一种大叶千斤拔的质量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及中药的质量检测方法，具体设及一种大叶千斤拔的质量检测方法。
【背景技术】
[000引大叶千斤拔为蝶形花科千斤拔属大叶千斤拔Flemingia macrophylla(Willd.) Prain.的干燥根，为云南、湖南、广西、广东等省的常用中药，其中湖南、广西地方标准记载 有千斤拔的原植物大叶千斤拔的质量标准仅有药材性状描述及显微特征记录，该对开发新 药有很大程度的影响。
[0003] 大叶千斤拔属植物主要含有黄酬、祗、酱类等成分，其中W黄酬类物质为主，大部 分是异黄酬，而其中更是W异戊締基取代的异黄酬类化合物占大多数。
[0004] 近年来，随着研究的深入大叶千斤拔药材越来越多应用于临床的各种制剂，其表 现很强的药理活性，主要有抗炎止痛，降血糖，抗癌，促骨髓细胞生成作用，免疫调节作用， 抗追疾，抗菌，收缩子宫平滑肌等方面。
[0005] 大叶千斤拔药材在作为治疗妇科疾病药物中原药材应用已广泛推广，并投入工业 生产多年。申请人的主导品种妇科千金片中的君药就W大叶千斤拔入药，效果显著，产品受 到广泛消费者的亲睐。
[0006] 大叶千斤拔尽管药用历史悠久，临床应用广泛，但一直W来对其有效成分缺乏系 统研究，其质量缺乏有效的控制标准，阻碍了大叶千斤拔的深入开发利用。
[0007] 现有文献中对大叶千斤拔的研究报道不多，现有文献中报道了染料木巧、染料木 素，在大叶千斤拔中是活性较强的黄酬类化合物。
[000引《染料木巧对FFAs诱导的化pG2细胞膜岛素抵抗的影响》，中西医结合研究2010年 8月底2卷第4期，报道了，染料木巧具有改善膜岛素抵抗的作用等药理活性。
[0009] 《燃料木素的药理作用》，药学与临床研究2010.化n ; 18(3)，报道了，染料木素能显 著降低去卵巢大鼠总胆固醇及肝胆固醇的含量，并能有效防治慢性缺氧性动脉高压，并报 道染料木素具有较强的氧化应急损伤保护作用等药理活性。
[0010] 因此，对大叶千斤拔的深入开发利用，寻找简便、高效的质量检测方法，提高其入 药的药效，提高药品质量的可控性，降低成本是申请人要解决的一大难题。
[0011] 有关千斤拔质量检测方法的报道如下：
[0012] 《=种千斤拔的化学成分预分析和薄层鉴定》，西南民族大学学报.自然科学报公 开了薄层色谱分析方法，取样品粉末（过3号筛）2g，加50mL甲醇，超声30min，过滤，将滤 液挥干，残渣加ImL甲醇溶解，作为供试品。W染料木素、5,7,2'，4'-四哲基异黄酬、3,5， 7, 3'，5' -五哲基-4' -甲氧基黄烧的甲醇溶液作为对照品，照2010版《中国药典》薄层色谱 法（附录VI B)实验.吸取适量供试品溶液，分别点于同一娃胶G薄层板上，W氯仿-甲醇 (9:1)为展开剂，展开前饱和15min，之后展开，取出，惊干，喷10%硫酸己醇溶液，105°C加 热2-3min。从文中图谱显示，大叶千斤拔分离度较低。
[001引 CN201410015559. UCN103760263A)提供了一种蔓性千斤拔的质量检测方法，其中 供试品溶液的制备方法包括W下步骤：取蔓性千斤拔药材粉末（过四号筛）约2g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mU密塞，称定重量，加热回流1小时，冷却，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mU蒸干，残渣加20%甲醇溶液 10血使其溶解，加在聚酷胺柱化0-80目，5g，内径1. 5cm)上，W 80%甲醇溶液120血洗脱， 收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使其溶解，转移至10血容量瓶中，加甲醇稀释至刻度， 超声处理（功率250W，频率50曲Z) 15分钟，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；供试品溶液 的含量测定；C18色谱柱；250mmX4. 6mm，5 ym ;流动相：己膳（A)-0. 2%磯酸溶液炬）梯度 洗脱，见下表，流速1. 0血/min,检测波长为258皿，柱温30°C，进样量10 y 1。
[0014]
【主权项】
1. 一种大叶千斤拔的质量检测方法，该方法包括鉴别和含量测定两个部分。
2. 根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述鉴别包括以下步骤：供试品 溶液的制备、对照药材溶液的制备和检测。
3. 根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述含量测定方法包括：供试品 溶液的制备、对照品溶液的制备、色谱条件和检测。
4. 根据权利要求2或3所述的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括 以下步骤：大叶千斤拔药材粉末4. 0-6.Og，加入100-200mL体积比为85 :15的乙醇和水的 混合物，在30°C下60Hz超声提取30-50min，冷却后水浴蒸干，加10-30mL蒸馏水溶解，然后 乙酸乙酯萃取3次，前两次100mL，后一次50ml，放置20min，取上层合并蒸干，加10mL色谱 纯甲醇充分溶解，滤过，取滤液，即得。
5. 根据权利要求2或3所述的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括 以下步骤：大叶千斤拔药材粉末4.0-6.(^，加入100-2001^浓度为95%的乙醇，于70°〇回 流提取lh，过滤，回收乙醇，得浸膏，浸膏加入10-30mL水溶解，加入200mL乙酸乙酯萃取，取 上层清液蒸干，蒸干后的固体物用甲醇定容至10mL，摇匀得供试品溶液。
6. 根据权利要求2或3所述的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包 括以下步骤：大叶千斤拔药材粉末4. 0-6. 0g，加入100-200mL浓度为95%的乙醇，于水浴中 80°C回流提取lh，过滤，滤液加入10-30mL水，进行固相萃取，先后以50mL水、50mL体积比 为60 :40-80 :20的甲醇和水的混合物为洗脱剂，洗脱液浓缩蒸干，蒸干后的固体物用甲醇 定容至10mL量瓶中，摇匀得供试品溶液。
7. 根据权利要求1-6任一项所述的质量检测方法，其特征在于，所述鉴别包括以下步 骤： 供试品溶液的制备：采用权利要求4-6任一项所述的供试品溶液的制备方法； 对照药材溶液的制备：取购买的大叶千斤拔药材粉末1. 0-2. 0g，加20-30mL甲醇，热回 流提取lh-3h，过滤，蒸干，加l-3mL甲醇溶解，作为对照药材溶液； 所述检测方法：取上述供试品溶液及对照药材溶液各15yL，分别点于同一硅胶G板 上，以体积比为2 :1的石油醚-丙酮为展开剂，展开，取出晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液适 量，在105°C加热至斑点清晰，日光下检视，供试品色谱中与对照药材色谱相应位置显相同 颜色的斑点。
8. 根据权利要求3所述的质量检测方法，其特征在于，所述色谱条件为：色谱柱： Kromasil100-5C18柱（250mmX4. 6mm);流动相：乙腈和0? 1 %磷酸水溶液；梯度洗脱，流 速为lmL/min，柱温：35°C;进样量：20yL。 所述流动相按照梯度洗脱梯度为： 表1梯度洗脱程序
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9. 根据权利要求1-6任一项所述的质量检测方法，其特征在于，所述含量测定方法包 括以下步骤： 1) 供试品溶液的制备：选用权利要求4-6任一项所述的供试品溶液的制备方法； 2) 对照品溶液的制备：精密称取染料木苷和染料木素对照品各7.lmg，置10mL量瓶 中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成含染料木苷和染料木素〇. 71mg/mL和0. 71mg/mL 的混合对照品贮备溶液，分别吸取0. 15mL，0. 3mL，0. 6mL，1. 2mL，2. 4mL于5mL的容量瓶中 定容，配制成浓度分别为 21. 3yg/mL，42. 6yg/m，85. 2yg/mL，170. 4yg/mL，340. 8yg/mL， 710. 0yg/mL梯度试液； 3)色谱条件：所述色谱条件为：色谱柱：Kromasil100-5C18柱（250mmX4.6mm);流动 相：乙腈-0. 1%磷酸水溶液；梯度洗脱，流速为lmL/min，柱温：35°C;进样量：20yL; 所述流动相按照梯度洗脱梯度为： 表1梯度洗脱程序
4) 测定方法：取大叶千斤拔样品，将等量的对照品溶液和供试品溶液分别稀释25倍， 微孔滤膜过滤后，按照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20yL，注 入液相色谱仪，记录60min内的色谱峰。
10. 根据权利要求3所述的含量测定方法，其特征在于，所述染料木苷含量为： 1. 087-1. 247mg/g，染料木素含量为：0? 481-0. 514mg/g。
【专利摘要】本发明涉及一种大叶千斤拔的质量检测方法，该方法包括鉴别和含量测定两个部分。本发明提供了一种常用中药材大叶千斤拔的质量检测方法。相对于现有技术，本发明提供的方法稳定性好，灵敏度高，能更简便、更直观的鉴定原药材，为大叶千斤拔的定性定量检测提供依据，而且可以更好的保障以大叶千斤拔入药的药物质量和疗效，更好的利用大叶千斤拔的药材资源。
【IPC分类】G01N30-02, G01N30-90, G01N30-06
【公开号】CN104569192
【申请号】CN201410826910
【发明人】龚云, 张鹏, 林鹏飞, 彭开锋
【申请人】株洲千金药业股份有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月25日