CCGTAGAGGG CTCCCCCGAT 120GGCACCGGAC TATTCTGGTG TGCCGCTGGC CGGTAAGAGC GGGTAAAAGA ATGTGAGGGG 180ACACGATGAG CAATCACACC TACCGAGTGA TCGAGATCGT CGGGACCTCG CCCGACGGCG 240TCGACGCGGC AATCCAGGGC GGTCTGG 267(2)SEQ ID NO:32的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1539碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:32:CTCGTGCCGA AAGAATGTGA GGGGACACGA TGAGCAATCA CACCTACCGA GTGATCGAGA 60TCGTCGGGAC CTCGCCCGAC GGCGTCGACG CGGCAATCCA GGGCGGTCTG GCCCGAGCTG 120CGCAGACCAT GCGCGCGCTG GACTGGTTCG AAGTACAGTC AATTCGAGGC CACCTGGTCG 180ACGGAGCGGT CGCGCACTTC CAGGTGACTA TGAAAGTCGG CTTCCGCTGG AGGATTCCTG 240AACCTTCAAG CGCGGCCGAT AACTGAGGTG CATCATTAAG CGACTTTTCC AGAACATCCT 300GACGCGCTCG AAACGCGGTT CAGCCGACGG TGGCTCCGCC GAGGCGCTGC CTCCAAAATC 360CCTGCGACAA TTCGTCGGCG GCGCCTACAA GGAAGTCGGT GCTGAATTCG TCGGGTATCT 420GGTCGACCTG TGTGGGCTGC AGCCGGACGA AGCGGTGCTC GACGTCGGCT GCGGCTCGGG 480GCGGATGGCG TTGCCGCTCA CCGGCTATCT GAACAGCGAG GGACGCTACG CCGGCTTCGA 540TATCTCGCAG AAAGCCATCG CGTGGTGCCA GGAGCACATC ACCTCGGCGC ACCCCAACTT 600CCAGTTCGAG GTCTCCGACA TCTACAACTC GCTGTACAAC CCGAAAGGGA AATACCAGTC 660ACTAGACTTT CGCTTTCCAT ATCCGGATGC GTCGTTCGAT GTGGTGTTTC TTACCTCGGT 720GTTCACCCAC ATGTTTCCGC CGGACGTGGA GCACTATCTG GACGAGATCT CCCGCGTGCT 780GAAGCCCGGC GGACGATGCC TGTGCACGTA CTTCTTGCTC AATGACGAGT CGTTAGCCCA 840CATCGCGGAA GGAAAGAGTG CGCACAACTT CCAGCATGAG GGACCGGGTT ATCGGACAAT 900CCACAAGAAG CGGCCCGAAG AAGCAATCGG CTTGCCGGAG ACCTTCGTCA GGGATGTCTA 960TGGCAAGTTC GGCCTCGCCG TGCACGAACC ATTGCACTAC GGCTCATGGA GTGGCCGGGA1020ACCACGCCTA AGCTTCCAGG ACATCGTCAT CGCGACCAAA ACCGCGAGCT AGGTCGGCAT1080CCGGGAAGCA TCGCGACACC GTGGCGCCGA GCGCCGCTGC CGGCAGGCCG ATTAGGCGGG1140CAGATTAGCC CGCCGCGGCT CCCGGCTCCG AGTACGGCGC CCCGAATGGC GTCACCGGCT1200GGTAACCACG CTTGCGCGCC TGGGCGGCGG CCTGCCGGAT CAGGTGGTAG ATGCCGACAA1260AGCCTGCGTG ATCGGTCATC ACCAACGGTG ACAGCAGCCG GTTGTGCACC AGCGCGAACG1320CCACCCCGGT CTCCGGGTCT GTCCAGCCGA TCGAGCCGCC CAAGCCCACA TGACCAAACC1380CCGGCATCAC GTTGCCGATC GGCATACCGT GATAGCCAAG ATGAAAATTT AAGGGCACCA1440ATAGATTTCG ATCCGGCAGA ACTTGCCGTC GGTTGCGGGT CAGGCCCGTG ACCAGCTCCC1500GCGACAAGAA CCGTATGCCG TCGATCTCGC CTCGTGCCG 1539(2)SEQ ID NO:33的信息(ⅰ)序列特征(A)长度851碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:33:CTGCAGGGTG GCGTGGATGA GCGTCACCGC GGGGCAGGCC GAGCTGACCG CCGCCCAGGT 60CCGGGTTGCT GCGGCGGCCT ACGAGACGGC GTATGGGCTG ACGGTGCCCC CGCCGGTGAT 120CGCCGAGAAC CGTGCTGAAC TGATGATTCT GATAGCGACC AACCTCTTGG GGCAAAACAC 180CCCGGCGATC GCGGTCAACG AGGCCGAATA CGGCGAGATG TGGGCCCAAG ACGCCGCCGC 240GATGTTTGGC TACGCCGCGG CGACGGCGAC GGCGACGGCG ACGTTGCTGC CGTTCGAGGA 300GGCGCCGGAG ATGACCAGCG CGGGTGGGCT CCTCGAGCAG GCCGCCGCGG TCGAGGAGGC 360CTCCGACACC GCCGCGGCGA ACCAGTTGAT GAACAATGTG CCCCAGGCGC TGAAACAGTT 420GGCCCAGCCC ACGCAGGGCA CCACGCCTTC TTCCAAGCTG GGTGGCCTGT GGAAGACGGT 480CTCGCCGCAT CGGTCGCCGA TCAGCAACAT GGTGTCGATG GCCAACAACC ACATGTCGAT 540GACCAACTCG GGTGTGTCGA TGACCAACAC CTTGAGCTCG ATGTTGAAGG GCTTTGCTCC 600GGCGGCGGCC GCCCAGGCCG TGCAAACCGC GGCGCAAAAC GGGGTCCGGG CGATGAGCTC 660GCTGGGCAGC TCGCTGGGTT CTTCGGGTCT GGGCGGTGGG GTGGCCGCCA ACTTGGGTCG 720GGCGGCCTCG GTACGGTATG GTCACCGGGA TGGCGGAAAA TATGCANAGT CTGGTCGGCG 780GAACGGTGGT CCGGCGTAAG GTTTACCCCC GTTTTCTGGA TGCGGTGAAC TTCGTCAACG 840GAAACAGTTA C 851(2)SEQ ID NO:34的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度254碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:34:GATCGATCGG GCGGAAATTT GGACCAGATT CGCCTCCGGC GATAACCCAA TCAATCGAAC 60CTAGATTTAT TCCGTCCAGG GGCCCGAGTA ATGGCTCGCA GGAGAGGAAC CTTACTGCTG 120CGGGCACCTG TCGTAGGTCC TCGATACGGC GGAAGGCGTC GACATTTTCC ACCGACACCC 180CCATCCAAAC GTTCGAGGGC CACTCCAGCT TGTGAGCGAG GCGACGCAGT CGCAGGCTGC 240GCTTGGTCAA GATC 254(2)SEQ ID NO:35的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1227碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:35:GATCCTGACC GAAGCGGCCG CCGCCAAGGC GAAGTCGCTG TTGGACCAGG AGGGACGGGA 60CGATCTGGCG CTGCGGATCG CGGTTCAGCC GGGGGGGTGC GCTGGATTGC GCTATAACCT 120TTTCTTCGAC GACCGGACGC TGGATGGTGA CCAAACCGCG GAGTTCGGTG GTGTCAGGTT 180GATCGTGGAC CGGATGAGCG CGCCGTATGT GGAAGGCGCG TCGATCGATT TCGTCGACAC 240TATTGAGAAG CAAGGTTCAC CATCGACAAT CCCAACGCCA CCGGCTCCTG CGCGTGCGGG 300GATTCGTTCA ACTGATAAAA CGCTAGTACG ACCCCGCGGT GCGCAACACG TACGAGCACA 360CCAAGACCTG ACCGCGCTGG AAAAGCAACT GAGCGATGCC TTGCACCTGA CCGCGTGGCG 420GGCCGCCGGC GGCAGGTGTC ACCTGCATGG TGAACAGCAC CTGGGCCTGA TATTGCGACC 480AGTACACGAT TTTGTCGATC GAGGTCACTT CGACCTGGGA GAACTGCTTG CGGAACGCGT 540CGCTGCTCAG CTTGGCCAAG GCCTGATCGG AGCGCTTGTC GCGCACGCCG TCGTGGATAC 600CGCACAGCGC ATTGCGAACG ATGGTGTCCA CATCGCGGTT CTCCAGCGCG TTGAGGTATC 660CCTGAATCGC GGTTTTGGCC GGTCCCTCCG AGAATGTGCC TGCCGTGTTG GCTCCGTTGG 720TGCGGACCCC GTATATGATC GCCGCCGTCA TAGCCGACAC CAGCGCGAGG GCTACCACAA 780TGCCGATCAG CAGCCGCTTG TGCCGTCGCT TCGGGTAGGA CACCTGCGGC GGCACGCCGG 840GATATGCGGC GGGCGGCAGC GCCGCGTCGT CTGCCGGTCC CGGGGCGAAG GCCGGTTCGG 900CGGCGCCGAG GTCGTGGGGG TAGTCCAGGG CTTGGGGTTC GTGGGATGAG GGCTCGGGGT 960ACGGCGCCGG TCCGTTGGTG CCGACACCGG GGTTCGGCGA GTGGGGACCG GGCATTGTGG1020TTCTCCTAGG GTGGTGGACG GGACCAGCTG CTAGGGCGAC AACCGCCCGT CGCGTCAGCC1080GGCAGCATCG GCAATCAGGT GAGCTCCCTA GGCAGGCTAG CGCAACAGCT GCCGTCAGCT1140CTCAACGCGA CGGGGCGGGC CGCGGCGCCG ATAATGTTGA AAGACTAGGC AACCTTAGGA1200ACGAAGGACG GAGATTTTGT GACGATC1227(2)SEQ ID NO:36的信息(ⅰ)序列特征(A)长度181碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:36:GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGGGCCGGC GGGGCCGGCG 60GGACCGGCGC TAACGGTGGT GCCGGCGGCA ACGCCTGGTT GTTCGGGGCC GGCGGGTCCG 120GCGGNGCCGG CACCAATGGT GGNGTCGGCG GGTCCGGCGG ATTTGTCTAC GGCAACGGCG 180G 181(2)SEQ ID NO:37的信息(ⅰ)序列特征(A)长度290碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:37:GCGGTGTCGG CGGATCCGGC GGGTGGTTGA ACGGCAACGG CGGTGTCGGC GGCCGGGGCG 60GCGACGGCGT CTTTGCCGGT GCCGGCGGCC AGGGCGGCCT CGGTGGGCAG GGCGGCAATG 120GCGGCGGCTC CACCGGCGGC AACGGCGGTC TTGGCGGCGC GGGCGGTGGC GGAGGCAACG 180CCCCGGACGG CGGCTTCGGT GGCAACGGCG GTAAGGGTGG CCAGGGCGGN ATTGGCGGCG 240GCACTCAGAG CGCGACCGGC CTCGGNGGTG ACGGCGGTGA CGGCGGTGAC290(2)SEQ ID NO:38的信息(ⅰ)序列特征(A)长度34碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:38:GATCCAGTGG CATGGNGGGT GTCAGTGGAA GCAT 34(2)SEQ ID NO:39的信息(ⅰ)序列特征(A)长度155碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:39:GATCGCTGCT CGTCCCCCCC TTGCCGCCGA CGCCACCGGT CCCACCGTTA CCGAACAAGC 60TGGCGTGGTC GCCAGCACCC CCGGCACCGC CGACGCCGGA GTCGAACAAT GGCACCGTCG 120TATCCCCACC ATTGCCGCCG GNCCCACCGG CACCG155(2)SEQ ID NO:40的信息(ⅰ)序列特征(A)长度53碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:40:ATGGCGTTCA CGGGGCGCCG GGGACCGGGC AGCCCGGNGG GGCCGGGGGG TGG 53(2)SEQ ID NO:41的信息(ⅰ)序列特征(A)长度132碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:41:GATCCACCGC GGGTGCAGAC GGTGCCCGCG GCGCCACCCC GACCAGCGGC GGCAACGGCG 60GCACCGGCGG CAACGGCGCG AACGCCACCG TCGTCGGNGG GGCCGGCGGG GCCGGCGGCA 120AGGGCGGCAA CG 132(2)SEQ ID NO:42的信息(ⅰ)序列特征(A)长度132碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:42:GATCGGCGGC CGGNACGGNC GGGGACGGCG GCAAGGGCGG NAACGGGGGC GCCGNAGCCA 60CCNGCCAAGA ATCCTCCGNG TCCNCCAATG GCGCGAATGG CGGACAGGGC GGCAACGGCG 120GCANCGGCGG CA 132(2)SEQ ID NO:43的信息(ⅰ)序列特征(A)长度702碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:43:CGGCACGAGG ATCGGTACCC CGCGGCATCG GCAGCTGCCG ATTCGCCGGG TTTCCCCACC 60CGAGGAAAGC CGCTACCAGA TGGCGCTGCC GAAGTAGGGC GATCCGTTCG CGATGCCGGC 120ATGAACGGGC GGCATCAAAT TAGTGCAGGA ACCTTTCAGT TTAGCGACGA TAATGGCTAT 180AGCACTAAGG AGGATGATCC GATATGACGC AGTCGCAGAC CGTGACGGTG GATCAGCAAG 240AGATTTTGAA CAGGGCCAAC GAGGTGGAGG CCCCGATGGC GGACCCACCG ACTGATGTCC 300CCATCACACC GTGCGAACTC ACGGNGGNTA AAAACGCCGC CCAACAGNTG GTNTTGTCCG 360CCGACAACAT GCGGGAATAC CTGGCGGCCG GTGCCAAAGA GCGGCAGCGT CTGGCGACCT 420CGCTGCGCAA CGCGGCCAAG 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CCGATGTACC 180TGAACATCGC GGTGGCAGTG CTCGGTCTGG CTGCGTACTT CGCCAGCTTC GGCCCAATGT 240TCACCCTCAG TACCGAACTC GGGGGGGGTG ATGGCGCAGT GTCCGGTGAC ACTGGGCTGC 300CGGTCGGGGT GGCTCTGCTG GCTGCGCTGC TTGCCGGGGT GGTTCTGGTG CCTAAGGCCA 360AGAGCCATGT GACGGTAGTT GCGGTGCTCG GGGTACTCGG CGTATTTCTG ATGGTCTCGG 420CGACGTTTAA CAAGCCCAGC GCCTATTCGA CCGGTTGGGC ATTGTGGGTT GTGTTGGCTT 480TCATCGTGTT CCAGGCGGTT GCGGCAGTCC TGGCGCTCTT GGTGGAGACC GGCGCTATCA 540CCGCGCCGGC GCCGCGGCCC AAGTTCGACC CGTATGGACA GTACGGGCGG TACGGGCAGT 600ACGGGCAGTA CGGGGTGCAG CCGGGTGGGT ACTACGGTCA GCAGGGTGCT CAGCAGGCCG 660CGGGACTGCA GTCGCCCGGC CCGCAGCAGT CTCCGCAGCC TCCCGGATAT GGGTCGCAGT 720ACGGCGGCTA TTCGTCCAGT CCGAGCCAAT CGGGCAGTGG ATACACTGCT CAGCCCCCGG 780CCCAGCCGCC GGCGCAGTCC GGGTCGCAAC AATCGCACCA GGGCCCATCC ACGCCACCTA 840CCGGCTTTCC GAGCTTCAGC CCACCACCAC CGGTCAGTGC CGGGACGGGG TCGCAGGCTG 900GTTCGGCTCC AGTCAACTAT TCAAACCCCA GCGGGGGCGA GCAGTCGTCG TCCCCCGGGG 960GGGCGCCGGT CTAACCGGGC GTTCCCGCGT CCGGTCGCGC GTGTGCGCGA AGAGTGAACA1020GGGTGTCAGC AAGCGCGGAC GATCCTCGTG CCGAATTC1058(2)SEQ ID NO:46的信息(ⅰ)序列特征(A)长度327碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:46:CGGCACGAGA GACCGATGCC GCTACCCTCG CGCAGGAGGC AGGTAATTTC GAGCGGATCT 60CCGGCGACCT GAAAACCCAG ATCGACCAGG TGGAGTCGAC GGCAGGTTCG TTGCAGGGCC 120AGTGGCGCGG CGCGGCGGGG ACGGCCGCCC AGGCCGCGGT GGTGCGCTTC CAAGAAGCAG 180CCAATAAGCA GAAGCAGGAA CTCGACGAGA TCTCGACGAA TATTCGTCAG GCCGGCGTCC 240AATACTCGAG GGCCGACGAG GAGCAGCAGC AGGCGCTGTC CTCGCAAATG GGCTTCTGAC 300CCGCTAATAC GAAAAGAAAC GGAGCAA 327(2)SEQ ID NO:47的信息(ⅰ)序列特征(A)长度170碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:47:CGGTCGCGAT GATGGCGTTG TCGAACGTGA CCGATTCTGT ACCGCCGTCG TTGAGATCAA 60CCAACAACGT GTTGGCGTCG GCAAATGTGC CGNACCCGTG GATCTCGGTG ATCTTGTTCT 120TCTTCATCAG GAAGTGCACA CCGGCCACCC TGCCCTCGGN TACCTTTCGG170(2)SEQ ID NO:48的信息(ⅰ)序列特征(A)长度127碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:48:GATCCGGCGG CACGGGGGGT GCCGGCGGCA GCACCGCTGG CGCTGGCGGC AACGGCGGGG 60CCGGGGGTGG CGGCGGAACC GGTGGGTTGC TCTTCGGCAA CGGCGGTGCC GGCGGGCACG 120GGGCCGT 127(2)SEQ ID NO:49的信息(ⅰ)序列特征(A)长度81碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:49:CGGCGGCAAG GGCGGCACCG CCGGCAACGG GAGCGGCGCG GCCGGCGGCA ACGGCGGCAA 60CGGCGGCTCC GGCCTCAACG G81(2)SEQ ID NO:50的信息(ⅰ)序列特征(A)长度149碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:50:GATCAGGGCT GGCCGGCTCC GGCCAGAAGG GCGGTAACGG AGGAGCTGCC GGATTGTTTG 60GCAACGGCGG GGCCGGNGGT GCCGGCGCGT CCAACCAAGC CGGTAACGGC GGNGCCGGCG 120GAAACGGTGG TGCCGGTGGG CTGATCTGG 149(2)SEQ ID NO:51的信息(ⅰ)序列特征(A)长度355碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:51:CGGCACGAGA TCACACCTAC CGAGTGATCG AGATCGTCGG GACCTCGCCC GACGGTGTCG 60ACGCGGNAAT CCAGGGCGGT CTGGCCCGAG CTGCGCAGAC CATGCGCGCG CTGGACTGGT 120TCGAAGTACA GTCAATTCGA GGCCACCTGG TCGACGGAGC GGTCGCGCAC TTCCAGGTGA 180CTATGAAAGT CGGCTTCCGC CTGGAGGATT CCTGAACCTT CAAGCGCGGC CGATAACTGA 240GGTGCATCAT TAAGCGACTT TTCCAGAACA TCCTGACGCG CTCGAAACGC GGTTCAGCCG 300ACGGTGGCTC CGCCGAGGCG CTGCCTCCAA AATCCCTGCG ACAATTCGTC GGCGG 355(2)SEQ ID NO:52的信息(ⅰ)序列特征(A)长度999碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:52:ATGCATCACC ATCACCATCA CATGCATCAG GTGGACCCCA ACTTGACACG TCGCAAGGGA 60CGATTGGCGG CACTGGCTAT CGCGGCGATG GCCAGCGCCA GCCTGGTGAC CGTTGCGGTG 120CCCGCGACCG CCAACGCCGA TCCGGAGCCA GCGCCCCCGG TACCCACAAC GGCCGCCTCG 180CCGCCGTCGA CCGCTGCAGC GCCACCCGCA CCGGCGACAC CTGTTGCCCC CCCACCACCG 240GCCGCCGCCA ACACGCCGAA TGCCCAGCCG GGCGATCCCA ACGCAGCACC TCCGCCGGCC 300GACCCGAACG CACCGCCGCC ACCTGTCATT GCCCCAAACG CACCCCAACC TGTCCGGATC 360GACAACCCGG TTGGAGGATT CAGCTTCGCG CTGCCTGCTG GCTGGGTGGA GTCTGACGCC 420GCCCACTTCG ACTACGGTTC AGCACTCCTC AGCAAAACCA CCGGGGACCC GCCATTTCCC 480GGACAGCCGC CGCCGGTGGC CAATGACACC CGTATCGTGC TCGGCCGGCT AGACCAAAAG 540CTTTACGCCA GCGCCGAAGC CACCGACTCC AAGGCCGCGG CCCGGTTGGG CTCGGACATG 600GGTGAGTTCT ATATGCCCTA CCCGGGCACC CGGATCAACC AGGAAACCGT CTCGCTCGAC 660GCCAACGGGG TGTCTGGAAG CGCGTCGTAT TACGAAGTCA AGTTCAGCGA TCCGAGTAAG 720CCGAACGGCC AGATCTGGAC GGGCGTAATC GGCTCGCCCG CGGCGAACGC ACCGGACGCC 780GGGCCCCCTC AGCGCTGGTT TGTGGTATGG CTCGGGACCG CCAACAACCC GGTGGACAAG 840GGCGCGGCCA AGGCGCTGGC CGAATCGATC CGGCCTTTGG TCGCCCCGCC GCCGGCGCCG 900GCACCGGCTC CTGCAGAGCC CGCTCCGGCG CCGGCGCCGG CCGGGGAAGT CGCTCCTACC 960CCGACGACAC CGACACCGCA GCGGACCTTA CCGGCCTGA999(2)SEQ ID NO:53的信息(ⅰ)序列特征(A)长度332氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:53:Met His His His His His His Met His Gln Val Asp Pro Asn Leu Thr1 5 10 15Arg Arg Lys Gly Arg Leu Ala Ala Leu Ala Ile Ala Ala Met Ala Ser20 25 30Ala Ser Leu Val Thr Val Ala Val Pro Ala Thr Ala Asn Ala Asp Pro35 40 45Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro Ser Thr50 55 60Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Ala Thr Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro65 70 75 80Ala Ala Ala Asn Thr Pro Asn Ala Gln Pro Gly Asp Pro Asn Ala Ala85 90 95Pro Pro Pro Ala Asp Pro Asn Ala Pro Pro Pro Pro Val Ile Ala Pro100 105 110Asn Ala Pro Gln Pro Val Arg Ile Asp Asn Pro Val Gly Gly Phe Ser115 120 125Phe Ala Leu Pro Ala Gly Trp Val Glu Ser Asp Ala Ala His Phe Asp130 135 140Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Pro Phe Pro145 150 155 160Gly Gln Pro Pro Pro Val Ala Asn Asp Thr Arg Ile Val Leu Gly Arg165 170 175Leu Asp Gln Lys Leu Tyr Ala Ser Ala Glu Ala Thr Asp Ser Lys Ala180 185 190Ala Ala Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu Phe Tyr Met Pro Tyr Pro195 200 205Gly Thr Arg Ile Asn Gln Glu Thr Val Ser Leu Asp Ala Asn Gly Val210 215 220Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Tyr Glu Val Lys Phe Ser Asp Pro Ser Lys225 230 235 240Pro Asn Gly Gln Ile Trp Thr Gly Val Ile Gly Ser Pro Ala Ala Asn245 250 255Ala Pro Asp Ala Gly Pro Pro Gln Arg Trp Phe Val Val Trp Leu Gly260 265 270Thr Ala Asn Asn Pro Val Asp Lys Gly Ala Ala Lys Ala Leu Ala Glu275 280 285Ser Ile Arg Pro Leu Val Ala Pro Pro Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro290 295 300Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Gly Glu Val Ala Pro Thr305 310 315 320Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gln Arg Thr Leu Pro Ala325 330(2)SEQ ID NO:54的信息(ⅰ)序列特征(A)长度20氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:54:Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Xaa Asn Tyr Gly Gln Val1 5 10 15Val Ala Ala Leu20(2)SEQ ID NO:55的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:55:
Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO:56的信息(ⅰ)序列特征(A)长度19氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:56:
Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys1 5 10 15Glu Gly Arg(2)SEQ ID NO:57的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:57:
Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO:58的信息(ⅰ)序列特征(A)长度14氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:58:
Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gln Gln Xaa Ala Val
1 5 10(2)SEQ ID NO:59的信息(ⅰ)序列特征(A)长度13氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:59:
Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro1 5 10(2)SEQ ID NO:60的信息(ⅰ)序列特征(A)长度17氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:60:
Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Ala Ala Ala Ma Pro Pro1 5 10 15Ala(2)SEQ ID NO:61的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:61:
Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO:62的信息(ⅰ)序列特征(A)长度30氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:62:
Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Gin Thr Ser1 5 10 15Leu Leu Asn Asn Leu Ala Asp Pro Asp Val Ser Phe Ala Asp20 25 30(2)SEQ ID NO:63的信息(ⅰ)序列特征(A)长度24氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:63:
Gly Cys Gly Asp Arg Ser Gly Gly Asn Leu Asp Gin Ile Arg Leu Arg1 5 10 15Arg Asp Arg Ser Gly Gly Asn Leu20(2)SEQ ID NO:64的信息(ⅰ)序列特征(A)长度187氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:64:
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(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:101:GATCGTACCC GTGCGAGTGC TCGGGCCGTT TGAGGATGGA GTGCACGTGT CTTTCGTGAT 60GGCATACCCA GAGATGTTGG CGGCGGCGGC TGACACCCTG CAGAGCATCG GTGCTACCAC 120TGTGGCTAGC AATGCCGCTG CGGCGGCCCC GACGACTGGG GTGGTGCCCC CCGCTGCCGA 180TGAGGTGTCG GCGCTGACTG CGGCGCACTT CGCCGCACAT GCGGCGATGT ATCAGTCCGT 240GAGCGCTCGG GCTGCTGCGA TTCATGACCA GTTCGTGGCC ACCCTTGCCA GCAGCGCCAG 300CTCGTATGCG GCCACTGAAG TCGCCAATGC GGCGGCGGCC AGCTAAGCCA GGAACAGTCG 360GCACGAGAAA CCACGAGAAA TAGGGACACG TAATGGTGGA TTTCGGGGCG TTACCACCGG 420AGATCAACTC CGCGAGGATG TACGCCGGCC CGGGTTCGGC CTCGCTGGTG GCCGCGGCTC 480AGATGTGGGA CAGCGTGGCG AGTGACCTGT TTTCGGCCGC GTCGGCGTTT CAGTCGGTGG 540TCTGGGGTCT GACGGTGGGG TCGTGGATAG GTTCGTCGGC GGGTCTGATG GTGGCGGCGG 600CCTCGCCGTA TGTGGCGTGG ATGAGCGTCA CCGCGGGGCA GGCCGAGCTG ACCGCCGCCC 660AGGTCCGGGT TGCTGCGGCG GCCTACGAGA CGGCGTATGG GCTGACGGTG CCCCCGCCGG 720TGATCGCCGA GAACCGTGCT GAACTGATGA TTCTGATAGC GACCAACCTC TTGGGGCAAA 780ACACCCCGGC GATCGCGGTC AACGAGGCCG AATACGGCGA GATGTGGGCC 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Asn Ser Ala Arg Met1 5 10 15Tyr Ala Gly Pro Gly Ser Ala Ser Leu Val Ala Ala Ala Lys Met Trp20 25 30Asp Ser Val Ala Ser Asp Leu Phe Ser Ala Ala Ser Ala Phe Gln Ser35 40 45Val Val Trp Gly Leu Thr Thr Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Ala Gly50 55 60Leu Met Val Ala Ala Ala Ser Pro Tyr Val Ala Trp Met Ser Val Thr65 70 75 80Ala Gly Gln Ala Glu Leu Thr Ala Ala Gln Val Arg Val Ala Ala Ala85 90 95Ala Tyr Glu Thr Ala Tyr Gly Leu Thr Val Pro Pro Pro Val Ile Ala100 105 110Glu Asn Arg Ala Glu Leu Met Ile Leu Ile Ala Thr Asn Leu Leu Gly115 120 125Gln Asn Thr Pro Ala Ile Ala Val Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met130 135 140Trp Ala Gln Asp Ala Ala Ala Met Phe Gly Tyr Ala Ala Thr Ala Ala145 150 155 160Thr Ala Thr Glu Ala Leu Leu Pro Phe Glu Asp Ala Pro Leu Ile Thr165 170 175Asn Pro Gly Gly Leu Leu Glu Gln Ala Val Ala Val Glu Glu Ala Ile180 185 190Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gln Leu Met Asn Asn Val Pro Gln Ala Leu195 200 205Gln Gln Leu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Ile Trp Pro Phe Asp Gln Leu210 215 220Ser Glu Leu Trp Lys Ala Ile Ser Pro His Leu Ser Pro Leu Ser Asn225 230 235 240Ile Val Ser Met Leu Asn Asn His Val Ser Met Thr Asn Ser Gly Val245 250 255Ser Met Ala Ser Thr Leu His Ser Met Leu Lys Gly Phe Ala Pro Ala260 265 270Ala Ala Gln Ala Val Glu Thr Ala Ala Gln Asn Gly Val Gln Ala Met275 280 285Ser Ser Leu Gly Ser Gln Leu Gly Ser Ser Leu Gly Ser Ser Gly Leu290 295 300Gly Ala Gly Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg Ala Ala Ser Val Gly Ser305 310 315 320Leu Ser Val Pro Gln Ala Trp Ala Ala Ala Asn Gln Ala Val Thr Pro325 330 335Ala Ala Arg Ala Leu Pro Leu Thr Ser Leu Thr Ser Ala Ala Gln Thr340 345 350Ala Pro Gly His Met Leu Gly Gly Leu Pro Leu Gly Gln Leu Thr Asn355 360 365Ser Gly Gly Gly Phe Gly Gly Val Ser Asn Ala Leu Arg Met Pro Pro370 375 380Arg Ala Tyr Val Met Pro Arg Val Pro Ala Ala Gly385 390 395(2)SEQ ID NO:107的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1616碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:107:CATCGGAGGG AGTGATCACC ATGCTGTGGC ACGCAATGCC ACCGGAGTAA ATACCGCACG 60GCTGATGGCC GGCGCGGGTC CGGCTCCAAT GCTTGCGGCG GCCGCGGGAT GGCAGACGCT 120TTCGGCGGCT CTGGACGCTC AGGCCGTCGA GTTGACCGCG CGCCTGAACT CTCTGGGAGA 180AGCCTGGACT GGAGGTGGCA GCGACAAGGC GCTTGCGGCT GCAACGCCGA TGGTGGTCTG 240GCTACAAACC GCGTCAACAC AGGCCAAGAC CCGTGCGATG CAGGCGACGG CGCAAGCCGC 300GGCATACACC CAGGCCATGG CCACGACGCC GTCGCTGCCG GAGATCGCCG CCAACCACAT 360CACCCAGGCC GTCCTTACGG CCACCAACTT CTTCGGTATC AACACGATCC CGATCGCGTT 420GACCGAGATG GATTATTTCA TCCGTATGTG GAACCAGGCA GCCCTGGCAA TGGAGGTCTA 480CCAGGCCGAG ACCGCGGTTA ACACGCTTTT CGAGAAGCTC GAGCCGATGG CGTCGATCCT 540TGATCCCGGC GCGAGCCAGA GCACGACGAA CCCGATCTTC GGAATGCCCT CCCCTGGCAG 600CTCAACACCG GTTGGCCAGT TGCCGCCGGC GGCTACCCAG ACCCTCGGCC AACTGGGTGA 660GATGAGCGGC CCGATGCAGC AGCTGACCCA GCCGCTGCAG CAGGTGACGT CGTTGTTCAG 720CCAGGTGGGC GGCACCGGCG GCGGCAACCC AGCCGACGAG GAAGCCGCGC AGATGGGCCT 780GCTCGGCACC AGTCCGCTGT CGAACCATCC GCTGGCTGGT GGATCAGGCC CCAGCGCGGG 840CGCGGGCCTG CTGCGCGCGG AGTCGCTACC TGGCGCAGGT GGGTCGTTGA CCCGCACGCC 900GCTGATGTCT CAGCTGATCG AAAAGCCGGT TGCCCCCTCG GTGATGCCGG CGGCTGCTGC 960CGGATCGTCG 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CTTGTCGTAG TCGGCCGCCA TGACAACCTC 180TCAGAGTGCG CTCAAACGTA TAAACACGAG AAAGGGCGAG ACCGACGGAA GGTCGAACTC 240GCCCGATCCC GTGTTTCGCT ATTCTACGCG AACTCGGCGT TGCCCTATGC GAACATCCCA 300GTGACGTTGC CTTCGGTCGA AGCCATTGCC TGACCGGCTT CGCTGATCGT CCGCGCCAGG 360TTCTGCAGCG CGTTGTTCAG CTCGGTAGCC GTGGCGTCCC ATTTTTGCTG GACACCCTGG 420TACGCCTCCG AA 432(2)SEQ ID NO:109的信息(ⅰ)序列特征(A)长度368氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:109:Met Leu Trp His Ala Met Pro Pro Glu Xaa Asn Thr Ala Arg Leu Met1 5 10 15Ala Gly Ala Gly Pro Ala Pro Met Leu Ala Ala Ala Ala Gly Trp Gln20 25 30Thr Leu Ser Ala Ala Leu Asp Ala Gln Ala Val Glu Leu Thr Ala Arg35 40 45Leu Asn Ser Leu Gly Glu Ala Trp Thr Gly Gly Gly Ser Asp Lys Ala50 55 60Leu Ala Ala Ala Thr Pro Met Val Val Trp Leu Gln Thr Ala Ser Thr65 70 75 80Gln Ala Lys Thr Arg Ala Met Gln Ala Thr Ala Gln Ala Ala Ala Tyr85 90 95Thr Gln Ala Met Ala Thr Thr Pro Ser Leu Pro Glu Ile Ala Ala Asn100 105 110His Ile Thr Gln Ala Val Leu Thr Ala Thr Asn Phe Phe Gly Ile Asn115 120 125Thr Ile Pro Ile Ala Leu Thr Glu Met Asp Tyr Phe Ile Arg Met Trp130 135 140Asn Gln Ala Ala Leu Ala Met Glu Val Tyr Gln Ala Glu Thr Ala Val145 150 155 160Asn Thr Leu Phe Glu Lys Leu Glu Pro Met Ala Ser Ile Leu Asp Pro165 170 175Gly Ala Ser Gln Ser Thr Thr Asn Pro Ile Phe Gly Met Pro Ser Pro180 185 190Gly Ser Ser Thr Pro Val Gly Gln Leu Pro Pro Ala Ala Thr Gln Thr195 200 205Leu Gly Gln Leu Gly Glu Met Ser Gly Pro Met Gln Gln Leu Thr Gln210 215 220Pro Leu Gln Gln Val Thr Ser Leu Phe Ser Gln Val Gly Gly Thr Gly225 230 235 240Gly Gly Asn Pro Ala Asp Glu Glu Ala Ala Gln Met Gly Leu Leu Gly245 250 255Thr Ser Pro Leu Ser Asn His Pro Leu Ala Gly Gly Ser Gly Pro Ser260 265 270Ala Gly Ala Gly Leu Leu Arg Ala Glu Ser Leu Pro Gly Ala Gly Gly275 280 285Ser Leu Thr Arg Thr Pro Leu Met Ser Gln Leu Ile Glu Lys Pro Val290 295 300Ala Pro Ser Val Met Pro Ala Ala Ala Ala Gly Ser Ser Ala Thr Gly305 310 315 320Gly Ala Ala Pro Val Gly Ala Gly Ala Met Gly Gln Gly Ala Gln Ser325 330 335Gly Gly Ser Thr Arg Pro Gly Leu Val Ala Pro Ala Pro Leu Ala Gln340 345 350Glu Arg Glu Glu Asp Asp Glu Asp Asp Trp Asp Glu Glu Asp Asp Trp355 360 365(2)SEQ ID NO:110的信息(ⅰ)序列特征(A)长度100氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:110:Met Ala Glu Met Lys Thr Asp Ala Ala Thr Leu Ala Gln Glu Ala Gly1 5 10 15Asn Phe Glu Arg Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gln Ile Asp Gln Val20 25 30Glu Ser Thr Ala Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly Ala Ala Gly35 40 45Thr Ala Ala Gln Ala Ala Val Val Arg Phe Gln Glu Ala Ala Asn Lys50 55 60Gln Lys Gln Glu Leu Asp Glu Ile Ser Thr Asn Ile Arg Gln Ala Gly65 70 75 80Val Gln Tyr Ser Arg Ala Asp Glu Glu Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser85 90 95Gln Met Gly Phe100(2)SEQ ID NO:111的信息(ⅰ)序列特征(A)长度396碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:111:GATCTCCGGC GACCTGAAAA CCCAGATCGA CCAGGTGGAG TCGACGGCAG GTTCGTTGCA 60GGGCCAGTGG CGCGGCGCGG CGGGGACGGC CGCCCAGGCC GCGGTGGTGC GCTTCCAAGA 120AGCAGCCAAT AAGCAGAAGC AGGAACTCGA CGAGATCTCG ACGAATATTC GTCAGGCCGG 180CGTCCAATAC TCGAGGGCCG ACGAGGAGCA GCAGCAGGCG CTGTCCTCGC AAATGGGCTT 240CTGACCCGCT AATACGAAAA GAAACGGAGC AAAAACATGA CAGAGCAGCA GTGGAATTTC 300GCGGGTATCG AGGCCGCGGC AAGCGCAATC CAGGGAAATG TCACGTCCAT TCATTCCCTC 360CTTGACGAGG GGAAGCAGTC CCTGACCAAG CTCGCA 396(2)SEQ ID NO:112的信息(ⅰ)序列特征(A)长度80氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:112:Ile Ser Gly Asp Leu Lys Thr Gln Ile Asp Gln Val Glu Ser Thr Ala1 5 10 15Gly Ser Leu Gln Gly Gln Trp Arg Gly Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gln20 25 30Ala Ala Val Val Arg Phe Gln Glu Ala Ala Asn Lys Gln Lys Gln Glu35 40 45Leu Asp Glu Ile Ser Thr Asn Ile Arg Gln Ala Gly Val Gln Tyr Ser50 55 60Arg Ala Asp Glu Glu Gln Gln Gln Ala Leu Ser Ser Gln Met Gly Phe65 70 75 80(2)SEQ ID NO:113的信息(ⅰ)序列特征(A)长度387碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:113:GTGGATCCCG ATCCCGTGTT TCGCTATTCT ACGCGAACTC GGCGTTGCCC TATGCGAACA 60TCCCAGTGAC GTTGCCTTCG GTCGAAGCCA TTGCCTGACC GGCTTCGCTG ATCGTCCGCG 120CCAGGTTCTG CAGCGCGTTG TTCAGCTCGG TAGCCGTGGC GTCCCATTTT TGCTGGACAC 180CCTGGTACGC CTCCGAACCG CTACCGCCCC AGGCCGCTGC GAGCTTGGTC AGGGACTGCT 240TCCCCTCGTC AAGGAGGGAA TGAATGGACG TGACATTTCC CTGGATTGCG CTTGCCGCGG 300CCTCGATACC CGCGAAATTC CACTGCTGCT CTGTCATGTT TTTGCTCCGT TTCTTTTCGT 360ATTAGCGGGT CAGAAGCCCA TTTGCGA 387(2)SEQ ID NO:114的信息(ⅰ)序列特征(A)长度272碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:114:CGGCACGAGG ATCTCGGTTG GCCCAACGGC GCTGGCGAGG GCTCCGTTCC GGGGGCGAGC 60TGCGCGCCGG ATGCTTCCTC TGCCCGCAGC CGCGCCTGGA TGGATGGACC AGTTGCTACC 120TTCCCGACGT TTCGTTCGGT GTCTGTGCGA TAGCGGTGAC CCCGGCGCGC ACGTCGGGAG 180TGTTGGGGGG CAGGCCGGGT CGGTGGTTCG GCCGGGGACG CAGACGGTCT GGACGGAACG 240GGCGGGGGTT CGCCGATTGG CATCTTTGCC CA 272(2)SEQ ID NO:115的信息(ⅰ)序列特征(A)长度20氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:115:
Asp Pro Val Asp Ala Val Ile Asn Thr Thr Cys Asn Tyr Gly Gln Val1 5 10 15Val Ala Ala Leu20(2)SEQ ID NO:116的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:116:
Ala Val Glu Ser Gly Met Leu Ala Leu Gly Thr Pro Ala Pro Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO:117的信息(ⅰ)序列特征(A)长度19氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:117:
Ala Ala Met Lys Pro Arg Thr Gly Asp Gly Pro Leu Glu Ala Ala Lys1 5 10 15Glu Gly Arg(2)SEQ ID NO:118的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:118:
Tyr Tyr Trp Cys Pro Gly Gln Pro Phe Asp Pro Ala Trp Gly Pro1 5 10 15(2)SEQ ID NO:119的信息(ⅰ)序列特征(A)长度14氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:119:
Asp Ile Gly Ser Glu Ser Thr Glu Asp Gln Gln Xaa Ala Val1 5 10(2)SEQ ID NO:120的信息(ⅰ)序列特征(A)长度13氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:120:
Ala Glu Glu Ser Ile Ser Thr Xaa Glu Xaa Ile Val Pro1 5 10(2)SEQ ID NO:121的信息(ⅰ)序列特征(A)长度17氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:121:
Asp Pro Glu Pro Ala Pro Pro Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro1 5 10 15Ser(2)SEQ ID NO:122的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:122:
Ala Pro Lys Thr Tyr Xaa Glu Glu Leu Lys Gly Thr Asp Thr Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO:123的信息(ⅰ)序列特征(A)长度30氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:123:
Asp Pro Ala Ser Ala Pro Asp Val Pro Thr Ala Ala Gln Leu Thr Ser1 5 10 15Leu Leu Asn Ser Leu Ala Asp Pro Asn Val Ser Phe Ala Asn20 25 30(2)SEQ ID NO:124的信息(ⅰ)序列特征(A)长度22氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:124:
Asp Pro Pro Asp Pro His Gln Xaa Asp Met Thr Lys Gly Tyr Tyr Pro1 5 10 15Gly Gly Arg Arg Xaa Phe20(2)SEQ ID NO:125的信息(ⅰ)序列特征(A)长度7氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:125:
Asp Pro Gly Tyr Thr Pro Gly
1 5(2)SEQ ID NO:126的信息(ⅰ)序列特征(A)长度10氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅸ)特征(D)其它信息/注意=″第二个残基可以是Pro或Thr″(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:126:
Xaa Xaa Gly Phe Thr Gly Pro Gln Phe Tyr1 5 10(2)SEQ ID NO:127的信息(ⅰ)序列特征(A)长度9氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅸ)特征(D)其它信息/注意=″第三个残基可以是Gln或Leu″(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:127Xaa Pro Xaa Val Thr Ala Tyr Ala Gly1 5(2)SEQ ID NO:128的信息(ⅰ)序列特征(A)长度9氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:128:
Xaa Xaa Xaa Glu Lys Pro Phe Leu Arg1 5(2)SEQ ID NO:129的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:129:
Xaa Asp Ser Glu Lys Ser Ala Thr Ile Lys Val Thr Asp Ala Ser1 5 10 15(2)SEQ ID NO:130的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:130:
Ala Gly Asp Thr Xaa Ile Tyr Ile Val Gly Asn Leu Thr Ala Asp1 5 10 15(2)SEQ ID NO:131的信息(ⅰ)序列特征(A)长度15氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:131:
Ala Pro Glu Ser Gly Ala Gly Leu Gly Gly Thr Val Gln Ala Gly1 5 10 15(2)SEQ ID NO:132的信息(ⅰ)序列特征(A)长度21氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:132:
Xaa Tyr Ile Ala Tyr Xaa Thr Thr Ala Gly Ile Val Pro Gly Lys Ile1 5 10 15Asn Val His Leu Val20(2)SEQ ID NO:133的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度882碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型DNA(基因组)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:133:GCAACGCTGT CGTGGCCTTT GCGGTGATCG GTTTCGCCTC GCTGGCGGTG GCGGTGGCGG 60TCACCATCCG ACCGACCGCG GCCTCAAAAC CGGTAGAGGG ACACCAAAAC GCCCAGCCAG 120GGAAGTTCAT GCCGTTGTTG CCGACGCAAC AGCAGGCGCC GGTCCCGCCG CCTCCGCCCG 180ATGATCCCAC CGCTGGATTC CAGGGCGGCA CCATTCCGGC TGTACAGAAC GTGGTGCCGC 240GGCCGGGTAC CTCACCCGGG GTGGGTGGGA CGCCGGCTTC GCCTGCGCCG GAAGCGCCGG 300CCGTGCCCGG TGTTGTGCCT GCCCCGGTGC CAATCCCGGT CCCGATCATC ATTCCCCCGT 360TCCCGGGTTG GCAGCCTGGA ATGCCGACCA TCCCCACCGC ACCGCCGACG ACGCCGGTGA 420CCACGTCGGC GACGACGCCG CCGACCACGC CGCCGACCAC GCCGGTGACC ACGCCGCCAA 480CGACGCCGCC GACCACGCCG GTGACCACGC CGCCAACGAC GCCGCCGACC ACGCCGGTGA 540CCACGCCACC AACGACCGTC GCCCCGACGA CCGTCGCCCC GACGACGGTC GCTCCGACCA 600CCGTCGCCCC GACCACGGTC GCTCCAGCCA CCGCCACGCC GACGACCGTC GCTCCGCAGC 660CGACGCAGCA GCCCACGCAA CAACCAACCC AACAGATGCC AACCCAGCAG CAGACCGTGG 720CCCCGCAGAC GGTGGCGCCG GCTCCGCAGC CGCCGTCCGG TGGCCGCAAC GGCAGCGGCG 780GGGGCGACTT ATTCGGCGGG TTCTGATCAC GGTCGCGGCT TCACTACGGT CGGAGGACAT 840GGCCGGTGAT GCGGTGACGG TGGTGCTGCC CTGTCTCAAC GA882(2) SEQ ID NO:134的信息(ⅰ)序列特征(A)长度815碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型DNA(基因组)(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:134:CCATCAACCA ACCGCTCGCG CCGCCCGCGC CGCCGGATCC GCCGTCGCCG CCACGCCCGC 60CGGTGCCTCC GGTGCCCCCG TTGCCGCCGT CGCCGCCGTC GCCGCCGACC GGCTGGGTGC 120CTAGGGCGCT GTTACCGCCC TGGTTGGCGG GGACGCCGCC GGCACCACCG GTACCGCCGA 180TGGCGCCGTT GCCGCCGGCG GCACCGTTGC CACCGTTGCC ACCGTTGCCA CCGTTGCCGA 240CCAGCCACCC GCCGCGACCA CCGGCACCGC CGGCGCCGCC CGCACCGCCG GCGTGCCCGT 300TCGTGCCCGT ACCGCCGGCA CCGCCGTTGC CGCCGTCACC GCCGACGGAA CTACCGGCGG 360ACGCGGCCTG CCCGCCGGCG CCGCCCGCAC CGCCATTGGC ACCGCCGTCA CCGCCGGCTG 420GGAGTGCCGC GATTAGGGCA CTGACCGGCG CAACCAGCGC AAGTACTCTC GGTCACCGAG 480CACTTCCAGA CGACACCACA GCACGGGGTT GTCGGCGGAC TGGGTGAAAT GGCAGCCGAT 540AGCGGCTAGC TGTCGGCTGC GGTCAACCTC GATCATGATG TCGAGGTGAC CGTGACCGCG 600CCCCCCGAAG GAGGCGCTGA ACTCGGCGTT GAGCCGATCG GCGATCGGTT GGGGCAGTGC 660CCAGGCCAAT ACGGGGATAC CGGGTGTCNA AGCCGCCGCG 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(A)长度311氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:183:Val Arg Cys Gly Thr Leu Val Pro Val Pro Met Val Glu Phe Leu Thr1 5 10 15Ser Thr Asn Ala Pro Ser Leu Pro Ser Ala Tyr Ala Glu Val Asp Lys20 25 30Leu Ile Gly Leu Pro Ala Gly Thr Ala Lys Arg Trp Ile Asn Gly Tyr35 40 45Glu Arg Gly Gly Lys Asp His Pro Pro Ile Leu Arg Val Thr Pro Gly50 55 60Ala Thr Pro Trp Val Thr Trp Gly Glu Phe Val Glu Thr Arg Met Leu65 70 75 80Ala Glu Tyr Arg Asp Arg Arg Lys Val Pro Ile Val Arg Gln Arg Ala85 90 95Ala Ile Glu Glu Leu Arg Ala Arg Phe Asn Leu Arg Tyr Pro Leu Ala100 105 110His Leu Arg Pro Phe Leu Ser Thr His Glu Arg Asp Leu Thr Met Gly115 120 125Gly Glu Glu Ile Gly Leu Pro Asp Ala Glu Val Thr Ile Arg Thr Gly130 135 140Gln Ala Leu Leu Gly Asp Ala Arg Trp Leu Ala Ser Leu Val Pro Asn145 150 155 160Ser Ala Arg Gly Ala Thr Leu Arg Arg Leu Gly Ile Thr Asp Val Ala165 170 175Asp Leu Arg Ser Ser Arg Glu Val Ala Arg Arg Gly Pro Gly Arg Val180 185 190Pro Asp Gly Ile Asp Val His Leu Leu Pro Phe Pro Asp Leu Ala Asp195 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(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:205:GGATATCTGC AGAATTCAGG TTTAAAGCCC ATTTGCGA 38(2)SEQ ID NO:206的信息(ⅰ)序列特征(A)长度30碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:206:CCGCATGCGA GCCACGTGCC CACAACGGCC 30(2)SEQ ID NO:207的信息(ⅰ)序列特征(A)长度37碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:207:CTTCATGGAA TTCTCAGGCC GGTAAGGTCC GCTGCGG 37(2)SEQ ID NO:208的信息(ⅰ)序列特征(A)长度7676碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:208:TGGCGAATGG GACGCGCCCT GTAGCGGCGC ATTAAGCGCG GCGGGTGTGG TGGTTACGCG 60CAGCGTGACC GCTACACTTG CCAGCGCCCT AGCGCCCGCT CCTTTCGCTT TCTTCCCTTC 120CTTTCTCGCC ACGTTCGCCG GCTTTCCCCG TCAAGCTCTA AATCGGGGGC TCCCTTTAGG 180GTTCCGATTT AGTGCTTTAC GGCACCTCGA CCCCAAAAAA CTTGATTAGG GTGATGGTTC 240ACGTAGTGGG CCATCGCCCT GATAGACGGT TTTTCGCCCT TTGACGTTGG AGTCCACGTT 300CTTTAATAGT GGACTCTTGT TCCAAACTGG AACAACACTC AACCCTATCT CGGTCTATTC 360TTTTGATTTA TAAGGGATTT TGCCGATTTC GGCCTATTGG TTAAAAAATG AGCTGATTTA 420ACAAAAATTT AACGCGAATT TTAACAAAAT ATTAACGTTT ACAATTTCAG GTGGCACTTT 480TCGGGGAAAT GTGCGCGGAA CCCCTATTTG TTTATTTTTC TAAATACATT 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(A)长度219碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:213:ACACGGTCGA ACTCGACGAG CCCCTCGTGG AGGTGTCGAC CGACAAGGTC GACACCGAAA 60TCCCTCGCCG GCCGCGGGTG TGCTGACCAA GATCATCGCC CAAGAAGATG ACACGGTCGA120GGTCGGCGGC GAGCTCTCTG TCATTGGCGA CGCCCATGAT GCCGGCGAGG CCGCGGTCCC180GGCACCCCAG AAAGTCTCTG CCGGCCCAAC CCGAATCCA 219(2)SEQ ID NO:214的信息(ⅰ)序列特征(A)长度342碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:214:TCGCTGCCGA CATCGGCGCC GCGCCCGCCC CCAAGCCCGC ACCCAAGCCC GTCCCCGAGC 60CAGCGCCGAC GCCGAAGGCC GAACCCGCAC CATCGCCGCC GGCGGCCCAG CCAGCCGGTG120CGGCCGAGGG CGCACCGTAC GTGACGCCGC TGGTGCGAAA GCTGGCGTCG GAAAACAACA180TCGACCTCGC CGGGGTGACC GGCACCGGAG TGGGTGGTCG CATCCGCAAA CAGGATGTGC240TGGCCGCGGC TGAACAAAAG AAGCGGGCGA AAGCACCGGC GCCGGCCGCC CAGGCCGCCG300CCGCGCCGGC CCCGAAAGCG CCGCCTGAAG ATCCGATGCC GC 342(2)SEQ ID NO:215的信息(ⅰ)序列特征(A)长度515碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:215:GGGTCTTGGT CAGTATCAGC GCCGACGAGG ACGCCACGGT GCCCGTCGGC GGCGAGTTGG 60CCCGGATCGG TGTCGCTGCC GACATCGGCG CCGCGCCCGC CCCCAAGCCC GCACCCAAGC120CCGTCCCCGA GCCAGCGCCG ACGCCGAAGG CCGAACCCGC ACCATCGCCG CCGGCGGCCC180AGCCAGCCGG TGCGGCCGAG GGCGCACCGT ACGTGACGCC GCTGGTGCGA AAGCTGGCGT240CGGAAAACAA CATCGACCTC GCCGGGGTGA CCGGCACCGG AGTGGGTGGT CGCATCCGCA300AACAGGATGT GCTGGCCGCG GCTGAACAAA AGAAGCGGGC GAAAGCACCG GCGCCCTGAG360CGCTTCATCA CCCGGTTAAC CAGCTTGCCC CAGAAGCCGG CTTCGACCTC TTCGCGGGTC420TTGGTCCGCT GCAGGCGGTC GGCGAGCCAG TTCAGGTTAG GCGGCCGAAA TCTTCCAGTT480CGCCAGGAAG GGCACCCGGA ACAGGGTCCG CACCC 515(2)SEQ ID NO:216的信息(ⅰ)序列特征(A)长度557碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:216:CCGACCCCAA GGTGCAGATT CAACAGGCCA TTGAGGAAGC ACAGCGCACC CACCAAGCGC 60TGACTCAACA GGCGGCGCAA GTGATCGGTA ACCAGCGTCA ATTGGAGATG CGACTCAACC120GACAGCTGGC GGACATCGAA AAGCTTCAGG TCAATGTGCG CCAAGCCCTG ACGCTGGCCG180ACCAGGCCAC CGCCGCCGGA GACGCTGCCA AGGCCACCGA ATACAACAAC GCCGCCGAGG240CGTTCGCAGC CCAGCTGGTG ACCGCCGAGC AGAGCGTCGA AGACCTCAAG ACGCTGCATG300ACCAGGCGCT TAGCGCCGCA GCTCAGGCCA AGAAGGCCGT CGAACGAAAT GCGATGGTGC360TGCAGCAGAA GATCGCCGAG CGAACCAAGC TGCTCAGCCA GCTCGAGCAG GCGAAGATGC420AGGAGCAGGT CAGCGCATCG TTGCGGTCGA TGAGTGAGCT CGCCGCGCCA GGCAACACGC480CGAGCCTCGA CGAGGTGCGC GACAAGATCG AGCGTCGCTA CGCCAACGCG ATCGGTTCGG540CTGAACTTGC CGAGAGT 557(2)SEQ ID NO:217的信息(ⅰ)序列特征(A)长度223碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:217:CAGGATAGGT TTCGACATCC ACCTGGGTTC CGCACCCGGT GCGCGACCGT GTGATAGGCC 60AGAGGTGGAC CTGCGCCGAC CGACGATCGA TCGAGGAGTC AACAGAAATG GCCTTCTCCG120TCCAGATGCC GGCACTCGGT GAGAGCGTCA CCGAGGGGAC GGTTACCCGC TGGCTCAAAC180AGGAAGGCGA CACGGTCGAA CTCGACGAGC CCCTCGTGGA GGT 223(2)SEQ ID NO:218的信息(ⅰ)序列特征(A)长度578碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:218:AAGAAGTACA TCTGCCGGTC GATGTCGGCG AACCACGGCA GCCAACCGGC GCAGTAGCCG 60ACCAGGACCA CCGCATAACG CCAGTCCCGG CGCACAAACA TACGCCACCC CGCGTATGCC120AGGACTGGCA CCGCCAGCCA CCACATCGCG GGCGTGCCGA CCAGCATCTC GGCCTTGACG180CACGACTGTG CGCCGCAGCC TGCAACGTCT TGCTGGTCGA TGGCGTACAG CACCGGCCGC240AACGACATGG GCCAGGTCCA CGGTTTGGAT TCCCAAGGGT GGTAGTTGCC TGCGGAATTC300GTCAGGCCCG CGTGGAAGTG GAACGCTTTG GCGGTGTATT GCCAGAGCGA GCGCACGGCG360TCGGGCAGCG GAACAACCGA GTTGCGACCG ACCGCTTGAC CGACCGCATG CCGATCGATC420GCGGTCTCGG ACGCGAACCA CGGAGCGTAG GTGGCCAGAT AGACCGCGAA CGGGATCAAC480CCCAGCGCAT ACCCGCTGGG AAGCACGTCA CGCCGCACTG TTCCCAGCCA CGGTCTTTGC540ACTTGGTATG AACGTCGCGC CGCCACGTCA ACGCCAGC578(2)SEQ ID NO:219的信息(ⅰ)序列特征(A)长度484碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:219:ACAACGATCG ATTGATATCG ATGAGAGACG GAGGAATCGT GGCCCTTCCC CAGTTGACCG 60ACGAGCAGCG CGCGGCCGCG TTGGAGAAGG CTGCTGCCGC ACGTCGAGCG CGAGCAGAGC120TCAAGGATCG GCTCAAGCGT GGCGGCACCA ACCTCACCCA GGTCCTCAAG GACGCGGAGA180GCGATGAAGT CTTGGGCAAA ATGAAGGTGT CTGCGCTGCT TGAGGCCTTG CCAAAGGTGG240GCAAGGTCAA GGCGCAGGAG ATCATGACCG AGCTGGAAAT TGCGCCCCAC CCCGCCGCCT300TCGTGGCCTC GGTGACCGTC AGCGCAAGGC CCTGCTGGAA AAGTTCGGCT CCGCCTAACC360CCGCCGGCCG ACGATGCGGG CCGGAAGGCC TGTGGTGGGC GTACCCCCGC ATACGGGGGA420GAAGCGGCCT GACAGGGCCA GCTCACAATT CAGGCCGAAC GCCCCGGTGG GGGGGAACCC480GCCC 484(2)SEQ ID NO:220的信息(ⅰ)序列特征(A)长度537碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:220:AGGACTGGCA CCGCCAGCCA CCACATCGCG GGCGTGCCGA CCAGCATCTC GGCCTTGACG 60CACGACTGTG CGCCGCAGCC TGCAACGTCT TGCTGGTCGA TGGCGTACAG CACCGGCCGC120AACGACATGG GCCAGGTCCA CGGTTTGGAT TCCCAAGGGT GGTAGTTGCC TGCGGAATTC180GTCAGGCCCG CGTGGAAGTG GAACGCTTTG GCGGTGTAGT GCCAGAGCGA GCGCACGGCG240TCGGGCAGCG GAACAACCGA GTTGCGACCG ACCGCTTGAC CGACCGCATG CCGATCGATC300GCGGTCTCGG ACGCGAACCA CGGAGCGTAG GTGGCCAGAT AGACCGCGAA CGGGATCAAC360CCCAGCGCAT ACCCGCTGGG AAGCACGTCA CGCCGCACTG TCCCCAGCCA CGGTCTTTGC420ACTTGGTACT GACGTCGCGC CGCCACGTCG AACGCCAGCG CCATCGCGCC GAAGAACAGC480ACGAAGTACA CGCCGGACCA CTTGGTGGCG CAAGCCAATC CCAAGCAGCA CCCCGGC 537(2)SEQ ID NO:221的信息(ⅰ)序列特征(A)长度135氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:221:Gly Gly Ala Ala Ala Gly Gln Gln Ser Asp Val His Pro Phe Ala Asn1 5 10 15Leu lle Ala Val Asp Asp Glu Arg Ala Glu Arg Arg Asp Asp Glu Glu20 25 30Arg Gln Glu Ala Val Gln Gln Arg Gly Pro Arg Gly Asp Glu Ala Asp35 40 45Pro Val Ala Asp Gln Gln His Pro Gly Asp Gly Ala Asp Gln Cys Arg50 55 60Pro Ala Asp Pro Pro His Asp Pro His His Gln Arg His Gln Asp His65 70 75 80Thr Gln Gln Gly Ala Gly Glu Pro Pro Ala Glu Ser Val Val Thr Glu85 90 95Asp Gly Leu Pro Asp Arg Asp Gln Leu Leu Thr Asp Arg Arg Val Asn100 105 110His Gln Ala Val Pro Gly Val Val Phe His Pro Met Val Val Gln His115 120 125Leu Pro Gly Leu Ala Val Arg130 135(2)SEQ ID NO:222的信息(ⅰ)序列特征(A)长度156氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:222:Gln Lys Tyr Gly Gly Ser Ser Val Ala Asp Ala Glu Arg Ile Arg Arg1 5 10 15Val Ala Glu Arg Ile Val Ala Thr Lys Lys Gln Gly Asn Asp Val Val
20 25 30Val Val Val Ser Ala Met Gly Asp Thr Thr Asp Asp Leu Leu Asp Leu35 40 45Ala Gln Gln Val Cys Pro Ala Pro Pro Pro Arg Glu Leu Asp Met Leu50 55 60Leu Thr Ala Gly Glu Arg Ile Ser Asn Ala Leu Val Ala Met Ala Ile65 70 75 80Glu Ser Leu Gly Ala His Ala Arg Ser Phe Thr Gly Ser Gln Ala Gly85 90 95Val Ile Thr Thr Gly Thr His Gly Ash Ala Lys Ile Ile Asp Val Thr100 105 110Pro Gly Arg Leu Gln Thr Ala Leu Glu Glu Gly Arg Val Val Leu Val115 120 125Ala Gly Phe Gln Gly Val Ser Gln Asp Thr Lys Asp Val Thr Thr Leu130 135 140Gly Arg Gly Gly Ser Asp Thr Thr Ala Val Ala Met145 150 155(2)SEQ ID NO:223的信息(ⅰ)序列特征(A)长度92氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:223:Pro Ala Tyr Pro Ala Gly Thr Asn Asn Asp Arg Leu Ile Ser Met Arg1 5 10 15Asp Gly Gly Ile Val Ala Leu Pro Gln Leu Thr Asp Glu Gln Arg Ala20 25 30Ala Ala Leu Glu Lys Ala Ala Ala Ala Arg Arg Ala Arg Ala Glu Leu35 40 45Lys Asp Arg Leu Lys Arg Gly Gly Thr Asn Leu Thr Gln Val Leu Lys50 55 60Asp Ala Glu Ser Asp Glu Val Leu Gly Lys Met Lys Val Ser Ala Leu65 70 75 80Leu Glu Ala Leu Pro Lys Val Gly Lys Val Gln Ala85 90(2)SEQ ID NO:224的信息(ⅰ)序列特征(A)长度72氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:224:Thr Val Glu Leu Asp Glu Pro Leu Val Glu Val Ser Thr Asp Lys Val1 5 10 15Asp Thr Glu Ile Pro Ser Pro Ala Ala Gly Val Leu Thr Lys Ile Ile20 25 30Ala Gln Glu Asp Asp Thr Val Glu Val Gly Gly Glu Leu Ser Val Ile35 40 45Gly Asp Ala His Asp Ala Gly Glu Ala Ala Val Pro Ala Pro Gln Lys50 55 60Val Ser Ala Gly Pro Thr Arg Ile65 70(2)SEQ ID NO:225的信息(ⅰ)序列特征(A)长度113氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:225:Ala Ala Asp Ile Gly Ala Ala Pro Ala Pro Lys Pro Ala Pro Lys Pro1 5 10 15Val Pro Glu Pro Ala Pro Thr Pro Lys Ala Glu Pro Ala Pro Ser Pro20 25 30Pro Ala Ala Gln Pro Ala Gly Ala Ala Glu Gly Ala Pro Tyr Val Thr35 40 45Pro Leu Val Arg Lys Leu Ala Ser Glu Asn Asn Ile Asp Leu Ala Gly50 55 60Val Thr Gly Thr Gly Val Gly Gly Arg Ile Arg Lys Gln Asp Val Leu65 70 75 80Ala Ala Ala Glu Gln Lys Lys Arg Ala Lys Ala Pro Ala Pro Ala Ala85 90 95Gln Ala Ala Ala Ala Pro Ala Pro Lys Ala Pro Pro Glu Asp Pro Met100 105 110Pro(2)SEQ ID NO:226的信息(ⅰ)序列特征(A)长度118氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:226:Val Leu Val Ser Ile Ser Ala Asp Glu Asp Ala Thr Val Pro Val Gly1 5 10 15Gly Glu Leu Ala Arg Ile Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Ala Pro20 25 30Ala Pro Lys Pro Ala Pro Lys Pro Val Pro Glu Pro Ala Pro Thr Pro35 40 45Lys Ala Glu Pro Ala Pro Ser Pro Pro Ala Ala Gln Pro Ala Gly Ala50 55 60Ala Glu Gly Ala Pro Tyr Val Thr Pro Leu Val Arg Lys Leu Ala Ser65 70 75 80Glu Asn Asn Ile Asp Leu Ala Gly Val Thr Gly Thr Gly Val Gly Gly85 90 95Arg Ile Arg Lys Gln Asp Val Leu Ala Ala Ala Glu Gln Lys Lys Arg100 105 110Ala Lys Ala Pro Ala Pro115(2)SEQ ID NO:227的信息(ⅰ)序列特征(A)长度185氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:227:Asp Pro Lys Val Gln Ile Gln Gln Ala Ile Glu Glu Ala Gln Arg Thr15 10 15His Gln Ala Leu Thr Gln Gln Ala Ala Gln Val Ile Gly Asn Gln Arg20 25 30Gln Leu Glu Met Arg Leu Asn Arg Gln Leu Ala Asp Ile Glu Lys Leu35 40 45Gln Val Asn Val Arg Gln Ala Leu Thr Leu Ala Asp Gln Ala Thr Ala50 55 60Ala Gly Asp Ala Ala Lys Ala Thr Glu Tyr Asn Asn Ala Ala Glu Ala65 70 75 80Phe AIa Ala Gln Leu Val Thr Ala Glu Gln Ser Val Glu Asp Leu Lys85 90 95Thr Leu His Asp Gln Ala Leu Ser Ala Ala Ala Gln Ala Lys Lys Ala100 105 110Val Glu Arg Asn Ala Met Val Leu Gln Gln Lys Ile Ala Glu Arg Thr115 120 125Lys Leu Leu Ser Gln Leu Glu Gln Ala Lys Met Gln Glu Gln Val Ser130 135 140Ala Ser Leu Arg Ser Met Ser Glu Leu Ala Ala Pro Gly Asn Thr Pro145 150 155 160Ser Leu Asp Glu Val Arg Asp Lys Ile Glu Arg Arg Tyr Ala Asn Ala165 170 175Ile Gly Ser Ala Glu Leu Ala Glu Ser180 185(2)SEQ ID NO:228的信息(ⅰ)序列特征(A)长度71氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:228:Val Ser Thr Ser Thr Trp Val Pro His Pro Val Arg Asp Arg Val Ile1 5 10 15Gly Gln Arg Trp Thr Cys Ala Asp Arg Arg Ser Ile Glu Glu Ser Thr20 25 30Glu Met Ala Phe Ser Val Gln Met Pro Ala Leu Gly Glu Ser Val Thr35 40 45Glu Gly Thr Val Thr Arg Trp Leu Lys Gln Glu Gly Asp Thr Val Glu50 55 60Leu Asp Glu Pro Leu Val Glu65 70(2)SEQ ID NO:229的信息(ⅰ)序列特征(A)长度182氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:229:Glu Val His Leu Pro Val Asp Val Gly Glu Pro Arg Gln Pro Thr Gly1 5 10 15Ala Val Ala Asp Gln Asp His Arg Ile Thr Pro Val Pro Ala His Lys20 25 30His Thr Pro Pro Arg Val Cys Gln Asp Trp His Arg Gln Pro Pro His35 40 45Arg Gly Arg Ala Asp Gln His Leu Gly Leu Asp Ala Arg Leu Cys Ala50 55 60Ala Ala Cys Asn Val Leu Leu Val Asp Gly Val Gln His Arg Pro Gln65 70 75 80Arg His Gly Pro Gly Pro Arg Phe Gly Phe Pro Arg Val Val Val Ala85 90 95Cys Gly Ile Arg Gln Ala Arg Val Glu Val Glu Arg Phe Gly Gly Val100 105 110Leu Pro Glu Arg Ala His Gly Val Gly Gln Arg Asn Asn Arg Val Ala115 120 125Thr Asp Arg Leu Thr Asp Arg Met Pro Ile Asp Arg Gly Leu Gly Arg130 135 140Glu Pro Arg Ser Val Gly Gly Gln Ile Asp Arg Glu Arg Asp Gln Pro145 150 155 160Gln Arg Ile Pro Ala Gly Lys His Val Thr Pro His Cys Ser Gln Pro165 170 175Arg Ser Leu His Leu Val180(2)SEC)ID N0:230的信息(ⅰ)序列特征(A)长度160氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:230:Asn Asp Arg Leu Ile Ser Met Arg Asp Gly Gly Ile Val Ala Leu Pro1 5 10 15Gln Leu Thr Asp Glu Gln Arg Ala Ala Ala Leu Glu Lys Ala Ala Ala20 25 30Ala Arg Arg Ala Arg Ala Glu Leu Lys Asp Arg Leu Lys Arg Gly Gly35 40 45Thr Asn Leu Thr Gln Val Leu Lys Asp Ala Glu Ser Asp Glu Val Leu50 55 60Gly Lys Met Lys Val Ser Ala Leu Leu Glu Ala Leu Pro Lys Val Gly65 70 75 80Lys Val Lys Ala Gln Glu Ile Met Thr Glu Leu Glu Ile Ala Pro His85 90 95Pro Ala Ala Phe Val Ala Ser Val Thr Val Ser Ala Arg Pro Cys Trp100 105 110Lys Ser Ser Ala Pro Pro Asn Pro Ala Gly Arg Arg Cys Gly Pro Glu115 120 125Gly Leu Trp Trp Ala Tyr Pro Arg Ile Arg Gly Arg Ser Gly Leu Thr130 135 140Gly Pro Ala His Asn Ser Gly Arg Thr Pro Arg Trp Gly Gly Thr Arg145 150 155 160(2)SEQ ID NO:231的信息(ⅰ)序列特征(A)长度178氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:231:Asp Trp His Arg Gln Pro Pro His Arg Gly Arg Ala Asp Gln His Leu1 5 10 15Gly Leu Asp Ala Arg Leu Cys Ala Ala Ala Cys Asn Val Leu Leu Val20 25 30Asp Gly Val Gln His Arg Pro Gin Arg His Gly Pro Gly Pro Arg Phe35 40 45Gly Phe Pro Arg Val Val Val Ala Cys Gly Ile Arg Gln Ala Arg Val50 55 60Glu Val Glu Arg Phe Gly Gly Val Val Pro Glu Arg Ala His Gly Val65 70 75 80Gly Gln Arg Asn Asn Arg Val Ala Thr Asp Arg Leu Thr Asp Arg Met85 90 95Pro Ile Asp Arg Gly Leu Gly Arg Glu Pro Arg Ser Val Gly Gly Gln100 105 110Ile Asp Arg Glu Arg Asp Gln Pro Gln Arg Ile Pro Ala Gly Lys His115 120 125Val Thr Pro His Cys Pro Gln Pro Arg Ser Leu His Leu Val Leu Thr130 135 140Ser Arg Arg His Val Glu Arg Gln Arg His Arg Ala Glu Glu Gln His145 150 155 160Glu Val His Ala Gly Pro Leu Gly Gly Ala Ser Gln Ser Gln Ala Ala165 170 175Pro Arg(2)SEQ ID NO:232的信息(ⅰ)序列特征(A)长度271碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:232:ATGCCAAGCC GGTGCTGATG CCCGAGCTCG GCGAATCGGT GACCGAGGGG ACCGTCATTC 60GTTGGCTGAA GAAGATCGGG GATTCGGTTC AGGTTGACGA GCCACTCGTG GAGGTGTCCA120CCGACAAGGT GGACACCGAG ATCCCGTCCC CGGTGGCTGG GGTCTTGGTC AGTATCAGCG180CCGACGAGGA CGCCACGGTG CCCGTCGGCG GCGAGTTGGC CCGGATCGGT GTCGCTGCCG240AGATCGGCGC CGCGCCCGCC CCCAAGCCCC C 271(2)SEQ ID NO:233的信息(ⅰ)序列特征
(A)长度89氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:233:Ala Lys Pro Val Leu Met Pro Glu Leu Gly Glu Ser Val Thr Glu Gly1 5 10 15Thr Val Ile Arg Trp Leu Lys Lys Ile Gly Asp Ser Val Gln Val Asp20 25 30Glu Pro Leu Val Glu Val Ser Thr Asp Lys Val Asp Thr Glu Ile Pro35 40 45Ser Pro Val Ala Gly Val Leu Val Ser Ile Ser Ala Asp Glu Asp Ala50 55 60Thr Val Pro Val Gly Gly Glu Leu Ala Arg Ile Gly Val Ala Ala Glu65 70 75 80Ile Gly Ala Ala Pro Ala Pro Lys Pro85(2)SEQ ID NO:234的信息(ⅰ)序列特征(A)长度107碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:234:GAGGTAGCGG ATGGCCGGAG GAGCACCCCA GGACCGCGCC CGAACCGCGG GTGCCGGTCA 60TCGATATGTG GGCACCGTTC GTTCCGTCCG CCGAGGTCAT TGACGAT 107(2)SEQ ID NO:235的信息(ⅰ)序列特征(A)长度339碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:235:ATGAAGTTGA AGTTTGCTCG CCTGAGTACT GCGATACTGG GTTGTGCAGC GGCGCTTGTG 60TTTCCTGCCT CGGTTGCCAG CGCAGATCCA CCTGACCCGC ATCAGCCGGA CATGACGAAA120GGCTATTGCC CGGGTGGCCG ATGGGGTTTT GGCGACTTGG CCGTGTGCGA CGGCGAGAAG180TACCCCGACG GCTCGTTTTG GCACCAGTGG ATGCAAACGT GGTTTACCGG CCCACAGTTT240TACTTCGATT GTGTCAGCGG CGGTGAGCCC CTCCCCGGCC CGCCGCCACC GGGTGGTTGC300GGTGGGGCAA TTCCGTCCGA GCAGCCCAAC GCTCCCTGA 339(2)SEQ ID NO:236的信息(ⅰ)序列特征(A)长度112氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:236:Met Lys Leu Lys Phe Ala Arg Leu Ser Thr Ala Ile Leu Gly Cys Ala1 5 10 15Ala Ala Leu Val Phe Pro Ala Ser Val Ala Ser Ala Asp Pro Pro Asp20 25 30Pro His Gln Pro Asp Met Thr Lys Gly Tyr Cys Pro Gly Gly Arg Trp35 40 45Gly Phe Gly Asp Leu Ala Val Cys Asp Gly Glu Lys Tyr Pro Asp Gly50 55 60Ser Phe Trp His Gln Trp Met Gln Thr Trp Phe Thr Gly Pro Gln Phe65 70 75 80Tyr Phe Asp Cys Val Ser Gly Gly Glu Pro Leu Pro Gly Pro Pro Pro85 90 95Pro Gly Gly Cys Gly Gly Ala Ile Pro Ser Glu Gln Pro Asn Ala Pro100 105 110(2)SEQ ID NO:237的信息(ⅰ)序列特征(A)长度371碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:237:GTGACCACGG TGGGCCTGCC ACCAACCCGG GCAGCGGCAG CCGCGGCGGC GCCGGCGGCT 60CCGGCGGCAA CGGTGGCGCC GGGGGTAACG CCACCGGCTC AGGCGGCAAG GGCGGCGCCG120GTGGCAATGG CGGTGATGGG AGCTTCGGCG CTACCAGCGG CCCCGCCTCC ATCGGGGTCA180CGGGCGCCCC CGGCGGCAAC GGCGGCAAGG GCGGCGCCGG TGGCAGCAAC CCCAACGGCT240CAGGTGGCGA CGGCGGCAAA GGCGGCAACG GCGGTGCCGG CGGCAACGGG GGCTCGATCG300GCGCCAACAG CGGCATCGTC GGCGGTTCCG GTGGGGCCGG TGGCGCTGGC GGCGCCGGCG360GAAACGGCAG C 371(2)SEQ ID NO:238的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度424碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:238:GTCCGGGTCC CACCACCGCG CCGGCGCGCC CCTAGCGGCC GGGCGCACCA GCCCCTTTTC 60TTGACTCGTT CAAGAAAAGG GCCTTCTGTT TGGTCGGCCA TGTTGGCATG ATCGTGACCC120ATGGGCAACA TCGACGTCGA CATCTCGGCC AAGGTCTAGC TCCATGCGAA TCGCCGCCGC180GGTGGTGAGC ATCGGTCTAG CCGTCATAGC AGGGTTCGCG GTACCTGTTG CCGACGCACA240CCCGTCGGAG CCCGGGGTTG TGTCCTACGC GGTGCTCGGA AAGGGGTCGG TCGGCAACAT300CGTCGGCGCC CCAATGGGGT GGGAGGCGGT GTTCACCAAG CCGTTCCAGG CGTTTTGGGT360CGAACTACCG GCGTGCAACA ACTGGGTGGA CATCGGGCTG CCCGAGGTGT ACGACGATCC420CGAC 424(2)SEQ ID NO:239的信息(ⅰ)序列特征(A)长度317碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:239:GCGATGGCGG CCGCGGGTAC CACCGCCAAT GTGGAACGGT TTCCCAACCC CAACGATCCT 60TTGCATCTGG CGTCAATTGA CTTCAGCCCG GCCGATTTCG TCACCGAGGG CCACCGTCTA120AGGGCGGATG CGATCCTACT GCGCCGTACC GACCGGCTGC CTTTCGCCGA GCCGCCGGAT180TGGGACTTGG TGGAGTCGCA GTTGCGCACG ACCGTCACCG CCGACACGGT GCGCATCGAC240GTCATCGCCG ACGATATGCG TCCCGAACTG GCGGCGGCGT CCAAACTCAC CGAATCGCTG300CGGCTCTACG ATTCGTC 317(2)SEQ ID NO:240的信息(ⅰ)序列特征(A)长度422碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:240:TGGCGTATGC GCTTCGCAGC CGGTGCCGCG TCAACGCGCC GGAGGCAATC GCTTCGCTGC 60CGAGGAATGG TTCGATCACG ATCGCAGTGT GCCGTCGTGC ACCGACACCG CCGTCCAACG120TGAACTGAGG GCGGAAAATC GGCCGAAATC TCGCCCTCAG TTCACGCTCG GCGCCTAACG180GTTCTGGAAG TTGGGTGCGC GCTTCTCGGC GAACGCGCGC GGGCCTTCCT TGGCGTCGTC240GGACAGGAAG ACCTTGATGC CGATCTGGGT GTCGATCTTG AACGCCTCGT TTTCGGGCAT300GCACTCGGTC TCGCGGATGG ACCGCAAGAT GGCCTGCACG GCCAGGGGTC CGTTAGCCGA360GATGGCGTCG GCAAGTTCTA GAACCTTGGT CAACGCCTGG CCGTCGGGCA CACGTGGCCG420AT 422(2)SEQ ID NO:241的信息(ⅰ)序列特征(A)长度426碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:241:GCGTGCCGCT GAACACCAGC CCGCGGCTGC CAGATCTCCC GGACTCGGTA GTGCCGCCGG 60TGGCGTCGTT GCTCTCCTGA CGGGGCGCGG CGACCATAAG GTCGCTAATG CCCAGGTAGC120GGCCCAGGTG CATGGAGTCG ATGATGATGC GACTCTCCAG CTCGCCGACC GGGAGCTTGG180CATCGGGCCT GATCAGCCAG GACGCGTAGG ACAAGTCGAT CGAATGCATA GTGGCCTCCA240GAGTGGCCGT GCCACTTCCG GCGTGCTCCA CGGCAAATGC CTTGATTTCT AGCTCCGCGT300AGTGTTCCCG CATCGCCTGC GGGATGAATG GGAACCGCAG GATGGCGACA AACGGGTCTG360ACCTCAGGTT TGCCGCTTTG CGCACAGTGG TCGACAGCCG GTACTCGGCA TAAATGCTGG420CCCCGA 426(2)SEQ ID NO:242的信息(ⅰ)序列特征(A)长度327碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:242:AGACCGGCGA GGGTGTGGTC GCTGCCCGCG GCATTGTCGA TAATCTGCGC TGGGTCGACG 60CGCCGATCAA CTAGTGAGGC GCAACGCTAG GCTTTGGGAT ACCCACAGCT AAAAAGTTTA120TCAAAGAAAC GAAGAAGGTT GCCATGAGCA CTGTTGCCGC CTACGCCGCC ATGTCGGCGA180CCGAACCCCT GACCAAGACC ACGATCACCC GTCGCGACCC GGGCCCGCAC GACATGGCGA240TCGACATCAA ATTCGCCGGA ATCTGTCGCT CGGACATCCA TACCGTCCAA ACCGAATGGG300GGCAACCGAA TTTACCTGTG GTCCCTG327(2)SEQ ID NO:243的信息(ⅰ)序列特征(A)长度123氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:243:Asp His Gly Gly Pro Ala Thr Asn Pro Gly Ser Gly Ser Arg Gly Gly1 5 10 15Ala Gly Gly Ser Gly Gly Asn Gly Gly Ala Gly Gly Asn Ala Thr Gly20 25 30Ser Gly Gly Lys Gly Gly Ala Gly Gly Asn Gly Gly Asp Gly Ser Phe35 40 45Gly Ala Thr Ser Gly Pro Ala Ser Ile Gly Val Thr Gly Ala Pro Gly50 55 60Gly Asn Gly Gly Lys Gly Gly Ala Gly Gly Ser Asn Pro Asn Gly Ser65 70 75 80Gly Gly Asp Gly Gly Lys Gly Gly Asn Gly Gly Ala Gly Gly Asn Gly85 90 95Gly Ser Ile Gly Ala Asn Ser Gly Ile Val Gly Gly Ser Gly Gly Ala100 105 110Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Asn Gly Ser115 120(2)SEQ ID NO:244的信息(ⅰ)序列特征(A)长度104氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:244:Met Ala Ala Ala Gly Thr Thr Ala Asn Val Glu Arg Phe Pro Asn Pro1 5 10 15Asn Asp Pro Leu His Leu Ala Ser Ile Asp Phe Ser Pro Ala Asp Phe20 25 30Val Thr Glu Gly His Arg Leu Arg Ala Asp Ala Ile Leu Leu Arg Arg35 40 45Thr Asp Arg Leu Pro Phe Ala Glu Pro Pro Asp Trp Asp Leu Val Glu50 55 60Ser Gln Leu Arg Thr Thr Val Thr Ala Asp Thr Val Arg Ile Asp Val65 70 75 80Ile Ala Asp Asp Met Arg Pro Glu Leu Ala Ala Ala Ser Lys Leu Thr85 90 95Glu Ser Leu Arg Leu Tyr Asp Ser100
(2)SEQ ID NO:245的信息(ⅰ)序列特征(A)长度41氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:245:Ala Tyr Ala Leu Arg Ser Arg Cys Arg Val Asn Ala Pro Glu Ala Ile1 5 10 15Ala Ser Leu Pro Arg Asn Gly Ser Ile Thr Ile Ala Val Cys Arg Arg20 25 30Ala Pro Thr Pro Pro Ser Asn Val Ash35 40(2)SEQ ID NO:246的信息(ⅰ)序列特征(A)长度25氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:246:Val Pro Leu Asn Thr Ser Pro Arg Leu Pro Asp Leu Pro Asp Ser Val1 5 10 15Val Pro Pro Val Ala Ser Leu Leu Ser20 25(2)SEQ ID NO:247的信息(ⅰ)序列特征(A)长度61氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:247:Met Ser Thr Val Ala Ala Tyr Ala Ala Met Ser Ala Thr Glu Pro Leu1 5 10 15Thr Lys Thr Thr Ile Thr Arg Arg Asp Pro Gly Pro His Asp Met Ala20 25 30Ile Asp Ile Lys Phe Ala Gly Ile Cys Arg Ser Asp Ile His Thr Val35 40 45Gln Thr Glu Trp Gly Gln Pro Ash Leu Pro Val Val Pro50 55 60(2)SEQ ID NO:248的信息(ⅰ)序列特征(A)长度213碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:248:GCTTGGAGCC CTGGAGCGAC GGTGTGGGTC TGGGGGTCGA TTCGTTCTCG GCGAAAGTCA 60ACTAAAGACC ACGTTGACAC CCAACCGGCG GCCCGGCATG GGCCGTCGCG GCGTAGAAGC120TTTGACCGCG GCGCGAAACG TTCGCTGCTG CGGCCCATGC AGATCGCACA CGCTTGCTTG180AACATCGGGT GGAGCCGGTG GTAACGCCAG GCT 213(2)SEQ ID NO:249的信息(ⅰ)序列特征(A)长度367碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:249:CCGAGCTGCT GTTCGGCGCC GGCGGTGCGG GCGGCGCGGG TGGGGCGGGC ACCGACGGCG 60GGCCCGGTGC TACCGGCGGG ACCGGCGGAC ACGGCGGAGT CGGCGGCGAC GGCGGATGGC120TGGCACCCGG CGGGGCCGGC GGGGCCGGCG GGCAAGGCGG GGCAGGTGGT GCCCGCAGCG180ATGGTGGCGC GTTGGGTGGT ACCGGCGGGA CGGGCGGTAC CGGCGGCGCC GGTGGCGCCG240GCGGTCGCGG CACACTGCTG CTGGGCGCTG GCGGACAGGG CGGCCTCGGC GGCGCCGGCG300GACAAGGCGG CACCGGCGGG GGCCGGCGGA GATGGCGTTC TGGGGGGTGT CAGTGGCACT360GGTGGTA 367(2)SEQ ID NO:250的信息(ⅰ)序列特征(A)长度420碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:250:AAGGCGTGAT TGGCAAGGCG ACCGCGCAGC GGCCCGTAGC CGCGGGACGG CCCAGGCCCC 60GACCGCAGCG GCCGGTGTCT GACCGGGTCA GCGACCAGCG GCGCTGACCG TGCCGCTCGT120CTACTTCGAC GCCAGCGCCT TCGTCAAACT TCTCACCACC GAGACAGGGA GCTCGCTGGC180GTCCGCTCTA TGGGACGGCT GCGACGCCGC ATTGTCCAAC CGCCTGGCCT ACCCCGAAGT240CCGCGCCGCA CTCGCTGCAA CGGGCCGCAA TCACGACCTA ACCGAATCCG AGCTCGCCGA300CGCCGAGCGT GACTGGGAGG ACTTCTGGGC CGCACCCGCC CAGTCGAACT CACCGCGACG360GTTGAACAGC ACGCCGGGCA CCTCGCCCGA ACACATGCCT TACGCGGAGC CGACACCGTT420(2)SEQ ID NO:251的信息(ⅰ)序列特征(A)长度299碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:251:CTCTTGTCGG TGGCATCGGC GGTACCGGCG GAACCGGCGG CAACGCCGGT ATGCTCGCCG 60GCGCCGCCGG GGCCGGCGGT GCCGGCGGGT TCAGCTTCAG CACTGCCGGT GGGGCTGGCG120GCGCCGGCGG GGCCGGTGGG CTGTTCACCA CCGGCGGTGT CGGCGGCGCC GGTGGGCAGG180GTCACACGGG CGGGGCGGGC GGCGCCGGCG GGGCCGGCGG GTTGTTTGGT GCCGGCGGCA240TGGGCGGGGC GGGCGGATTC GGGGATCACG GAACGCTCGG CACCGGCGGG GCCGGCGGG 299(2)SEQ ID NO:252的信息(ⅰ)序列特征(A)长度20氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:252:Leu Glu Pro Trp Ser Asp Gly Val Gly Leu Gly Val Asp Ser Phe Ser1 5 10 15Ala Lys Val Asn20(2)SEQ ID NO:253的信息(ⅰ)序列特征(A)长度121氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性
(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:253:Glu Leu Leu Phe Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly1 5 10 15Thr Asp Gly Gly Pro Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Gly His Gly Gly20 25 30Val Gly Gly Asp Gly Gly Trp Leu Ala Pro Gly Gly Ala Gly Gly Ala35 40 45Gly Gly Gln Gly Gly Ala Gly Gly Ala Arg Ser Asp Gly Gly Ala Leu50 55 60Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly65 70 75 80Gly Arg Gly Thr Leu Leu Leu Gly Ala Gly Gly Gln Gly Gly Leu Gly85 90 95Gly Ala Gly Gly Gln Gly Gly Thr Gly Gly Gly Arg Arg Arg Trp Arg100 105 110Ser Gly Gly Cys Gln Trp His Trp Trp115 120(2)SEQ ID NO:254的信息(ⅰ)序列特征(A)长度34氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:254:Gly Val Ile Gly Lys Ala Thr Ala Gln Arg Pro Val Ala Ala Gly Arg1 5 10 15Pro Arg Pro Arg Pro Gln Arg Pro Val Ser Asp Arg Val Ser Asp Gln20 25 30Arg Arg(2)SEQ ID NO:255的信息(ⅰ)序列特征(A)长度99氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:255:Leu Val Gly Gly Ile Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Asn Ala Gly1 5 10 15Met Leu Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Phe Ser Phe20 25 30Ser Thr Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Leu Phe35 40 45Thr Thr Gly Gly Val Gly Gly Ala Gly Gly Gln Gly His Thr Gly Gly50 55 60Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Leu Phe Gly Ala Gly Gly Met65 70 75 80Gly Gly Ala Gly Gly Phe Gly Asp His Gly Thr Leu Gly Thr Gly Gly85 90 95Ala Gly Gly(2)SEQ ID NO:256的信息(ⅰ)序列特征(A)长度282碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:256:TCCTGTTCGG CGCCGGCGGG GTGGGCGGTG TTGGCGGTGA CGGTGTGGCA TTCCTGGGCA 60CCGCCCCCGG CGGGCCCGGT GGTGCCGGCG GGGCCGGTGG GCTGTTCAGC GTCGGTGGGG120CCGGCGGCGC CGGCGGAATC GGATTGGTCG GGAACAGCGG TGCCGGGGGG TCCGGCGGGT180CCGCCCTGCT CTGGGGCGAC GGCGGTGCCG GCGGCGCGGG TGGGGTCGGG TCCACTACCG240GCGGTGCCGG CGGGGCGGGC GGCAACGCCA GCCTGCTGGT AA 282(2)SEQ ID NO:257的信息(ⅰ)序列特征(A)长度415碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:257:CGGCACGAGC CGTGCTACTG GTCAACTGAT GCCCTGATTG TGACCTTCCC GGCGCCGGAT 60CAGTGCTTCT CAGGACCGAC GTAATATTCG AAAACCAATC CGGCCGCCGA GGCGAGGATG120AATGCCACAC CGGCGGCGAT CAGCCACGGG AGCCACAACG CGATGCCGAC CGCTGCCACC180GAGCCGGACA ACGCGACCAT GATCGGCCAC CAGCTATGCG GACTGAAGAA TCCAAGTTCT240CCTGCGCCGT CGCTGATTTC AGCGCCTTCG TAGTCCTCGG GCCGGGAATC TAACCGGCGG300GCCACAAACC GGAAGAAGGT GGCGACGATC AACGCCATGC CGCCGGTGAG CGCCAACGCA360ATGGTGCCAG CCCACTCGAC ACCACCGGTG GCGAACATCG AGGTCAACAC GCCGT 415
(2)SEQ ID NO:258的信息(ⅰ)序列特征(A)长度373碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:258:TCACCGCGTG AACGGTTCGT AACACTGATA CGTATGCTTG TCAGCGAGCA GATCAAGTCC 60AGTCCGACCA ATGCCAGGAG ATCATCGGCT AGGCTCACGG TTTCGCCTGG GACGAGACGG120TATTGAGTTC TGGCGTTGGA CGGTCCGTGG CGTGGTGGGA AGTCTGACGC GGCATCAGAA180CGGTTGTCAA TACCAGTCTT TGGGGGATAT GGCCTATTTG GTGTCGTCGG GCCGCTCCAC240CGGATCCCTT TTCGAACGTT GCGCAAGCGC GGTCCAGTTA CGGCCTGTTC ACTGCGCGCT300GGCGTAGCTG CGCGGCCTCG ATCGGTTTGA ACGTCATCGC AATTCCCGCA ATGGGTGAGT360ACCTGACGCT CCT 373(2)SEQ ID NO:259的信息(ⅰ)序列特征(A)长度423碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SECQID NO:259:CCAAACCGGA CAGGCCGGCA GCGACGGTCG GAAGTTGCAC CACGGTGCGC GCTCCATGTA 60GCCAACCGGT GACCACGGCG TAGACAGCAG ATCCGTGGAT CGCGCGTTCG GTGTCGTCCG120GGCCGAGTAC CCGCGGGCCG AACCGCAGCG ACCAAAGCAA CGCGATCGAT ACGGGGATCG180CCACTCGTGC CGAATTCGAG CTCCGTCGAC AAGCTTGCGG CCGCACTCGA ACCCGGGTGA240ATGATTGAGT TTAAACCGCT TAGCAATAAC TAGCATAACC CCTTGGGGCC TCTAAACGGG300TCTTGAGGGG TTTTTTGCTG AAAGGAGGAA CTATATCCGG ATAACCTGGC GTAGTAGCGA360AGAGGCCCGC ACCGATCGCC CTTCCCAACA GTTGCGCAGC CTGAATGGCG AATGGACGCG420CCC 423(2)SEQ ID NO:260的信息(ⅰ)序列特征(A)长度404碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:260:AGTGGCCAGC CGGTCGGCCA ATGCATCCAG CTCCCGGTAC GTCAGCTGAC CATCCGCCCA 60ACTGACCGCC ACCGAGTCAG GCTGTGCCGC AGCGATTTCG GCGAACCGGG TATGCACCGC120GGGTGCCGAC GTCGTCACAT CCGGCAGGCC GGGTGCGGTC GGATCGTGCT CGCCGTCCAG180CAGAATGTCG ACGTCGCGCA GCGGCCGATC CCACCGGCTG ACCAAGCGCT GTAACACAGC240CAGCACCCGC CTGCCGAGGC TTTCGGGCGC CATCGTGCCC AGCGCACCGT CGAGCACCTC300CACTAGCAGC GTGAGCTCAC CGGTGCTGCG GTGCGCGGCG ACGGTCACCG GAAAGTGCGA360CAAACTCTCT AGCGCCACCG GACGGAACGT CACCCCGTTT GCGA 404(2)SEQ ID NO:261的信息(ⅰ)序列特征(A)长度421碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:261:GTCCTGGTCG CAGGCTGTTC TTCGAACCCG CTGGCTAACT TCGCACCCGG GTATCCGCCC 60ACCATCGAAC CCGCCCAACC GGCGGTGTCA CCGCCTACTT CGCAAGACCC GGCCGGTGCA120GTGCGACCAC TGAGCGGCCA CCCCCGGGCG GCACTATTCG ACAACGGCAC CCGCCAATTG180GTGGCTCTGC GCCCGGGCGC CGATTCGGCG GCACCCGCCA GCATCATGGT CTTCGATGAC240ATGCACGTTG CACCGCGCGT CATTTTTCTG CCGGGCCCGG CAGCCGCGTT GACCAGCGAC300GACCACGGCA CGGCCTTCCT TGCCGCCCGC GGCGGCTACT TCGTGGCCGA CCTGTCCTCC360GGTCACACCG CACGAGTGAA TGTCGCTGAC GCAGCGCACA CCGATTTCAC CGCGATCGCC420C421(2)SEQ ID NO:262的信息(ⅰ)序列特征(A)长度426碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:262:ATGCATATCA CGCTCAACGC CATCCTGCGT GCGATCTTCG GGGCCGGCGG CAGTGAACTA 60GACGAGCTGC GCCGCCTCAT TCCGCCGTGG GTCACGCTGG GCTCGCGCCT GGCGGCGCTA120CCGAAACCCA AACGCGACTA TGGCCGCCTT AGCCCGTGGG GCCGGCTGGC CGAGTGGCGG180CGCCAGTACG ACACTGTCAT CGACGAGCTC ATCGAAGCCG AGCGGGCCGA CCCGAACTTC240GCCGATCGGA CCGACGTTTT GGCGTTGATG CTGCGCAGCA CTTACGACGA CGGTTCCATC300ATGTCGCGCA AGGACATTGG CGACGAACTG CTCACGCTGC TTGCCGCCGG GCACGAAACC360ACGGCGGCGA CATGGGCTGG GCGTTCGAAC GGCTCAACCG GCACCCCGAC GTGCTCGCGG420CTCTGG 426
(2)SEQ ID NO:263的信息(ⅰ)序列特征(A)长度522碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:263:GTCCTGGTCG CAGGCTGTTC TTCGAACCCG CTGGCTAACT TCGCACCCGG GTATCCGCCC 60ACCATCGAAC CCGCCCAACC GGCGGTGTCA CCGCCTACTT CGCAAGACCC GGCCGGTGCA120GTGCGACCAC TGAGCGGCCA CCCCCGGGCG GCACTATTCG ACAACGGCAC CCGCCAATTG180GTGGCTCTGC GCCCGGGCGC CGATTCGGCG GCACCCGCCA GCATCATGGT CTTCGATGAC240GTGCACGTTG CACCGCGCGT CATTTTTCTG CCGGGCCCGG CAGCCGCGTT GACCAGCGAC300GACCACGGCA CGGCCTTCCT TGCCGCCCGC GGCGGCTACT TCGTGGCCGA CCTGTCCTCC360GGTCACACCG CACGAGTGAA TGTCGCTGAC GCAGCGCACA CCGATTTCAC CGCGATCGCC420CGCCGCTCCG ACGGCAAGCT GGTGCTGGGC AGCGCAGATG GCGCCGTCTA CACGCTTGCC480AAGAACCCGC AGTTGACCGG CGTCGGCGCC GCCACCGTAG CC 522(2)SEQ ID NO:264的信息(ⅰ)序列特征(A)长度739碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:264:GCTGGGGCGC ACCGCCGTCC GGCGGCCCCA GCCCCTGGGC CCAGACCCCG CGCAAAACCA 60ACCCGTGGCC CTTAGTGGCC GGCGCCGCCG CCGTCGTGCT CGTCCTCGTG TTGGGCGCCA120TCGGCATCTG GATCGCCATC CGGCCCAAGC CGGTACAGCC GCCTCAGCCG GTTGCGGAGG180AGCGCCTTAG CGCCCTACTG CTGAACTCCT CAGAAGTCAA CGCCGTGATG GGCTCGTCGT240CCATGCAGCC GGGCAAACCG ATCACATCGA TGGACTCTTC GCCGGTGACG GTGTCCCTGC300CGGACTGCCA GGGCGCGCTG TATACCAGCC AGGATCCGGT GTATGCCGGC ACCGGCTACA360CCGCCATCAA CGGCTTGATT TCATCCGAGC CGGGCGACAA CTACGAACAT TGGGTGAACC420AAGCCGTCGT CGCCTTTCCG ACCGCCGACA AAGCCCGCGC GTTCGTGCAG ACTTCGGCCG480ACAAATGGAA GAACTGCGCA GGCAAGACGG TCACCGTCAC GAATAAGGCC AAGACCTACC540GGTGGACGTT TGCCGACGTC AAAGGCAGCC CGCCGACGAT CACGGTGATA GACACCCAAG600AAGGCGCTGA GGGCTGGGAA TGCCAACGCG CGATGAGCGT GGCCAACAAT GTGGTTGTCG660ACGTCAACGC ATGCGGGTAC CAGATCACCA ATCAAGCAGG CCAGATCGCC GCCAAGATCT720GTTGACAAAG TCAACAAGG 739(2)SEQ ID NO:265的信息(ⅰ)序列特征(A)长度69碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:265:AGACGTCGTC GAGGCCGCCA TCGCCCGCGC CGAAGCCGTT AACCCGGCAC TGAACGCGTT 60GGCGTATGC 69(2)SEQ ID NO:266的信息(ⅰ)序列特征(A)长度523碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:266:ACTGCACCCG GCAGGCGCGA CCAACGGATC GGGTCAACTA GCACTGCCGG TGGAGGCGCC 60CCCGCGGTCT GTGCCTTCCC ACGGGGAACC CTTGGGCAGC GCGGCTCCAG AAGGGTTGGA120GGGAGAGTTC GACGACCGTA TCGACGAGCG GTTCCCGGTC TTCAGCTCGG CCAGTCTCGC180CGAAGCGCTG CCGGGTCCGC TGACCCCGAT GACGCTGGAT GTCCAGTTGA GTGGACTGCG240CGCGGCCGGT CGGGCGATGG GTCGGGTACT GGCGCTTGGC GGTGTCGTTG CCGATGAGTG300GGAGAGAAGA GCCATCGCGG TGTTCGGTCA CCGCCCGTAT ATCGGAGTGT CGGCCAATAT360TGTGGCCGCC GCCCAACTGC CGGGGTGGGA CGCGCAGGCC GTAACCCGGC GGGCACTGGG420CGAGCAACCG CAGGTCACTG AGCTGCTTCC GTTTGGTCGA CCGCAACTTG CGGGCGGACC480GCTCGGCTCG GTCGCGAAGG TGGTCGTGAC GGCACGGTCG CTG 523(2)SEQ ID NO:267的信息(ⅰ)序列特征(A)长度224碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:267:GTGTCGGTGT CGTCGGGGTA GGAGCGACTT CCCCGGCCGG CGCCGGCGCC GGAGCGGGCT 60CTGCAGGAAC CGGTGCCGGC GCCGGCGGCG GGGCGACCAA AGGCCGGATC GATTCGGCCA120GCGCCTTGGC CGCGCCCTTG TCCACCGGGT TGTTGGCGGT CCCGAGCCAT ACCACAAACC180AACGCTGAAG GGGCCCGGCG TCCGGTGCGT TCGCCGCGGG CGAC 224(2)SEQ ID NO:268的信息
(ⅰ)序列特征(A)长度521碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:268:TGAACTGACT GCCCCGCTCG ATCGGCGGCG GCGGCGTGTC ATAGCTGCGC CGCCAGGCCA 60TGAACTGCTC TTCGCCATAG CGGGCCTTGG TCTCGGCCTT GTCCAAACCC TGCAGCGCGC120CGTAGTGGCG TTCGTTGAGC CGCCAGCTAC GCCGCACGGG AATCCAGAGC CGATCGGCGC180TGTCCAACGC CAGATGCGCG GTGGTGATCG CGCGCCGCAG CAACGAGGTG TAGAGCACGT240CGGGCAATAG GTCGTGTTCC GCGATCAGCT CGCCGCTTCG AACCGCCTCT GCCTGGCCCT300TGTCCGTCAG GCCGACATCG ACCCAGCCGG TGAACAGGTT GAGGGCATTC CAGTCGCTCT360CGCCGTGGCG CAGCAACACC AGGCTGCCAG TGTTTGCCAT ACCGGCAAGT CTCTCACGCA420CTCCCGCACT CCTCATCGTG GACCAAAATG CCCGAATTCT CCTCGGTCCG CTGCGCAGCG480CGTTCATACC GCCGAGGTGG TCGGCACCGT AACGGCCGGT T521(2)SEQ ID NO:269的信息(ⅰ)序列特征(A)长度426碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:269:CTCCAGGCTC ATTCGCTCGA ACAAAGCCAC CCGGCCGTAC AGCGGACGCC CCCATTCGTT 60GTCGTGATAG TCGCGGTACA GCTGGGCATC GGGCCCTGGA CGAACCTCCG CCCAGGGGCA120GCGAACCAGC CCGTCGCCGC TCACGCGGGG TCAGAACGGT AGTGCACGAC AGTCTCGCCG180CGCGAAGGGT TTGACGCGTC AGACTCGGCC TCGGCGTCTT CCGACGAGGC GTGGATCGCC240CCGAGCTGAG AGCGTAGCGC CTCGAGCTCA CGGCCGAGCC GTTCCAGCAC CCAGTCCACC300TCGCTGGTCT TGTTCCCGCG CAGCACCTGC GTGAACTTGA CCGCGTCGAC ATCGGCGCGG360GTGACCCCGA ACGCCGGCAG CGTCGTCGCC GTCGTCGCCC GCGGCAGGGG CGGCAACTGC420TCGCCA 426(2)SEQ ID NO:270的信息(ⅰ)序列特征(A)长度219碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:270:GCGGACACGG CGGACAAAGC GCAATCGGCC TCGGCGGCGG CGCCGGCGGC GACGGGGGCC 60AGGGCGGCGC CGGCCGCGGA CTGTGGGGTA CTGGCGGCGC CGGCGGACAC GGCGGGGCAA120GGCGGTGGTA CCGGGGGCCC ACCGCTGCCC GGTCAGGCAG GCATGGGCGC CGCGGGTGGC180GCCGGTGGGC TGATCGGCAA CGGCGGGGCC GGCGGCGAC 219(2)SEQ ID NO:271的信息(ⅰ)序列特征(A)长度571碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:271:AAGATCATCG GCGCCGCTCC TTAGCATCGC TGCGCTCTGC ATCGTCGCCG GCGCGGATCA 60CGGAGGTCCG GCCTTGTACC CCACTCCTCG AACGGTCAGC ACCACAGTCG GGTTCTCGGG120ATCCTTTTCG ACCTTGGCCC GCAGACGCTG GACATGCACG TTCACCAGCC TGGTATCGGC180TGGGTGCCGG TAACCCCATA CCTGTTCGAG CAGCACATCA CGAGTAAACA CCTGGCGCGG240CTTGCGCGCC AATGCGACCA ACAGGTCGAA TTCCAGCGGT GTCAACGAGA TCTGCTCACC300GTTGCGAGTG ACCTTGTGCG CCGGTACGTC GATTTCTACG TCGGCGATGG ACAGCATCTC360GGCGGGTTCG TCGTCGTTGC GGCGCAGCCG CGCCCGCACC CGCGCAACCA GCTCCTTGGG420CTTGAACGGC TTCATGATGT AGTCGTCGGC GCCCGACTCC AGACCCAGCA CCACATCCAC480GGTGTCGGTC TTTGCGGTGA GCATCACGAT CGGAACACCG GAATCGGCGC GCAACACCCG540GCACACGTCG ATGCCGTTCA TACCGGGGCA A 571(2)SEQ ID NO:272的信息(ⅰ)序列特征(A)长度93氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:272:Leu Phe Gly Ala Gly Gly Val Gly Gly Val Gly Gly Asp Gly Val Ala1 5 10 15Phe Leu Gly Thr Ala Pro Gly Gly Pro Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly20 25 30Gly Leu Phe Ser Val Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ile Gly Leu35 40 45Val Gly Asn Ser Gly Ala Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ala Leu Leu Trp50 55 60Gly Asp Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Val Gly Ser Thr Thr Gly65 70 75 80Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Asn Ala Ser Leu Leu Val
85 90(2)SEQ ID NO:273的信息(ⅰ)序列特征(A)长度26氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:273:Met Pro Pro Val Ser Ala Asn Ala Met Val Pro Ala His Ser Thr Pro1 5 10 15Pro Val Ala Asn Ile Glu Val Asn Thr Pro20 25(2)SEQ ID NO:274的信息(ⅰ)序列特征(A)长度26氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:274:Lys Pro Asp Arg Pro Ala Ala Thr Val Gly Ser Cys Thr Thr Val Arg1 5 10 15Ala Pro Cys Ser Gln Pro Val Thr Thr Ala20 25(2)SEQ ID NO:275的信息(ⅰ)序列特征(A)长度20氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:275:Trp Pro Ala Gly Arg Pro Met His Pro Ala Pro Gly Thr Ser Ala Asp1 5 10 15His Pro Pro Asn20
(2)SEQ ID NO:276的信息(ⅰ)序列特征(A)长度140氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:276:Val Leu Val Ala Gly Cys Ser Ser Asn Pro Leu Ala Asn Phe Ala Pro1 5 10 15Gly Tyr Pro Pro Thr Ile Glu Pro Ala Gln Pro Ala Val Ser Pro Pro20 25 30Thr Ser Gln Asp Pro Ala Gly Ala Val Arg Pro Leu Ser Gly His Pro35 40 45Arg Ala Ala Leu Phe Asp Asn Gly Thr Arg Gln Leu Val Ala Leu Arg50 55 60Pro Gly Ala Asp Ser Ala Ala Pro Ala Ser Ile Met Val Phe Asp Asp65 70 75 80Met His Val Ala Pro Arg Val Ile Phe Leu Pro Gly Pro Ala Ala Ala85 90 95Leu Thr Ser Asp Asp His Gly Thr Ala Phe Leu Ala Ala Arg Gly Gly100 105 110Tyr Phe Val Ala Asp Leu Ser Ser Gly His Thr Ala Arg Val Asn Val115 120 125Ala Asp Ala Ala His Thr Asp Phe Thr Ala Ile Ala130 135 140(2)SEQ ID NO:277的信息(ⅰ)序列特征(A)长度142氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:277:Met His Ile Thr Leu Asn Ala Ile Leu Arg Ala Ile Phe Gly Ala Gly1 5 10 15Gly Ser Glu Leu Asp Glu Leu Arg Arg Leu Ile Pro Pro Trp Val Thr20 25 30Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ala Leu Pro Lys Pro Lys Arg Asp Tyr Gly35 40 45Arg Leu Ser Pro Trp Gly Arg Leu Ala Glu Trp Arg Arg Gln Tyr Asp50 55 60Thr Val Ile Asp Glu Leu Ile Glu Ala Glu Arg Ala Asp Pro Ash Phe65 70 75 80Ala Asp Arg Thr Asp Val Leu Ala Leu Met Leu Arg Ser Thr Tyr Asp85 90 95Asp Gly Ser Ile Met Ser Arg Lys Asp Ile Gly Asp Glu Leu Leu Thr100 105 110Leu Leu Ala Ala Gly His Glu Thr Thr Ala Ala Thr Trp Ala Gly Arg115 120 125Ser Asn Gly Ser Thr Gly Thr Pro Thr Cys Ser Arg Leu Trp130 135 140(2)SEQ ID NO:278的信息(ⅰ)序列特征(A)长度163氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:278:Val Leu Val Ala Gly Cys Ser Ser Asn Pro Leu Ala Asn Phe Ala Pro1 5 10 15Gly Tyr Pro Pro Thr Ile Glu Pro Ala Gln Pro Ala Val Ser Pro Pro20 25 30Thr Ser Gln Asp Pro Ala Gly Ala Val Arg Pro Leu Ser Gly His Pro35 40 45Arg Ala Ala Leu Phe Asp Asn Gly Thr Arg Gln Leu Val Ala Leu Arg50 55 60Pro Gly Ala Asp Ser Ala Ala Pro Ala Ser Ile Met Val Phe Asp Asp65 70 75 80Val His Val Ala Pro Arg Val Ile Phe Leu Pro Gly Pro Ala Ala Ala85 90 95Leu Thr Ser Asp Asp His Gly Thr Ala Phe Leu Ala Ala Arg Gly Gly100 105 110Tyr Phe Val Ala Asp Leu Ser Ser Gly His Thr Ala Arg Val ASn Val115 120 125Ala Asp Ala Ala His Thr Asp Phe Thr Ala Ile Ala Arg Arg Ser Asp130 135 140Gly Lys Leu Val Leu Gly Ser Ala Asp Gly Ala Val Tyr Thr Leu Ala145 150 155 160Lys Asn Pro(2)SEQ ID NO:279的信息(ⅰ)序列特征(A)长度240氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:279:Trp Gly Ala Pro Pro Ser Gly Gly Pro Ser Pro Trp Ala Gln Thr Pro1 5 10 15Arg Lys Thr Asn Pro Trp Pro Leu Val Ala Gly Ala Ala Ala Val Val20 25 30Leu Val Leu Val Leu Gly Ala Ile Gly Ile Trp Ile Ala Ile Arg Pro35 40 45Lys Pro Val Gln Pro Pro Gln Pro Val Ala Glu Glu Arg Leu Ser Ala50 55 60Leu Leu Leu Asn Ser Ser Glu Val Asn Ala Val Met Gly Ser Ser Ser65 70 75 80Met Gln Pro Gly Lys Pro Ile Thr Ser Met Asp Ser Ser Pro Val Thr85 90 95Val Ser Leu Pro Asp Cys Gln Gly Ala Leu Tyr Thr Ser Gln Asp Pro100 105 110Val Tyr Ala Gly Thr Gly Tyr Thr Ala Ile Asn Gly Leu Ile Ser Ser115 120 125Glu Pro Gly Asp Asn Tyr Glu His Trp Val Asn Gln Ala Val Val Ala130 135 140Phe Pro Thr Ala Asp Lys Ala Arg Ala Phe Val Gln Thr Ser Ala Asp145 150 155 160Lys Trp Lys Asn Cys Ala Gly Lys Thr Val Thr Val Thr Asn Lys Ala165 170 175Lys Thr Tyr Arg Trp Thr Phe Ala Asp Val Lys Gly Ser Pro Pro Thr180 185 190Ile Thr Val Ile Asp Thr Gln Glu Gly Ala Glu Gly Trp Glu Cys Gln195 200 205Arg Ala Met Ser Val Ala Asn Asn Val Val Val Asp Val Asn Ala Cys210 215 220Gly Tyr Gln Ile Thr Asn Gln Ala Gly Gln Ile Ala Ala Lys Ile Cys225230 235 240(2)SEQ ID NO:280的信息(ⅰ)序列特征(A)长度22氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:280:Asp Val Val Glu Ala Ala Ile Ala Arg Ala Glu Ala Val Asn Pro Ala1 5 10 15Leu Asn Ala Leu Ala Tyr
20(2)SEQ ID NO:281的信息(ⅰ)序列特征(A)长度174氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:281:Leu His Pro Ala Gly Ala Thr Asn Gly Ser Gly Gln Leu Ala Leu Pro1 5 10 15Val Glu Ala Pro Pro Arg Ser Val Pro Ser His Gly Glu Pro Leu Gly20 25 30Ser Ala Ala Pro Glu Gly Leu Glu Gly Glu Phe Asp Asp Arg Ile Asp35 40 45Glu Arg Phe Pro Val Phe Ser Ser Ala Ser Leu Ala Glu Ala Leu Pro50 55 60Gly Pro Leu Thr Pro Met Thr Leu Asp Val Gln Leu Ser Gly Leu Arg65 70 75 80Ala Ala Gly Arg Ala Met Gly Arg Val Leu Ala Leu Gly Gly Val Val85 90 95Ala Asp Glu Trp Glu Arg Arg Ala Ile Ala Val Phe Gly His Arg Pro100 105 110Tyr Ile Gly Val Ser Ala Asn Ile Val Ala Ala Ala Gln Leu Pro Gly115 120 125Trp Asp Ala Gln Ala Val Thr Arg Arg Ala Leu Gly Glu Gln Pro Gln130 135 140Val Thr Glu Leu Leu Pro Phe Gly Arg Pro Gln Leu Ala Gly Gly Pro145 150 155 160Leu Gly Ser Val Ala Lys Val Val Val Thr Ala Arg Ser Leu165 170(2)SEQ ID NO:282的信息(ⅰ)序列特征(A)长度61氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:282:Val Gly Val Val Gly Val Gly Ala Thr Ser Pro Ala Gly Ala Gly Ala1 5 10 15Gly Ala Gly Ser Ala Gly Thr Gly Ala Gly Ala Gly Gly Gly Ala Thr
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20 25 30Asp Glu Pro Pro Pro Arg Gly Ser Glu Pro Ala Arg Arg Arg Ser Arg35 40 45Gly Val Arg Thr Val Val His Asp Ser Leu Ala Ala Arg Arg Val50 55 60(2)SEQ ID NO:285的信息(ⅰ)序列特征(A)长度72氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:285:Gly His Gly Gly Gln Ser Ala Ile Gly Leu Gly Gly Gly Ala Gly Gly1 5 10 15Asp Gly Gly Gln Gly Gly Ala Gly Arg Gly Leu Trp Gly Thr Gly Gly20 25 30Ala Gly Gly His Gly Gly Ala Arg Arg Trp Tyr Arg Gly Pro Thr Ala35 40 45Ala Arg Ser Gly Arg His Gly Arg Arg Gly Trp Arg Arg Trp Ala Asp50 55 60Arg Gln Arg Arg Gly Arg Arg Arg65 70(2)SEQ ID NO:286的信息(ⅰ)序列特征(A)长度74氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:286:Asp His Arg Arg Arg Ser Leu Ala Ser Leu Arg Ser Ala Ser Ser Pro1 5 10 15Ala Arg Ile Thr Glu Val Arg Pro Cys Thr Pro Leu Leu Glu Arg Ser20 25 30Ala Pro Gln Ser Gly Ser Arg Asp Pro Phe Arg Pro Trp Pro Ala Asp35 40 45Ala Gly His Ala Arg Ser Pro Ala Trp Tyr Arg Leu Gly Ala Gly Asn50 55 60Pro Ile Pro Val Arg Ala Ala His His Glu65 70
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(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:300:AATTGGCACG AGTGATCGCG CTGAAGCCGG TAGCGCGGGT GGCTCGGGTG GTTTGCGAAC 60RAAATCCGCT CGANGTGGTC TCGGTAGGCG GTGTCCANAA CGGTGGCGCG GTGCCGGCGG120ATCTGATCGG CGCGGCCGTA GTGCACGTCG GCGGGCGTGT GCAGTCCGAT GCCGGAATGC180TTGTGTTCGT GGTTGTACCA GCCGAAGAAC CGGTCGCAGT GCACCCGGGC CGCCTCGATC240GACTCGAACC GTTTCGGGAA ATCGGGCCGG TACTTGAAGG TCTYGAACTG GGCCTCAGAC300AACGGGTTGT CTTGCTGGTG TGCGGGCGTG AGTGCGACTT GGTGACACCG AAGTCGGCCA360NCANCAATGC CACCGGTTTG GAACTCATCC ACAACCCCCG TCCGCGTCMA GGTCACTTGT420NCGGCGCTAA TTTNYTGGGC GGCAAGGGTT TGCCGAYCAN KCCGCTCGGC CAAAACTTCG480ANTCNCSCCA AGGCCNCCAT CCNCCCAAAC AMGTTACGGG ANAAAANATY CAAAGAYCAC540CYTCCGGKTN TTATANCTYC CCYTTTGSTY GGGCCCCCCN CYYTGKKNAT ACCCCTNCCA600AWTCCCAACN CCCKCCAANA RCYKGGGGCC CCCNCCAACC CGGGKGAAKA WTAATTTAAA660CCCYAACMAW ACTWMMNACC CNNGGGSCCY AAMCGTYYNR AGGTTTTSCT NAAAGAAASA720ANTCGGAAMC CGGNTSTACC AAAAASCCCK CCNWTCCCTC CRASATTGSC NCCSAAWKSA780AKGCCCCCNY TCSGCNWNNC CSGCGGKKKT KKGTTNCCCT WMRCWMWYTS GGCCNASCCN840CKYYSSMYCC CCCCTCCCCM CTCCGNKTCC CCAMCCYANC MGGCCCCYTM GKKCCCWKNT900YKGCCCCCCC AMMNNNGGGG WGACCCTNGG CCCCMKRRGM TCCCNANTGA MCCTCWGNRA960MKCYCCNRAR ANMCCSCNCC NGCNCRCKNN 990(2)SEQ ID NO:301的信息(ⅰ)序列特征(A)长度223碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:301:AATTCGGGTG GCAACGCGGG CCTGTTCGGC AACGGCGGCG CCGGTGGTGC CGGTGGGGCT 60GGTGGTGGCG CCGGCGGCGC GGGCGGTAAC GCGGGGTGGT TTGGTCATGG GGGCGCTGGC120GGCGTGGGTG GTGTANGTGC GGCCGGGGCC AACGGTGCTA CGCCCGGTCA GGATGGGGCG180GCTGGTGTTG CCGGGTCGGA CRACRCTCGT GCCGCTCGTG CCG 223(2)SEQ ID NO:302的信息(ⅰ)序列特征(A)长度418碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:302:AATTCGGCAC GANGCGGCAA CGGTGGCAGC GGCGGCACGT CNGTTGCCAC CGGGGGGGCC 60GGGAACGGCG GTGCCGGCGG CGCCGGCGGC GGGGCCGGGC TGATCGGCAA CGGCSGCAAC120GGCGGCAGTG GCGGAATGGG CGATGCCCCG GGCGGCACCG GCGTCNGCGG CATCRGTGGG180CTGTTGTTGG GTTTGGACRG CGCCAACGCC CCGGCCAGCA CCAACCCGCT GCACACCGCG240CAGCACAGGC GTTGGCCGCA GTCAACGCGC CCATCCAGGC CGTGACCGGG CGCCCCTGAT300CGGCAACGCG CCAACGGCGC CCCGGGCAAC GGGGCCCCCG GCRGGCACGG CGGGTGGTTG360TTCGGCGGCG GAAGGAACGG CGGGTCCGGC GTCANCRGCG GGGCGGGCGG AAATGCCG 418(2)SEQ ID NO:303的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1049碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:303:AATTCGGCAC GAGGGGCACG ATCGCATACA GCGCTCGCGG CAGACCCGCC CGATACAGCA 60GCTCGGCACA CGCGAGCGCA CAATACGGCG TCTGGCTGTC CGGCTTGARC ACCACCGCGT120TACCGGCCAC CAGCGCGGGC ACCGAGTCCG ACACCGTAAG CGTCATGGGG TAGTTCCACG180GCGAGATCAC CCCCACCACG CCCTTCGGTT GATAGCACAC CGTGGTCTTG CCTATCCCGG240GCAGCAGCGG CTGTGCCTTA CGGGGCTTCA GCAGGTCCAC ACAGACTCGT GCSTTATAAT300TNCGCSTTCC GCGATCAGAT CGACAATTTC CTCTTGCGCC GCCCATCGGG CCTTGCCCGC360CTCGGCTTGC AGGAAGTCCA TGAAGAACTC GCGGTTCTCG ATNAACAGGT CGCGATAGCG420GCSGATGACT GCAGCTCGCT CGATNACGGG ACCTTCGCCA GTCGGTCTGC GCCGCGCGAN480CTTCCGCGAA TGCCGCTTCG ACTTCCGCGG NCGTGCCAAC GGAATCNTAT CACGGGTTGC540CGGTTAAAAC TCCTCAATST NCYGGTCGAA ATTCGGCAAC TTCTTATCCC GGCAGGTRCC600AACSANNCAA ACCTCGGCAA GGTTAGGMTT TCCCCCNCTT YCAAAAATNC GGKTTTTGGN660CMAATTTCGC CKCNATGKTG MCAAGGMTCT CKAANAAKCS GGGTCYTCTN NTCNGKGGAK720CCAAAMGGKT TTGGGGMAGC GKNMNCCAAN CCTWACCCTG KTKAANGGNW TTCCCCCCGG780GGGAKKGNGA ATYCYCCSNA NCCCRGGGGG GNMCARATTC TYCCGGMCTC CTCKGGAWTC840WGMGSTTTCC CAAAAAACSC CCCAAATTMM TTTTTCCRCN TRTTGANACW CTTTTKARCA900MMCSSAARNS ANMCNCTCYC CKCTKTGKTK AAAAAGNAYW CCCCMAAATT TYTAWTTSSC960CCSCGCGGGN CCCNCTNTTT TSCNMTWCTM WNYTNCRMCC MMMSNCKSNG KKGGNRCCNN 1020CRCCSNCCCM AAWYNTKGYN KNTATMAGC 1049(2)SEQ ID NO:304的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1036碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:304:AATTCGGCAC GAGGGAATCG AGAATCCCGG AATGGTGAAG CCTCGGTGCC TGCCGTTACG 60CCAAGAKTCA GGGTGAGCGG CCCCCCGGTG GGAATGCTGA SGCCAACCGG GAAAAGGGTG120AGGGCTGGGG TGGAATAACT GAANGTTACT GGGATGGAAA ACCCGGTATT GATATGTATT180GGGCCGATCA ANGTTGTGGG AATGGGGGAA GGCTGAGGGC GACCTGTTGG ATTTGGGGAA240TTGTYRTGGA CRAKACWGGC CAGCCMGCGT GATGGTTTGG TTSAANTTTT GTGCCGSCCA300CANGGTGATG GGATTGATTT TGATGGGGCC SATCGAAATA TTGGGTATGC CNACGCCSAA360CGAGATYGCC GGGACGTTCA TGGGCGGGAC AACCMASGGT CCSANGTAAK GGTTTCCTTN420ATNTTGATCG GGATTCCGGA ACTMTSTCGA TGSGCTCSAY MTSATSGCCC NACNCCWCCG480YTTATTTCMS GCTNAYGGGA ATBAMRGGAA CAAYNTCCCT CCCMGGAAAA ACCAACMSGC540CCTGGTNSYC CNCCCRCCNC AKAACCCRTT KCTGTRSTMC CCSMAAATNA CSCCCSCTTS600NACTCCNCSG AANTNSCCCC CCCSCKNNTT ATSTYCCCGK GTTCCCCCMC CCCTTNAAMC660TCCCCGGTTA ACCCCCWTNT SNCNCCCCCS YTAAKMNCRG GCTTSTTNCT CCCCCYTRMK720CNCCCCCTCK SAMCWNCCNC CTCKAACNAC CCCKCYKGSM TNCCCAATNT WCMWCKCCNS780KTTNTMCTKC CCAAYTNCRC CCNCRCTCCC CCKSTSTCAM WTATAAAACC WCWYAWYNNK840KCNCWMAWTA MGACWCTCNY NCCCCNCNCK NTTKTAMWCC CKMCCCKCSW TWCYCKCSCC900CCMTCTMNAC YCCCCCKKTY NKWMCCCTTC CCCCCCTCCC MCNMBMKTCT YCSGKTWCWC960NCYNTTMTCN CYNANMCKCK KTCTCTTCCN CRNTCTCCCC CCWCCCCCCV KKCTCTSKCC 1020CNCNCTCCSC MMKGSC 1036(2)SEQ ID NO:305的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1036碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:305:AATTCGGCAC GAGATCATGA ATAGCGGGCT GGTCAGCACC GAAGTGGTCG GCGATCTCGC 60GAGCAAGTCT CGTCTGCTCG CCCAGCAGGA GGTCGGCATC GATGCGGACA CCTGCGATGT120CTTGGATGGT GTTCAGTTGC AGGTAAGGCC GACGCCGCAG CTTTGCTAGC AGGGTGTCTT180GGCTCTTCGC ACGTGAGGTA ACCAATAACT CCGACGCAGA CCAACTCCGG CCCTCGATCC240GGGTACCAGG CTCCGCCGGA GCCAGCCGTT GTGCCCCCTG GGCCGAAGGT CAGCTGCTGT300GCGATCGAAG TAAGAAACCG CGCCATGCCC GTCGCCAAGT ACGACTGACC GAGCAAACGA360ACGATCGTCG TCCTTTCCGT GGGGGTAATC GANCCCAGCA ACCGCACGAG CCACCAATCA420TTGGGATTCG GCCACTGACC GACCAACCGC CTGTGCGACA CCCCAGCGGA ATTGGTGGTC480TTCCGCGGGG CCGCNAACGG AATCANCGSG ACGCGCTCGC CGAASCANCC GCATANCCNT540ACATANCAAC GGNNTCTGCG CCCACATTTC GGGSTTMTGC CCCTCNGCAA CSSNAAYNCC600CCCAATTCYG AACNAAAAAA TTGGYCCATY ARNGTYCTCM CCAAAAACCN AWTCCCCKTA660TCCCCCGGGG GGGRCCCCYY NMNAAAACGG CCCWWAANCC CCSGGGCSCC CGGGTTRWTN720CCCCTTGTCG GCCCNCCSGG TTTGGTCMCM GGSCMMTNWN GGGNTGCSCC CCCNCNAAAA780AAAAAYCKNG NCAAATYAAA CCCKYCMAAA ASKTGGGSSC CCCMARCCGG GGKAAKKWWA840ANTTAANCCN KAAAAAAAWW NCANNMCCCC NGGGNCCTAA GGKYTTAGGG GTTSTTNANG900ARAAAATMTC CANATMNSSK TTNNAAAAAA ASCCSWAKCC CCCNNNKKNN CCAAWKAARR960SRCCTTCGGG TNWNSGGGGG KKKKKTNCMS KMNMMTTWGR CCCNCCGCCN NNTWKCCTTN 1020TCCNYGGNGC RNCAGN 1036
(2)SEQ ID NO:306的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1060碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:306:AATTCGGCAC GAGTCGATTC GATCGAACAC GCCCGCACCT GGCCAGGCCA CATGGGCGCG 60GCCATGGCCA ACGCCTACTC GGCCAACCCG AATCCATTCG GCGTCTCACC GCAACCCCCG120AAACCGGCGA CCGCGGCATG GATCAACCCG CCCACCCCAG ATCCGAAATA GCGTCCACAT180AATGAGACAC TGGCGCAAAG AGCTTGACAG GCGCCGCACC ACGCAAGCTG TTAGACGTGT240CGGTCTTGCA AGAAGCGGGT TGGCCACCCA AGATCACGCC GCCCAAGGGC ATCGAGTCAA300CGTTGCGGTG GTATCGCGCT AACGTCGGCG CCGCCAAGAA ATGACGGTGC GCATTACCAT360GGCCCTGCTG ATCACCTTTG GCCACCTGCG CACCANAACT ATGANCAGCC TTATGCCGAG420TCTCGTGGAC ATCGGCAGCC GCTTCAAAAA CTCCTTGTCG ACAATSGTAT TGCTGANCCG480CCGAATTCTT NTRCTTGCAA SAACACTNCA TGTTNCSGGT NAACAACCYT GGTTNGAAAA540ACANCCAATA TTGAANTCCC ANTCGGGCAM GAACCNGTTM CGGAAGKTGK TGGGAACGAA600TGKTGCCCAA AAATCCCGGG NGGTRAAAWW CCCNSNATGG MSAATTTTSC CTNGAACAAM660AAAAGGTCCA AGKYCAAAGG NGCCCCCCCC SGNAAATTGG TGAACSCAKA WYANRTTCCC720WWWTNCAAAT MTTNGGGTCC KNNTCCCCWT AAANGGGSCN CCCCNCCRGG GMGTYTCCCC780NWNMGGGMGN CYYCSCCCCA AAAAAAAMMM MTTTCSGKGG SMGGKKCCCC CCSGGTYWGG840GKKYTTAAAC CCGGKGGGTN CAAAAAANAN ACCCCCCAMS NGGGGGGAAA ATTTGNAAWT900AAGGKKKTKC SCMACCCCAA AAANMMNNCN AWNCCCGMGK SARGGGGRNY TTMKAGGGMG960GNYCCCCCCW YCGGGGGGNA NAAYAAAAGK NGSNGRGAAT NTTNTTTTGK RSSSRNKTTT 1020TYNTCCTYCN CCNMGNRWWG SRAMNTGKTS NSSGGGSGGC 1060(2)SEQ ID NO:307的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1040碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:307:AATTCGGCAC GAGCTTCACC AAAGAGCTGA CATGCCGGGT GATGCGACAT CGCATCGAGG 60GCAATACGGG CATGGATGAN CCGAANGGAN TCTGGCGTTC GCTCAACTGG ATTACGGTTC120CCAAGGTGAA ACGCTTTGCG GCGAAAGATG CGACGCTTAA CTTGCGCTTC CACCGTGCAA180TGTTNGTATG GATGCTGGAA CCGCGCTGAC NGATAANGAA TTCGCTGGTC GCCGGGCACN240ATGGATGGTC CKSTTTTCNC TCCGCSGTTA AATTGCSTGT GCATCATCTG GCAGGCTATG300TTCCCGCTAC RCTGCAGCCC ATCATGGATG TGCGGCTAAC GAANAAGTTA TGACATGGCG360CAAGCGAMTC GGGCATSCNC GCGGCAMTTT CGCAACCTGC TGTGTNTGAA GCGTMTCAAC420CGAATGCGGC GCTYAAAAGC NGGCTTGCGT TGATTMMAAC CNAACCCNTN CNATYCTTTG480CCGNGNMNTG CGTTCTCTCC AACTCCGKKG SYTGCCNCCG TGAAACCCMA CTNCCCCCCC540GTTGGACTTA MRTNTTCAAA AAMCGGMTNA ACCSGAATNN SAACCTNCCR TCAAANTAMM600SAANTCGGGC TTYGGGNRCC CCCCNGAAYW TTCKNCNGGG GMNNTYCTCN GGTTYNGGCG660SAAACNTTTG CCRTNCYMNN TTTACAMGGC NCMTNMTTGM GGGSCSNNAS GWCCCGGGKK720TNTTTNCAAW TCNCNSKTTT TTKGGGGGGG GGCYGRTRMC NCGGGCCCCC GGCCCKKMAA780AAAAAMCMSA RRCCNCYGGG KKCCCCCCCM NNATNGGGCG YKCRAAACAA ACCCCAANRA840TNGNGMGGGC SMACCSGNGN GYNAAAKGGT TSNSCTMANM MKGMANNNCT SGMSCCMNSN900NCTGMGGGKT TTKGNNGARN AANAMKMGGM RCGGNCGCNN GAAAGGGSMS GSCKSCNNGN960NGASNGWMGN CRNNGANRCC NCNGYGNMRN NNGNNNGNNN GGGRKNNACN NMKMCAWSMC 1020NSNMMGNNNS CGYMTNKCGC 1040(2)SEQ ID NO:308的信息(ⅰ)序列特征(A)长度348碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:308:AATTCGGCAC GAGACAANGG CGTGAAATGG GATCCGGCCG AGCTGGGGCC CGTCGTCAGC 60GACCTGTTGG CCAAGTCGCG GCCGCCGGTT CCGGTCTATG GGGCCTAGTT ATCTGCGCCG120AGCGTGAACT CAGGGCGAGA TTTCGGCCGT TTTCTCGCCC TGGCTTCACG TTCGGCGAAG180TKGGGAACGG TCAGGGTTCG CAAACCACGA TCGGGATCGT GCGGTCGGTC CAGGACTGGT240ANTCCTGATA CTTKGGTACA TCGTGACCAA CTGTGGNCAA TATTCGGCGC GCTCCTCGTC300NGTCGCGTCC CGCGCGGTAA GGTCCANCAC TTCCTTTTTC TCGTGCCG 348(2)SEQ ID NO:309的信息(ⅰ)序列特征(A)长度332碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:309:AATTCGGCAC GAGAGACCGG GTCGTTGACC AACGGACGCT TGGGCGCGGG CCCCTTGCGT 60GGCATCAGCC CTTCTCCTTC TTAGCGCCGT AACGGCTGCG TGCCTGTTTG CGGTTCTTGA120CACCCTGCGT ATCCAGCGAA CCGCGGATGA TCTTGTAGCG CACACCAGGC AGGTCCTTCA180CCCGGCCGCC GCGCACCAGC ACCATCGAGT GCTCCTGCAG GTTGTGGCCC TCGCCGGGAA240TGTACGCCGT GACCTCGAAC TGACTCGTCA CTTCACGCGG GCAACCTTCC GAAGCGCCGA300GTTCGGCTTC TTCGGAGTGG TGGCTCGTGC CG 332(2)SEQ ID NO:310的信息(ⅰ)序列特征(A)长度962碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:310:AATTCGGCAC RAGTCGGTCT AGACGGATTC AATGCTCCCG CGAGCACCTC GCCACTGCAC 60ACCCTGCAGC AAAATGTGCT CAATGTGGTG AACGAGCCCT TCCAGACGCT CACCGGCCGC120CCGCTGATCG GCAACGGCGC CAACGGGACT CCTGGAACCG GGGCTGACGC GGGGCCGGCG180GGTGGCTGTT CGGCAACGGC GGCAACGGCG GGTCCGGGGC GAACGGAACC AACGGCGGGG240ACGTGGGGAC GCGCCCGGCG GGATTTCTTC GCACCGGSGC ACCGGCGGGG CCGGCGGCGT300CGCACAACGG CACCGGCGGG GACGCNGCGC CCGTNGGGCG GCTTCTKGAT GGGCTCCGGC360GGTNACGCGG CACGGCGGCG CCCGGCTCAC CGCCNGTTGG GACGCGGGGA CGCGTNACCC420CGATCTTCTT CCGCNCCCCG GAAACCGCGG GGCCGGCCCC ACATTAKACC CGGCGGNACC480GCGGMCCCGG CGGAACGGNG GGYNTTTTCC AACGGCGGGG CCGCGGAACC GNMGGSTGTT540CCTTNGGSGA AGGNCCAAKT CCCGKCTANC YYAATCCCCG ANGGKTGAMC CTSATGSNCA600MYTTMAGGAA CYTNCCCANT KTTSGRACCW CRCCNGGAAA ASRAWNKNGT KGGCAAACNA660NNTNCYTTKN NATTKGGNNA AAAANCCCTY CCWCSGRACT NCCCCCCNGM GRGMCNNTNN720NTTTYGNCNN CCCGGSNAAM RNTTKATTTC NGGGGGNTCN GGGTKMNNNA AACCCCAAAM780MNRNNKCSCA ANGGGKSNGC NKNNMMNSGT TTTYCKNMRA MRNWTYKNKN NTCNGARSRN840NAAMCNNSNK NGKKKNNKAA ARNNTTWKTN KNSCNNNCNN GRRNGVRGGC CKMKGSNMNG900MCWHNAWRNG NNGSNCNCKC NNKMNAAAAA AASGGVNCKS NSMKNKKKKG NRGGGGGGGG960GG 962(2)SEQ ID NO:311的信息(ⅰ)序列特征(A)长度323碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:311:AATTCGGCAC RAGAAGACGC CCGAANGTTT GCGCTGGCTC TACAACTTCA TCAARGCGCA 60GGGGGAACGC AACTTCGGCA AGATCTACGT TCGCTTCCCC GAAGCGGTCT CGATGCGCCA120GTACCTCGGC GCACCGCACG GCGAGCTGAC CCAGGATCCG GCCGCGAAAC GGCTTGCGTT180GCAGAAGATG TCGTTCGAGG TGGCCTGGAG GATTTTGCAN GCGACGCCNG TGACCGCGAC240GGGTTTKGTG TCCGCACTGC TGCTCACCAC CCGCGGCACC GCGTTGACCT CGACCAGCTG300CACCACTCGT GCCGCTCGTG CCG323(2)SEQ ID NO:312的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1034碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性
(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:312:AATTCGCAGT GTGTGTGGCG GCGTCCAGAA GAAGATGATC GCGAACATCG CCAGCGCCGG 60CCAGGCTATG GTGCCGGTGA TGGCCGACCA GCCGATCATC ACCGGCATAC AGCCGGCCGC120CCCACCCCAC ACCACGTTCT GTGACGTGCG TCGCTTGAGC CAAAGCGTGT AGACRAACAC180ATAAAACGCG ACGGTGACCA GGGCCAGCAC CCCCGCCAGC AGGTTCGTGG CGCACCATAG240CCAGAAGAAC GAGATCACCG TCNACGTCAC CCGAGTGCCA ACGCGTTTCG GGTCGGCACC300GCTTCCCGCG CCAAGGGCCG GCGCGCGGTT CGCTTCATCA CCTTGTCGAT ATCGGCGTCG360GCNACCAGTT GAGCGTGTTG GCGCCGGCGG CSGCCATCAT CCCGCCGACN ANCGTGTTGA420GCATGANCAG CGGATGAATG GCGCCGCGGC TCGTGCCGCT CGTGCCGAAT TCAACTCCGT480CNACAACTTG CGGNCGCACT CGAACCCGGG TGAATGAWTG AATTTAAACC GSTSAACANT540AACTACATAA CCCTTGGGGG CTCTTAACCG GTYYTGAANG GGTTTTTTGC TTAAAGGAAG600AACYATTTCC GGATANCTGG CSTTNWTARC GAAAAGGCCC CRCCCATNGC CCTCCACAGT660TTSCCCCTGA ATGGSAATGG MNCNCCYKNR CNGGGNCTTT AACRCSGGCG GGNTTTTGKT720MCCCNNCTKA CNTTMMMTGC ARNNCNGGCC SKCCCTTCCK TNTYCCCTCC NTCCCCCNST780TNCNGKTCCC CNNAMNYTNW ACGGGGGGCC YTNGGGKCRM TWTKKTTTGG GCCCCMCCCC840MAAANASAAN GGGGKRNGTY CSTTTGGCNC CCCAMAARGG NYCCCCCCAM YTNRRKMCSY900CNNTNKGGNN CTGTNCKNCG GAARAMAMCC KCCCCGNSTS STTNGTYWAG GNRWKGNSRG960CCSCCCCGGY MNNNAAYAWN WMNATNCNNS STNANMAKKN NNNNNNNSCN WNGNGNNTCN 1020SCNSNGGKBC CSCC 1034(2)SEQ ID NO:313的信息(ⅰ)序列特征(A)长度331碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:313:AATTCGGCAC GAGCCCACAT CCGGGGCCGC TCGTTGCATG ACTCGTTCGT CATCGTCGAC 60RAGGCACAGT CGCTGGAGCG CAATGTGTTG CTGACCGTGC TGTCCCGGTT GGGGACCGGT120TCCCGGGTGG TGTTGACCCA CGACATCGCC CAGCGCGACA ACCTGCGGGT CGGCCGCCAC180GACGGGTCGC CGCGGTGATC GAGAAGCTCA AAGGTCATCC GTTGTTCGCC CACATCACCT240TGCTGCGCAG TGAGCGCTCG CCGATCGCCG CGCTGGTCAC GAGATGCTCG ANGAGATCAC300CGGGCCGCGC TGAGTGCGCC TCCCGCGAGC A 331(2)SEQ ID NO:314的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1026碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA
(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:314:AATTCGGCAC GAGATCGTCA CCCTGGCGAC CAGTGCACCC AGGCCACGCC ACCAGTTACG 60GCTGATGGGC CAGAAGATGG ACCAGGTGCT GCCCATCCCG CCCACCGCAC TGCAGCTGAG120CACCGGGATC GCGGTCCTCA GCTACGGCGA TRAGCTGGTG TTCGGCATCA CCGCTGACTA180TGACGCCGCG TCCGAAATGC AGCAGCTGGT CAACGGTATC GAACTGGGTG TGGCGCGTCT240GGTGGCGCTC ANCGACAATT CCGTGCTGCT GTTTACAAGG ATCGGCSTAA GCGTTCATCC300CGCGCACTCC CCANCGCCGC GCGGCSGGGG CGGCCCTCTG TGCCGACCGC CCGAGCGCGT360CACTGACGCC ATCTCCGTCG GCGTTAACCC CGTGAGAAGG TGGGTCGTGC GCAAGTTGGG420CCCGGTCACC ATCNATCCGC GCCGCCATGA CGCNGTGCTG TTCCACACCA CNTSNGACNC480CCCCCAGGAA CTGGTCCGGC AMTNCAGGAA NTYCGTGTGG GCACCNGCTT CTTCCGKTRT540GGCYTAAACT TCCNATSTTN CSGCSGGCCT CTGGCGTTNC GNCCGGGCCG NTCTTNCCAA600ATCGGSMMAA ATCCCCANMC AAACCCCCCG GGTCTTGSGG GCSGGGNGGC GGCCNAWNCC660AAACCCCCCC NTTAAANTCT TTGKTNCCNN CNCSGGCNCC NCNAANSCAN CCCTTTKGGC720NCTTCCCCCC CCCAWTTTAA CCGAKCGSCN AAYCCCAAGY TMMGKCCYCY KNAAAAAAAA780AATTTGSCSG CCCCAANTAA ATTCCCNGGC CCYTTGGGGG CGRANCNYNT TTTMCCSNSS840TKGNNNAAMC NGGANCCSGG KAAYTMMTKG NAAYCGCCSN AAMBNTTTTC TAANNCCCCN900YNCCCSGAAA ATTNNAMAAM CMNNKTGSNG GGGGKTTSNC SGKKGRAGGM AAAAAANRSN960SKTTNMCNNN SANMNCNSNN SGGNSNNNNN NNNCNCGYKC CSNAANMCCC CGCGGGGGGG 1020CCMMCC 1026(2)SEQ ID NO:315的信息(ⅰ)序列特征(A)长度324碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:315:AATTCGGCAC GAGAAGACGC CCGARNGTST GCGCTGGCTC TACAACTTCA TCAARGCGCA 60NGGGGAACGC AACTTCGGCA AGATCTACGT TCGCTTCCCC GAAGCGGTCT CGATGCGCCA120GTACCTCGGC GCACCGCACG GCGAGCTGAC CCAGGATCCG GCCGCGAAAC GGCTTGCGTT180GCAGAAGATG TCGTTCGAGG TGGCCTGGAN GATTTTGCAN GCGACGCCNG TNACCGCGAC240GGGTTTKGTG TCCGCACTGC TGCTCACCAC CCGCSGCACC GCGTTGACGC TCGACCAGCT300GCACCACTCG TGCCGCTCGT GCCG 324(2)SEQ ID NO:316的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1010碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:316:AATTCGGCAC GANGCGTGCC GCTNAACACC AGCCCGCGGC TGCCAGATAT CCCGGACTCG60GTAGTGCCGC CGGTGGCGTC GTTGCTCTCC TGACGGGGCG CGGCGACCAT AAGGTCGCTM120ATGCCCAGGT AGCGGCCCAG GTGCATGGAG TCGATGATGA TGCGACTCTC CAGCTCGCCG180ACCGGGAGCT TGGCATCGGG CCTGATCAGC CAGGACGCGT AGGACAAGTC GATCGAATGC240ATAGTGGCCT CCAGAGTGGC CGTGCAMTTC CNGCGTGCTC CACGGCAAAT GCCTTGATTT300CTACTCCGCG TANTGTTCCC GCATCGCCTG CGGGATGAAT GGGAACCGCA SGATGGCGAC360GAACGGGTCT GANCTCAGGT TTGCCGCTTT GCGCACAGTG GTCNACANCC GGTACTCGGC420ATANATCTGG CCCNAAATCG GCGCCGACGG CGCCCACNAT AANAACGGGC ACNACAATCG480CCGCCCCGGT CACCCNAACA ACANCTTGSC ATCGGATTTT GTCCCCANCG CTCAANCCGT540CCCGAACGCC TCNTCCGGCG NACTTTTCTT NNAWTAACTG CCGCTTCCGK CCCTGGNGCA600WTAAATGGGA AACCCTTNCC CCACCTTGAA GGGGTTGTTG NATTTTTACT GSTAACCCCG660AATTNTTCCG GANTCGGTCN KCCGGGSTTT YSTNTTCCCC ACCTTNGNAN GGGCCGGCCA720AGSTTTTCTT SYTGAAGGGG GAAACCCAAC TTTNTYTYYN AACCSCMNAA MYMTTTYCSG780MNAASCCNKT CCCCTTTAAC CAMGGSGGTN AACCGKTMNG NGGKTAAAAA GGGSKNNKTG840NCCCCYMANG GGGGGRAAAA TSTKTCNNCG GGGCCKAAAW ACCMMMMYGN GTGKKKNKSS900GCSAAATTTT NMMRAACTKN GGGGCCSSGA NNTTTNAAAG MSCCCCCSNN GSTGKCCCNN960NTTTCCNNAA WMKKGKNWNM SNMNSCSNGG GKYNSGGSNN NNAAGMGGGG 1010(2)SEQ ID NO:317的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1010碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型基因组DNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:317:AATTCGGCAC GANGCGTGCC GCTNAACACC AGCCCGCGGC TGCCAGATAT CCCGGACTCG 60GTAGTGCCGC CGGTGGCGTC GTTGCTCTCC TGACGGGGCG CGGCGACCAT AAGGTCGCTM120ATGCCCAGGT AGCGGCCCAG GTGCATGGAG TCGATGATGA TGCGACTCTC CAGCTCGCCG180ACCGGGAGCT TGGCATCGGG CCTGATCAGC CAGGACGCGT AGGACAAGTC GATCGAATGC240ATAGTGGCCT CCAGAGTGGC CGTGCAMTTC CNGCGTGCTC CACGGCAAAT GCCTTGATTT300CTACTCCGCG TANTGTTCCC GCATCGCCTG CGGGATGAAT GGGAACCGCA SGATGGCGAC360GAACGGGTCT GANCTCAGGT TTGCCGCTTT GCGCACAGTG GTCNACANCC GGTACTCGGC420ATANATCTGG CCCNAAATCG GCGCCGACGG CGCCCACNAT AANAACGGGC ACNACAATCG480CCGCCCCGGT CACCCNAACA ACANCTTGSC ATCGGATTTT GTCCCCANCG CTCAANCCGT540CCCGAACGCC TCNTCCGGCG NACTTTTCTT NNAWTAACTG CCGCTTCCGK CCCTGGNGCA600WTAAATGGGA AACCCTTNCC CCACCTTGAA GGGGTTGTTG NATTTTTACT GSTAACCCCG660AATTNTTCCG GANTCGGTCN KCCGGGSTTT YSTNTTCCCC ACCTTNGNAN GGGCCGGCCA720AGSTTTTCTT SYTGAAGGGG GAAACCCAAC TTTNTYTYYN AACCSCMNAA MYMTTTYCSG780MNAASCCNKT CCCCTTTAAC CAMGGSGGTN AACCGKTMNG NGGKTAAAAA GGGSKNNKTG840NCCCCYMANG GGGGGRAAAA TSTKTCNNCG GGGCCKAAAW ACCMMMMYGN GTGKKKNKSS900GCSAAATTTT NMMRAACTKN GGGGCCSSGA NNTTTNAAAG MSCCCCCSNN GSTGKCCCNN960NTTTCCNNAA WMKKGKNWNM SNMNSCSNGG GKYNSGGSNN NNAAGMGGGG 1010(2)SEQ ID NO:318的信息(ⅰ)序列特征
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(2)SEQ ID NO:347的信息(ⅰ)序列特征(A)长度34碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型其它(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:347:GGATCCAAAC CACCGAGCGG TTCGCCTGAA ACGG 34(2)SEQ ID NO:348的信息(ⅰ)序列特征(A)长度37碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型其它(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:348:CGCTGCGAAT TCACCTCCGG AGGAAATCGT CGCGATC 37(2)SEQ ID NO:349的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1962碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:349:CATATGGGCC ATCATCATCA TCATCACGGA TCCAAACCAC CGAGCGGTTC GCCTGAAACG 60GGCGCCGGCG CCGGTACTGT CGCGACTACC CCCGCGTCGT CGCCGGTGAC GTTGGCGGAG120ACCGGTAGCA CGCTGCTCTA CCCGCTGTTC AACCTGTGGG GTCCGGCCTT TCACGAGAGG180TATCCGAACG TCACGATCAC CGCTCAGGGC ACCGGTTCTG GTGCCGGGAT CGCGCAGGCC240GCCGCCGGGA CGGTCAACAT TGGGGCCTCC GACGCCTATC TGTCGGAAGG TGATATGGCC300GCGCACAAGG GGCTGATGAA CATCGCGCTA GCCATCTCCG CTCAGCAGGT CAACTACAAC360CTGCCCGGAG TGAGCGAGCA CCTCAAGCTG AACGGAAAAG TCCTGGCGGC CATGTACCAG420GGCACCATCA AAACCTGGGA CGACCCGCAG ATCGCTGCGC TCAACCCCGG CGTGAACCTG480CCCGGCACCG CGGTAGTTCC GCTGCACCGC TCCGACGGGT CCGGTGACAC CTTCTTGTTC540ACCCAGTACC TGTCCAAGCA AGATCCCGAG GGCTGGGGCA AGTCGCCCGG CTTCGGCACC600ACCGTCGACT TCCCGGCGGT GCCGGGTGCG CTGGGTGAGA ACGGCAACGG CGGCATGGTG660ACCGGTTGCG CCGAGACACC GGGCTGCGTG GCCTATATCG GCATCAGCTT CCTCGACCAG720GCCAGTCAAC GGGGACTCGG CGAGGCCCAA CTAGGCAATA GCTCTGGCAA TTTCTTGTTG780CCCGACGCGC AAAGCATTCA GGCCGCGGCG GCTGGCTTCG CATCGAAAAC CCCGGCGAAC840CAGGCGATTT CGATGATCGA CGGGCCCGCC CCGGACGGCT ACCCGATCAT CAACTACGAG900TACGCCATCG TCAACAACCG GCAAAAGGAC GCCGCCACCG CGCAGACCTT GCAGGCATTT960CTGCACTGGG CGATCACCGA CGGCAACAAG GCCTCGTTCC TCGACCAGGT TCATTTCCAG 1020CCGCTGCCGC CCGCGGTGGT GAAGTTGTCT GACGCGTTGA TCGCGACGAT TTCCTCCGGA 1080GGTGGCAGTG GGGGAGGCTC AGGTGGAGGT TCTGGCGGGA GCGTGCCCAC AACGGCCGCC 1140TCGCCGCCGT CGACCGCTGC AGCGCCACCC GCACCGGCGA CACCTGTTGC CCCCCCACCA 1200CCGGCCGCCG CCAACACGCC GAATGCCCAG CCGGGCGATC CCAACGCAGC ACCTCCGCCG 1260GCCGACCCGA ACGCACCGCC GCCACCTGTC ATTGCCCCAA ACGCACCCCA ACCTGTCCGG 1320ATCGACAACC CGGTTGGAGG ATTCAGCTTC GCGCTGCCTG CTGGCTGGGT GGAGTCTGAC 1380GCCGCCCACT TCGACTACGG TTCAGCACTC CTCAGCAAAA CCACCGGGGA CCCGCCATTT 1440CCCGGACAGC CGCCGCCGGT GGCCAATGAC ACCCGTATCG TGCTCGGCCG GCTAGACCAA 1500AAGCTTTACG CCAGCGCCGA AGCCACCGAC TCCAAGGCCG CGGCCCGGTT GGGCTCGGAC 1560ATGGGTGAGT TCTATATGCC CTACCCGGGC ACCCGGATCA ACCAGGAAAC CGTCTCGCTC 1620GACGCCAACG GGGTGTCTGG AAGCGCGTCG TATTACGAAG TCAAGTTCAG CGATCCGAGT 1680AAGCCGAACG GCCAGATCTG GACGGGCGTA ATCGGCTCGC CCGCGGCGAA CGCACCGGAC 1740GCCGGGCCCC CTCAGCGCTG GTTTGTGGTA TGGCTCGGGA CCGCCAACAA CCCGGTGGAC 1800AAGGGCGCGG CCAAGGCGCT GGCCGAATCG ATCCGGCCTT TGGTCGCCCC GCCGCCGGCG 1860CCGGCACCGG CTCCTGCAGA GCCCGCTCCG GCGCCGGCGC CGGCCGGGGA AGTCGCTCCT 1920ACCCCGACGA CACCGACACC GCAGCGGACC TTACCGGCCT GA 1962(2)SEQ ID NO:350的信息(ⅰ)序列特征(A)长度652氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)序列描述SEQ ID NO:350:Met Gly His His His His His His Gly Ser Lys Pro Pro Ser Gly Ser1 51015Pro Glu Thr Gly Ala Gly Ala Gly Thr Val Ala Thr Thr Pro Ala Ser20 25 30Ser Pro Val Thr Leu Ala Glu Thr Gly Ser Thr Leu Leu Tyr Pro Leu35 40 45Phe Asn Leu Trp Gly Pro Ala Phe His Glu Arg Tyr Pro Asn Val Thr50 55 60Ile Thr Ala Gln Gly Thr Gly Ser Gly Ala Gly Ile Ala Gln Ala Ala65 70 75 80Ala Gly Thr Val Asn Ile Gly Ala Ser Asp Ala Tyr Leu Ser Glu Gly85 90 95Asp Mer Ala Ala His Lys Gly Leu Met Asn Ile Ala Leu Ala Ile Ser100 105 110Ala Gln Gln Val Asn Tyr Asn Leu Pro Gly Val Ser Glu His Leu Lys115120125Leu Asn Gly Lys Val Leu Ala Ala Met Tyr Gln Gly Thr Ile Lys Thr130135140Trp Asp Asp Pro Gln Ile Ala Ala Leu Asn Pro Gly Val Asn Leu Pro145 150 155 160Gly Thr Ala Val Val Pro Leu His Arg Ser Asp Gly Ser Gly Asp Thr165 170 175Phe Leu Phe Thr Gln Tyr Leu Ser Lys Gln Asp Pro Glu Gly Trp G1y180 185 190Lys Ser Pro GIy Phe Gly Thr Thr Val Asp Phe Pro Ala Val Pro Gly195 200 205Ala Leu Gly Glu Asn Gly Asn Gly Gly Met Val Thr Gly Cys Ala Glu210 215 220Thr Pro Gly Cys Val Ala Tyr Ile Gly Ile Ser Phe Leu Asp Gln Ala225 230 235 240Ser Gln Arg Gly Leu Gly Glu Ala Gln Leu Gly Asn Ser Ser Gly Asn245 250 255Phe Leu Leu Pro Asp Ala Gln Ser Ile Gln Ala Ala Ala Ala Gly Phe260 265 270Ala Ser Lys Thr Pro Ala Asn Gln Ala Ile Ser Met Ile Asp Gly Pro275 280 285Ala Pro Asp Gly Tyr Pro Ile Ile Asn Tyr Glu Tyr Ala Ile Val Asn290 295 300Asn Arg Gln Lys Asp Ala Ala Thr Ala Gln Thr Leu Gln Ala Phe Leu305 310 315 320His Trp Ala Ile Thr Asp Gly Asn Lys Ala Ser Phe Leu Asp Gln Val325 330 335His Phe Gln Pro Leu Pro Pro Ala Val Val Lys Leu Ser Asp Ala Leu340 345 350Ile Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly355 360 365Gly Ser Gly Gly Ser Val Pro Thr Thr Ala Ala Ser Pro Pro Ser Thr370 375 380Ala Ala Ala Pro Pro Ala Pro Ala Thr Pro Val Ala Pro Pro Pro Pro385 390 395 400Ala Ala Ala Asn Thr Pro Asn Ala Gln Pro Gly Asp Pro Asn Ala Ala405 410 415Pro Pro Pro Ala Asp Pro Asn Ala Pro Pro Pro Pro Val Ile Ala Pro420 425 430Ash Ala Pro Gln Pro Val Arg Ile Asp Asn Pro Val Gly Gly Phe Ser435 440 445Phe Ala Leu Pro Ala Gly Trp Val Glu Ser Asp Ala Ala His Phe Asp450 455 460Tyr Gly Ser Ala Leu Leu Ser Lys Thr Thr Gly Asp Pro Pro Phe Pro465 470 475 480Gly Gln Pro Pro Pro Val Ala Asn Asp Thr Arg Ile Val Leu Gly Arg485 490 495Leu Asp Gln Lys Leu Tyr Ala Ser Ala Glu Ala Thr Asp Ser Lys Ala500 505 510Ala Ala Arg Leu Gly Ser Asp Met Gly Glu Phe Tyr Met Pro Tyr Pro515 520 525Gly Thr Arg Ile Asn Gln Glu Thr Val Ser Leu Asp Ala Asn Gly Val530 535 540Ser Gly Ser Ala Ser Tyr Tyr Glu Val Lys Phe Ser Asp Pro Ser Lys545 550 555 560Pro Asn Gly Gln Ile Trp Thr Gly Val Ile Gly Ser Pro Ala Ala Asn565 570 575Ala Pro Asp Ala Gly Pro Pro Gln Arg Trp Phe Val Val Trp Leu Gly580 585 590Thr Ala Asn Ash Pro Val Asp Lys Gly Ala Ala Lys Ala Leu Ala Glu595 600 605Ser Ile Arg Pro Leu Val Ala Pro Pro Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro610 615 620Ala Glu Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Gly Glu Val Ala Pro Thr625 630 635 640Pro Thr Thr Pro Thr Pro Gln Arg Thr Leu Pro Ala645 650
权利要求
1．一种多肽，它含有可溶性结核分枝杆菌抗原的抗原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的所述抗原的变体，其中所述抗原具有选自下列的N-端序列(a)Asp-Pro-Val-Asp-Ala-Val-Ile-Asn-Thr-Thr-Cys-Asn-Tyr-Gly-Gln-Val-Val-Ala-Ala-Leu(SEQ ID NO:115)；(b)Ala-Val-Glu-Ser-Gly-Met-Leu-Ala-Leu-Gly-Thr-Pro-Ala-Pro-Ser(SEQ ID NO:116)；(c)Ala-Ala-Met-Lys-Pro-Arg-Thr-Gly-Asp-Gly-Pro-Leu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Gly-Arg(SEQ ID NO:17)；(d)Tyr-Tyr-Trp-Cys-Pro-Gly-Gln-Pro-Phe-Asp-Pro-Ala-Trp-Gly-Pro(SEQ ID NO:118)；(e)Asp-Ile-Gly-Ser-Glu-Ser-Thr-Glu-Asp-Glu-Glu-Xaa-Ala-Val(SEQ IDNO:119)；(f)Ala-Glu-Glu-Ser-Ile-Ser-Thr-Xaa-Glu-Xaa-Ile-Val-Pro(SEQ IDNO:120)；(g)Asp-Pro-Glu-Pro-Ala-Pro-Pro-Val-Pro-Thr-Thr-Ala-Ala-Ser-Pro-Pro-Ser(SEQ ID NO:121)；(h)Ala-Pro-Lys-Thr-Tyr-Xaa-Glu-Glu-Leu-Lys-Gly-Thr-Asp-Thr-Gly(SEQ ID NO:122)；(i)Asp-Pro-Ala-Ser-Ala-Pro-Asp-Val-Pro-Thr-Ala-Ala-Gln-Leu-Thr-Ser-Leu-Leu-Asn-Ser-Leu-Ala-Asp-Pro-Asn-Val-Ser-Phe-Ala-Asn(SEQID NO:123)；和(j)Ala-Pro-Glu-Ser-Gly-Ala-Gly-Leu-Gly-Gly-Thr-Val-Gln-Ala-Gly；(SEQ ID NO:131)其中Xaa可以是任何氨基酸。
2．一种多肽，它包含结核分枝杆菌抗原的免疫原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的所述抗原的变体，其中所述抗原具有选自下列的N-端序列(a)Asp-Pro-Pro-Asp-Pro-His-Gln-Xaa-Asp-Met-Thr-Lys-Gly-Tyr-Tyr-Pro-Gly-Gly-Arg-Arg-Xaa-Phe；(SEQ ID NO:124)和(b)Xaa-Tyr-Ile-Ala-Tyr-Xaa-Thr-Thr-Ala-Gly-Ile-Val-Pro-Gly-Lys-Ile-Asn-Val-His-Leu-Val；(SEQ ID NO:132)其中Xaa可以是任何氨基酸。
3．一种多肽，它含有可溶性结核分枝杆菌抗原的抗原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的所述抗原的变体，其中所述抗原包含由DNA序列编码的氨基酸序列，该DNA序列选自SEQ ID NO:1、2、4-10、13-25、52、94和96中描述的序列、所述序列的互补序列、以及在中等严谨条件下与SEQ ID NO:1、2、4-10、13-25、52、94和96中描述的序列或其互补序列杂交的DNA序列。
4．一种多肽，它包含结核分枝杆菌抗原的抗原性部分，或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的所述抗原的变体，其中所述抗原包含由DNA序列编码的氨基酸序列，该DNA序列选自SEQ ID NO:26-51、133、134、158-178、196、235、237-242、248-251、290-293、304、311、313-315、317、319、323、324、328、330、332、334和336中描述的序列、所述序列的互补序列、以及在中等严谨条件下与SEQ ID NO:26-51、133、134、158-178、196、235、237-242、248-251、290-293、304、311、313-315、317、319、323、324、328、330、332、334和336中描述的序列或其互补序列杂交的DNA序列。
5．一种DNA分子，它包含编码权利要求1-4任一项所述的多肽的核苷酸序列。
6．一种重组表达载体，它含有权利要求5所述的DNA分子。
7．一种被权利要求6所述的表达载体转化的宿主细胞。
8．根据权利要求7所述的宿主细胞，其中宿主细胞选自大肠杆菌、酵母和哺乳动物细胞。
9．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使权利要求1-4任一项所述的一种或多种多肽与生物样品接触；和(b)检测样品中结合至少一种多肽的抗体的存在，从而检测生物样品中的结核分枝杆菌感染。
10．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使生物样品与具有选自序列SEQ ID NO:129和130的N-端序列的多肽接触；和(b)检测样品中结合至少一种多肽的抗体的存在，从而检测生物样品中的结核分枝杆菌感染。
11．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使生物样品与一种或多种由DNA序列编码的多肽接触，所述DNA序列选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的序列、所述序列的互补序列、以及与SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的序列杂交的DNA序列。(b)检测样品中结合至少一种多肽的抗体的存在，从而检测生物样品中结核分枝杆菌的感染。
12．根据权利要求9-11任一项所述的方法，其中步骤(a)还包括使生物样品与38kD结核分枝杆菌抗原接触，步骤(b)还包括检测样品中结合38kD结核分枝杆菌抗原的抗体的存在。
13．根据权利要求9-11任一项所述的方法，其中多肽与固相载体结合。
14．根据权利要求13所述的方法，其中固相载体包括硝酸纤维素、胶乳或塑料材料。
15．根据权利要求9-11任一项所述的方法，其中生物样品选自全血、血清、血浆、唾液、脑脊液和尿液。
16．根据权利要求15所述的方法，其中生物样品是全血或血清。
17．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使样品在聚合酶链反应中与至少两种寡核苷酸引物接触，其中至少一种寡核苷酸引物对权利要求5所述的DNA分子有特异性；和(b)检测样品中的在寡核苷酸引物存在下扩增的DNA序列，从而检测结核分枝杆菌感染。
18．根据权利要求17所述的方法，其中至少一种寡核苷酸引物包含权利要求5所述的DNA分子的至少10个连续的核苷酸。
19．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使样品在聚合酶链反应中与至少两种寡核苷酸引物接触，其中至少一种寡核苷酸引物对选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列有特异性；和(b)检测样品中的在第一和第二寡核苷酸引物存在下扩增的DNA序列，从而检测结核分枝杆菌感染。
20．根据权利要求19所述的方法，其中至少一种寡核苷酸引物包含选自SEQ IDNO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列的至少10个连续的核苷酸。
21．根据权利要求17至19所述的方法，其中生物样品选自全血、痰液、血清、血浆、唾液、脑脊液和尿液。
22．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使样品与对权利要求5所述的DNA分子有特异性的一种或多种寡核苷酸探针接触；和(b)检测样品中与寡核苷酸探针杂交的DNA序列，从而检测结核分枝杆菌感染。
23．根据权利要求22所述的方法，其中探针包含权利要求5所述的DNA分子的至少15个连续的核苷酸。
24．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使样品与对选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列有特异性的一种或多种寡核苷酸探针接触；和(b)检测样品中与寡核苷酸探针杂交的DNA序列，从而检测结核分枝杆菌感染。
25．根据权利要求24所述的方法，其中寡核苷酸探针包含选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列的至少15个连续的核苷酸。
26．根据权利要求22或24所述的方法，其中生物样品选自全血、痰液、血清、血浆、唾液、脑脊液和尿液。
27．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使生物样品与能结合权利要求1-4任一项所述多肽的结合剂接触；和(b)检测样品中与结合剂结合的蛋白质或多肽，从而检测生物样品中的结核分枝杆菌感染。
28．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使生物样品与能结合多肽的结合剂接触，所述多肽具有选自SEQ ID NO:129和130所提供序列的N-端序列；和(b)检测样品中与结合剂结合的蛋白质或多肽，从而检测生物样品中的结核分枝杆菌感染。
29．一种检测生物样品中结核分枝杆菌感染的方法，该方法包括(a)使生物样品与能结合多肽的结合剂接触，编码该多肽的DNA序列选自SEQID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列，所述序列的互补序列，以及与SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337中描述的序列杂交的DNA序列；和(b)检测样品中与结合剂结合的蛋白或多肽，从而检测生物样品中的结核分枝杆菌感染。
30．根据权利要求27至29任一项所述的方法，其中结合剂是单克隆抗体。
31．根据权利要求27至29任一项所述的方法，其中结合剂是多克隆抗体。
32．一种诊断试剂盒，它包含(a)一种或多种权利要求1-4任一项所述的多肽；和(b)检测剂。
33．一种诊断试剂盒，它包含(a)具有选自SEQ ID NO:129和130所提供序列的N-端序列的一种或多种多肽；和(b)检测剂。
34．一种诊断试剂盒，它包含(a)一种或多种由DNA序列编码的多肽，该DNA序列选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337，所述序列的互补序列，以及与SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337中描述的序列杂交的DNA序列；和(b)检测剂。
35．根据权利要求32-34任一项所述的试剂盒，其中多肽固定在固相载体上。
36．根据权利要求35所述的试剂盒，其中固相载体包括硝酸纤维素、胶乳或塑料材料。
37．根据权利要求32-34任一项所述的试剂盒，其中检测剂包含与结合剂偶联的报道基团。
38．根据权利要求37所述的试剂盒，其中结合剂选自抗免疫球蛋白、蛋白G、蛋白A和凝集素。
39．根据权利要求37所述的试剂盒，其中报道基团选自放射性同位素、荧光基团、发光基团、酶、生物素、染料颗粒和胶粒。
40．一种诊断试剂盒，它包含至少两种寡核苷酸引物，至少一种寡核苷酸引物对权利要求5所述的DNA分子有特异性。
41．根据权利要求40所述的诊断试剂盒，其中至少一种寡核苷酸引物包含权利要求5所述的DNA分子的至少10个连续的核苷酸。
42．一种诊断试剂盒，它包含至少两种寡核苷酸引物，至少一种引物对选自SEQID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列有特异性。
43．根据权利要求42所述的诊断试剂盒，其中至少一种寡核苷酸引物包含选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列的至少10个连续的核苷酸。
44．一种诊断试剂盒，它包含至少一种寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针对权利要求5所述的DNA分子有特异性。
45．根据权利要求44所述的试剂盒，其中寡核苷酸探针包含权利要求5所述的DNA分子的至少15个连续的核苷酸。
46．一种诊断试剂盒，它包含至少一种寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针对选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列有特异性。
47．根据权利要求46所述的试剂盒，其中寡核苷酸探针包含选自SEQ ID NO:3、11、12、135、136、151-155、184-188、194-195、198、210-220、232、234、256-271、287、288、298-303、305-310、312、316、318、320-322、325-327、329、331、333、335和337的DNA序列的至少15个连续的核苷酸。
48．一种单克隆抗体，它与权利要求1-4任一项所述的多肽结合。
49．一种多克隆抗体，它与权利要求1-4任一项所述的多肽结合。
50．一种融合蛋白，它包含两种或多种权利要求1-4任一项所述的多肽。
51．一种融合蛋白，它包含一种或多种权利要求1-4任一项所述的多肽以及ESAT-6即SEQ ID NO:99。
52．一种融合蛋白，它包含具有选自SEQ ID NO:129和130所提供序列的N-端序列的多肽。
53．一种融合蛋白，它包含一种或多种权利要求1-4任一项所述的多肽以及结核分枝杆菌抗原38kD即SEQ ID NO:150。
54．一种诊断试剂盒，它包含(a)权利要求50-53任一项所述的一种或多种融合蛋白；和(b)检测剂。
全文摘要
本发明提供了一种多肽,它含有可溶性结核分枝杆菌抗原的抗原性部分,或仅仅在保守性置换和/或修饰中有所不同的所述抗原的变体。本发明还提供了编码这些多肽的DNA分子,这些多肽和DNA分子用于检测生物样品中结核分枝杆菌感染的用途,以及含有这些多肽和DNA分子的试剂盒。
文档编号G01N33/569GK1312723SQ99809541
公开日2001年9月12日 申请日期1999年2月17日 优先权日1998年2月18日
发明者S·G·里德, Y·A·W·斯凯基, D·C·狄龙, A·坎波斯－内托, R·霍顿, T·S·韦德维克, D·R·特德齐克, M·J·洛德斯, R·C·亨德里克森 申请人:考丽克萨有限公司