流动相B ;洗脱梯度；0-5min ;15% -32% A ;5-20min ;32% A ;20-21min ;32% -75% A ;21-40min ;75% -90% A ;40-45min ;90% -95% A。洗脱时间； 45min ;紫外检测器检测波长；346皿；流速；1. Oml/min ;柱温；35°C ;样品进样量；10 y 1 ; [0化2] 东昔窘内醋、伞形花内醋和蛇床子素成分含量测定方法如下：取东昔窘内醋对照 品，制成每 1ml 分别含 0. 26mg、0. 156mg、0. 104mg、0. 052mg、0. 026mg、0. 013mg、0. 0104mg、 0. 0052mg的对照品溶液；取伞形花内醋对照品，制成每1ml分别含0. 25mg、0. 15mg、0. lOmg、 0. 05mg、0. 025mg、0. 0125mg、0. 01mg、0. 005mg的对照品溶液；取蛇床子素对照品，制成每 1ml 分别含 3. 65mg、2. 19mg、l. 46mg、0. 73mg、0. 365mg、0. 1825mg、0. 146mg、0. 073mg 的对照 品洛浓。
[0化3] 高效液相色谱测定；不同浓度的对照品溶液分别W 10 y 1进样，测得各标准品溶 液的高效液相色谱峰面积；W所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度 为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对供试品溶液进行高效液相色 谱测定，得到东昔窘内醋、伞形花内醋和蛇床子素色谱峰的峰面积，根据标准曲线测得供试 品中东昔窘内醋、伞形花内醋和蛇床子素的含量，并结合供试品的质量，经计算得到东昔窘 内醋的含量为0. 585mg/g?0. 598mg/g，伞形花内醋的含量为1. 074mg/g?1. 096mg/g，蛇 床子素的含量为8. 702mg/g?8. 956mg/g。
[0054] 实施例6 ;
[0055] (1)供试品溶液的制备
[0056] W妇清雪莲栓为原料，取妇清雪莲栓10粒，置水浴60°C加热烙化，放冷。取约 1. 5g，剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加甲醇15ml、15ml、15ml，超声处理（功率 360W，频率35曲Z) 3次，每次20分钟，滤过，合并滤液至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇 匀，即为供试品溶液；
[0057] (2)东昔窘内醋、伞形花内醋和蛇床子素成分含量测定
[0化引高效液相色谱实验条件如下；Ci8色谱柱；250mmX4. 6mm，5 ym ;流动相；W己膳为 流动相A，W 0. 1%冰醋酸水为流动相B ;洗脱梯度；0-5min ;15% -32% A ;5-20min ;32% A ;20-21min ;32% -75% A ;21-40min ;75% -90% A ;40-45min ;90% -95% A。洗脱时间； 45min ;紫外检测器检测波长；346皿；流速；1. Oml/min ;柱温；40°C ;样品进样量；10 y 1 ;
[0059] 东昔窘内醋、伞形花内醋和蛇床子素成分含量测定方法如下：取东昔窘内醋对照 品，制成每 1ml 分别含 0. 26mg、0. 156mg、0. 104mg、0. 052mg、0. 026mg、0. 013mg、0. 0104mg、 0. 0052mg的对照品溶液；取伞形花内醋对照品，制成每1ml分别含0. 25mg、0. 15mg、0. lOmg、 0. 05mg、0. 025mg、0. 0125mg、0. 01mg、0. 005mg的对照品溶液；取蛇床子素对照品，制成每 1ml 分别含 3. 65mg、2. 19mg、1. 46mg、0. 73mg、0. 365mg、0. 1825mg、0. 146mg、0. 073mg 的 1 ?8 号对照品溶液
[0060] 1.线性关系考察：
[0061] 精密量取1?8号对照品溶液各10 y 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，W峰面积为 纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表1-表3,从结果可知，东昔窘内醋标准曲线 相关系数R 2= 0. 99953,采用的方法在0. 0052mg/ml?0. 26mg/ml范围内线性良好。
[006引表1东昔窘内醋线性试验结果（浓度范围为0. 0052mg/ml?0. 26mg/ml)
[0063]
【主权项】
1. 一种妇清雪莲栓中东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素含量的测定方法， 其特征在于包括如下步骤： (1) 供试品溶液的制备： 以妇清雪莲栓为原料，取妇清雪莲栓10粒，置水浴60°C加热熔化，放冷；取I. 5g，剪碎， 精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加甲醇15ml、15ml、15ml，超声处理3次，每次20分钟，滤 过，合并滤液至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即为供试品溶液； (2) 东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素成分含量测定： 高效液相色谱实验条件如下：C18色谱柱：250mmX4. 6mm，5 μπι ;柱温：40°C ;流动相系 统I :以乙腈为流动相A，以水为流动相B;洗脱梯度：0-17 min:10% -60%A;17-18 min: 60%-80°/〇 A ； 18-24 min ：80°/〇 A ；24-30 min ：80%-95°/〇 A ；3〇-32 min ：95%-10°/〇 A ；32-42min ： 10%A ;洗脱时间：42 min ;流动相系统II :以乙腈为流动相A，以0. 1%冰醋酸水为流动相 B;洗脱梯度：0-5 min:15% -32%A;5-20 min:32% A;20-21 min:32% -75%A;21-40 min: 75%-90% A ;40-45 min :90%-95% A ;洗脱时间：45 min ;紫外检测器检测波长：346 nm ;流 速：0· 8-L 2 ml/min;柱温：35-40°C ;样品进样量：10 μ 1 ; 东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素成分含量测定方法如下：取东莨菪内酯对照品， 制成每 I ml 分别含 0· 26mg、0. 156mg、0. 104mg、0. 052mg、0. 026mg、0. 013mg、0. 0104mg、 0. 0052mg的对照品溶液；取伞形花内酯对照品，制成每I ml分别含0. 25mg、0. 15mg、 0· 10mg、0. 05mg、0. 025mg、0. 0125mg、0. 01mg、0. 005mg 的对照品溶液；取蛇床子素对照品， 制成每 I ml 分别含 3. 65mg、2. 19mg、l. 46mg、0. 73mg、0. 365mg、0. 1825mg、0. 146mg、0. 073mg 的对照品洛液； 高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10 μ I进样，测得各标准品溶液的 高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横 坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对6批供试品溶液进行高效液相色 谱测定，得到东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算供试 品中东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素的含量，并结合供试品的质量，经计算得到东莨菪 内醋的含量为〇· 569mg/g~0. 592mg/g，伞形花内醋的含量为L 034mg/g~L 068mg/g，蛇床子 素的含量为 8. 65mg/g~8. 89mg/g。
2. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述步骤（2)的色谱条件中 流动相系统II :以乙腈为流动相A，以0. 1%冰醋酸水为流动相B ;洗脱梯度：0-5 min : 15% -32%A ；5-20 min ：32°/〇 A ；2〇-21 min ：32°/〇 -75%A ；21-40 min ：75%-90°/〇 A ；4〇-45 min ： 90%-95% A ;洗脱时间：45 min。
3. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱测定法步骤 的色谱条件中流速为I. 0 ml/min。
4. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述步骤（2)的色谱条件中色谱 柱温为40°C。
5. 根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述步骤（1)中超声处理的功率 为360W，频率为35kHz。
【专利摘要】本发明公开了一种妇清雪莲栓中东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素含量的测定方法。包括（1）供试品溶液的制备；（2）东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素成分含量测定：利用高效液相色谱技术测定东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素三种成分含量，对6批供试品溶液进行高效液相色谱测定，得到东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算供试品中东莨菪内酯、伞形花内酯和蛇床子素三种成分的含量，并结合供试品的质量，经计算得到东莨菪内酯的含量为0.569mg/g~0.592mg/g，伞形花内酯的含量为1.034mg/g~1.068mg/g，蛇床子素的含量为8.65mg/g~8.89mg/g。该方法可以对妇清雪莲栓的质量进行评价，该质量检测方法准确、快捷、方便、有效。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104569259
【申请号】CN201410841339
【发明人】王小妹, 刘春芳, 蒋兆健, 李菁, 林秀仙, 袁诚, 李金华, 刘洁瑜, 葛发欢
【申请人】广州白云山汉方现代药业有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月30日