一种同时测定牛黄宁宫片中六种活性成分的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中成药牛黄宁宫片中活性成分检测方法，具体的说是一种同时测 定牛黄宁宫片中六种活性成分的方法，属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 牛黄宁宫片用于外感热病，高热神昏，惊风抽搐，肝阳眩晕，耳鸣头痛，心烦不寐及 癫痫狂燥，对精神分裂症有一定的抗复发作用。
[0003] 牛黄宁宫片由牛黄、蒲公英、雄黄、连翘、大黄、冰片、金银花、甘草、黄连、黄芩、钩 藤、大黄磁石（煅）、玄参、葛根等27味药经提取加工制成的药剂。该制剂收录于中国卫生 部药品标准中药成方制剂第15册第36页WS3-B-2852-98。原质量标准中仅有简单的显微 鉴别、砷量检测和胆酸含量检测。另外，"一种控制牛黄宁宫片质量的方法"专利中进行性状 鉴别、显微及薄层色谱鉴别、三氧化二砷检验和黄芩含量测定。这些方法检测指标少，有可 能导致其它组分不稳定或缺乏，难以全面准确控制药品质量。
[0004] 中药作为一个整体，强调的是各味药的协同作用。目前，中成药中单一有效成分或 指标成分控制，难以真正控制药品质量。有些药厂为了降低成本，利用药检质量标准不能完 全控制所有药味的漏洞，非法生产。因此必需建立一种快速、准确、全面分离、检测牛黄宁宫 片中多种活性成分的方法，以便更好地对该产品进行质量监控和用药安全。
【发明内容】
[0005] 本发明目的在于提供一种同时测定牛黄宁宫片中多种活性成分含量的高效液相 色谱测定方法，该方法可同时测定牛黄宁宫片中大黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和 盐酸小檗碱的含量，该方法简单、稳定、重现性好，可用于该药品的质量控制。
[0006] 本发明的目的是这样实现的：该测定方法是利用高效液相色谱法（HPLC)在同一 实验条件下同时分离并测定牛黄宁宫片中大黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和盐酸 小檗碱的含量，具体步骤如下：
[0007] (1)、对照品溶液的制备：精密称取大黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和盐酸 小檗碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL甲醇溶解，定容至刻度，制得浓度分别为 0? 20iig?mL-1 大黄酚、0? 44iig?mL-1 大黄素、0? 32yg?mL-1 甘草苷、0? 20iig?mL-1 连翅苷、 0. 56yg?ml/1黄芩苷和0. 88yg?ml/1盐酸小檗碱的单个对照品溶液，再分别精密吸取六 种单个对照品储备液0. 5mL，置于同一 5mL容量瓶中，加入甲醇定容，即得混合对照品溶液；
[0008] (2)、供试品溶液的制备：取牛黄宁宫片样品，除去糖衣后显出棕褐色，研细，精密 称取0. 03814g，置于5mL容量瓶中，加入3mL的甲醇，超声溶解45min，加入甲醇至容量瓶刻 线处，摇匀，静置24小时，过滤，即得供试品溶液。
[0009] (3)、分离检测：将上述混合对照品溶液和供试品溶液分别注入安捷伦1100液相 色谱仪，采用如下色谱条件检测：色谱柱：TC-C18 (4. 6mmX250mm，5ym);流动相A为甲醇，B 为0.05%磷酸进行梯度洗脱；流速1.〇1111^1^11_1;检测器 ：￥^)检测器；检测波长：28〇11111;柱 温：25°C;进样量：10uL，即可。
[0010] 所述流动相为如下的梯度洗脱条件：
[0012] 本发明具有以下优点和积极效果：
[0013] 1、本发明所述方法简单、准确、重现性和稳定性好，可为全面评价和控制牛黄宁宫 片质量提供理论基础和科学依据。
[0014] 2、本发明方法采用高效液相色谱法，利用梯度洗脱方式，实现了同时测定牛黄宁 宫片中6种有效成分的含量，本发明建立的色谱法能够较好的分离、测定牛黄宁宫片中大 黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和盐酸小檗碱有效成分的含量，色谱峰峰形好，分离 度较高，在此色谱条件下大黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和盐酸小檗碱的浓度与峰 面积呈现良好的线性关系，各种成分回收率均在95%以上。
[0015] 3、本发明方法操作简单、精密度、重现性和稳定性良好。为牛黄宁宫片有效成分质 量控制和药效评价的进一步研究奠定了理论基础和科学依据。
【附图说明】
[0016] 图1是本发明混合标准品溶液的色谱图。
[0017] 图2是本发明供试品溶液的色谱图。
[0018] 图3是本发明大黄素的色谱图。
[0019] 图4是本发明大黄素的标准曲线图。
[0020] 图5是本发明大黄酚的色谱图及标准曲线。
[0021] 图6是本发明大黄酚的标准曲线图。
[0022] 图7是本发明甘草苷的色谱图及标准曲线。
[0023] 图8是本发明甘草苷的标准曲线图。
[0024] 图9是本发明连翘苷的色谱图及标准曲线。
[0025] 图10是本发明连翘苷的标准曲线图。
[0026] 图11是本发明黄芩苷的色谱图及标准曲线。
[0027] 图12是本发明黄芩苷的标准曲线图。
[0028] 图13是本发明盐酸小檗碱的色谱图及标准曲线。
[0029] 图14是本发明盐酸小檗碱的标准曲线图。
【具体实施方式】
[0030] 以下结合附图和【具体实施方式】对本发明作以进一步的阐述，以便本领域的技术人 员更了解本发明，但并不以此限制本发明。
[0031] 仪器与试药
[0032] 仪器：美国安捷伦1100高效液相色谱仪；日本岛津紫外分光光度计UV2550 ; GWA-UN4系列超纯水器（北京普析通用仪器有限责任公司）；FA1104N万分之一分析天平 (上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂制造）；SK5200H超声波清洗器（200W59Hz上海 科导仪器有限公司）。
[0033] 试药：大黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和盐酸小檗碱对照品（中国生物药 品检定所）；牛黄宁宫片（沈阳红药制药有限公司）；甲醇为色谱纯，水为超纯水。
[0034] 具体步骤如下：
[0035] 对照品溶液的制备：精密称取大黄酚、大黄素、甘草苷、连翘苷、黄芩苷和盐酸小 檗碱对照品，分别置于5mL容量瓶中，加入3mL甲醇溶解，定容至刻度，制得浓度分别为 0? 20yg?mL-1 大黄酚、0? 44yg?mL-1 大黄素、0? 32yg?mL-1 甘草苷、0? 20yg?mL-1 连翅苷、 0. 56yg?ml/1黄芩苷和0. 88yg?ml/1盐酸小檗碱的单个对照品溶液。再分别精密吸取六 种单个对照品储备液0. 5mL，置于同一 5mL容量瓶中，加入甲醇定容，即得混合对照品溶液。
[0036] 供试品溶液的制备：取牛黄宁宫片样品，除去糖衣后显出棕褐色，研细，精密称取 0. 03814g，置于5mL容量瓶中，加入3mL的甲醇，超声溶解45min，加入甲醇至容量瓶刻线处， 摇匀，静置24小时，过滤，即得供试品溶液。
[0037] 流动相的选择：实验分别选用甲醇：水（70:30);甲醇：水梯度洗脱（0-30min 20%-80%甲醇，30-401^1180%-80%甲醇，40-5011111180%-20%甲醇） ；甲醇：水梯度洗