采用sle法分离饲料中的克仑特罗的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及动物饲料的检测领域，特别是一种采用SLE法分离饲料中的克仑特罗 的方法。
【背景技术】
[0002] 样品前处理是分析检测过程的关键环节，是浓缩被测定的痕量组分，提高方法的 灵敏度，及除去对分析系统有干扰的物质的重要手段。萃取是从样品集体中分离出目标化 合物的一项技术，是样品预处理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是应用最广泛的 样品制备方法之一，但是，传统的液液萃取的操作繁琐费时、有机溶剂消耗量大，而且容易 出现乳化现象的缺陷，使得在实际应用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科学家提出了在传统的液液萃取的基础上，利用一种具有吸附性和较大 的比表面积的惰性多空填料作为介质，建立的一种新型高效样品的制备方法-介质液液萃 取（supported liquid extraction简称SLE)，SLE萃取技术就是选用一种多孔性惰性材 料-煅烧硅藻土作为介质，取代分液漏斗，增大了两相接触时的作用面积，实现高效、快速 的萃取过程。
[0004] 当水溶液样品加样到固定的聚丙烯注射管中的煅烧硅藻土上后，经过一定时间 (一般分为几分钟），水相溶液以一层薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，将有机溶剂 从柱管上端加入，当互不相溶的两相在硅藻土表面接触的同时萃取立即发生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情况下，可以施加较小的压力，而水相保留在介质中。盛接的流出 液直接将溶剂吹干，复溶后，即可用于下一步分析检测。
[0005] 现有的国标和现有公开的文献并未涉及动物饲料中的克仑特罗的分离方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的采用SLE法分离饲料中的克 仑特罗的方法。
[0007] 本发明的技术方案为：一种采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法，包括以下 步骤：
[0008] 步骤1 :取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后，将经混合 处理的溶液在离心机中以9000~11000转/分钟的速度离心0. 5~1. 5分钟，取离心处理 后的上清液少量；
[0009] 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置2~4分钟；
[0010] 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有克仑特罗 的洗脱液；
[0011] 其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为6. 0~6. 5的磷酸缓冲液，具体来说可以 为lmol/L的磷酸氢二钠溶液和lmol/L的磷酸二氢钠溶液配制而成，体积比为877~ 685:133~315，具体可以查阅磷酸缓冲液的配比表，所述的二元洗脱剂为乙酸乙酯和乙酸 丙酯的混合物，其中乙酸乙酯和乙酸丙酯的重量比为1:0. 5~1。
[0012] 在上述的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法中，所述的饲料样品为lg，缓 冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0. 5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱剂 为 0· 5ml。
[0013] 在上述的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法中，所述的步骤1中，漩涡混合 器混合处理的时间为0. 5~1. 5分钟。
[0014] 在上述的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法中，所述的SLE柱为奥秘山东 科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱。
[0015] 本发明的有益效果如下：
[0016] 采用SLE法分离饲料中的克仑特罗分离效率高，本发明的缓冲溶液能够有效的分 离样品中的克仑特罗，二元洗脱剂对克仑特罗有特别优异的萃取效果，可以应用于以96孔 板结构为代表的高通量体系。经过检测，本发明的方案的萃取率为：94. 7%。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0018] 实施例1
[0019] 步骤1 :取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理 1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0. 5ml ;离心处理的转速为10000转/分 钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为6. 0的磷酸缓冲液。
[0020] 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置3分钟；
[0021] 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱（奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取 SLE柱）洗脱2次，接收洗脱液，得到含有克仑特罗的洗脱液；每次消耗的洗脱剂为0. 5ml， 所述的二元洗脱剂为乙酸乙酯和乙酸丙酯的混合物，乙酸乙酯和乙酸丙酯的重量比1:0. 8。
[0022] 实施例2
[0023] 步骤1 :取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理 1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0. 5ml ;离心处理的转速为9000转/分 钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为6. 5的磷酸缓冲液。
[0024] 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置2分钟；
[0025] 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有克仑特罗的洗 脱液；每次消耗的洗脱剂为〇. 5ml，所述的二元洗脱剂为乙酸乙酯和乙酸丙酯的混合物，乙 酸乙酯和乙酸丙酯的重量比1:0. 6。
[0026] 实施例3
[0027] 步骤1 :取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理 1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0. 5ml ;离心处理的转速为9000转/分 钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为6. 3的磷酸缓冲液。
[0028] 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置2分钟；
[0029] 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有克仑特罗的洗 脱液；每次消耗的洗脱剂为〇. 5ml，所述的二元洗脱剂为乙酸乙酯和乙酸丙酯的混合物，乙 酸乙酯和乙酸丙酯的重量比1:1。
[0030] 标准样的制备
[0031] 称取克仑特罗标准品（纯度彡99% )0. 1000g，置于100mL容量瓶中，用重量比为 1:0. 8的乙酸乙酯和乙酸丙酯的混合物的溶剂溶解定容，其浓度为1000 μ g/ml ;
[0032] 取上述浓度为1000 μg/ml的克仑特罗溶液于100mL容量瓶中，配制成为 0· 100 μ g/ml、0. 200 μ g/ml、0. 500 μ g/ml、1. 000 μ g/ml、2. 000 μ g/ml 的标准样。
[0033] 对比例I
[0034] 与实施例1大体相同，不同的地方在于，步骤3中，洗脱剂为异丙醇与乙酸乙酯的 混合物，其体积比为40:60。
[0035] 分析：
[0036] 检测方法具体为：
[0037] 仪器：LC-2010型高效液相色谱仪（日本岛津）
[0038] 色谱柱：C18 柱，I5Omrn*3. 9HimID
[0039] 柱温：室温
[0040] 流动相：0. 05%磷酸水溶液：乙腈=100:20 ;
[0041] 检测器：UV检测器；
[0042] 检测波长：2IOnm ;
[0043] 进样量：20 μ L
[0044] 以 0· 100 μ g/ml、0. 200 μ g/ml、0. 500 μ g/ml、1. 000 μ g/ml、2. 000 μ g/ml 的标准 样进行测试，回归方程为Y = 982X+0. 01，R2= 0. 9998, X为待测物浓度，Y为峰面积。
[0045] 以实施例1所萃取的样品为待测样品，待测样品的具体组分为70wt%玉米、 30wt %蛋白质伺料，其中蛋白质伺料由?柏、棉柏和采柏组成，所述?柏、棉柏和采柏的重 量比为4 : 1.5 : 0.5。此外，每千克待测组分中还加入有含有IOmg克仑特罗的克仑特罗 溶液。
[0046] 待测样品分为10份，每份lg，采用实施例1的步骤1所述的方法进行操作，每份样 品平行取出2份0. 5ml的溶液，同一样品的所取得的两份0. 5ml的溶液为一组，共10组，每 组的溶液分别按照实施例1的步骤2-3进行操作和按照对比例1的步骤2-3进行操作。共 得到按实施例1所取得的10份洗脱液A，编号为A1-A10,和按照对比例1所取得的10份洗 脱液B，编号为Bl-BlO。
[0047] 按照上述检测方法进样检测，得到如下的检测结果：
[0048]
【主权项】
1. 一种采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1 :取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后，将经混合处理 的溶液在离心机中以9000~11000转/分钟的速度离心0. 5~1. 5分钟，取离心处理后的 上清液少量； 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置2~4分钟； 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有克仑特罗的洗 脱液； 其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为6. 0~6. 5的磷酸缓冲液，所述的二元洗脱剂为乙 酸乙酯和乙酸丙酯的混合物，其中乙酸乙酯和乙酸丙酯的重量比为1:0. 5~1。
2. 根据权利要求1所述的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法，其特征在于，所述 的饲料样品为lg，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0. 5ml，所述的步骤3中，每次 洗脱时所用的洗脱剂为〇. 5ml。
3. 根据权利要求1所述的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法，其特征在于，所述 的步骤1中，漩涡混合器混合处理的时间为0. 5~1. 5分钟。
4. 根据权利要求1至3任一所述的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法，其特征 在于，所述的SLE柱为奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱。
【专利摘要】本发明公开了一种采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法，包括以下步骤：步骤1：取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有克仑特罗的洗脱液。本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的采用SLE法分离饲料中的克仑特罗的方法。
【IPC分类】G01N30-14
【公开号】CN104807929
【申请号】CN201510240054
【发明人】陈学松, 张云平, 赖秀梅, 陈启钊, 郭振旺
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年5月12日