DMSO溶解。
[0048] 本发明通过测定核磁共振氢谱图中二对甲苯磺酸缘生替尼的特征峰（S= 5. 31) 的峰面积，记为Ax;顺丁烯二酸的特征峰（S= 6. 28)的峰面积，记为As，再按照公式1计算 二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有效成分的含量：
[0049]
公式 1 ;
[0050] 公式1中，Ax为二对甲苯磺酸缘生替尼的特征峰的峰面积；
[0051]As为顺丁烯二酸的特征峰的峰面积；
[0052]Ex为二对甲苯磺酸缘生替尼的当量（446)=分子量（892)/定量峰对应的质子数 (2. 0)；
[0053]Es为内标的当量（57);
[0054] Wx为二对甲苯磺酸缘生替尼的质量，单位为mg;
[0055] WsS顺丁烯二丁酸的质量，单位为mg。
[0056] 本发明提供了一种二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有效成分的定量检测方法，包 括以下步骤：将二对甲苯磺酸缘生替尼原料药通过核磁共振谱仪进行检测，得到二对甲苯 磺酸缘生替尼原料药中有效成分的含量；所述检测的内标为顺丁烯二酸。本发明提供的方 法系统适用性强，具有良好的精密度，耐用性好；本发明为二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中 有效成分的含量的测定提供了方法依据。实验结果表明：采用本发明提供的方法，二对甲苯 磺酸缘生替尼供试品溶液连续测定6次，主峰峰面积的RSD为0. 2%;二对甲苯磺酸缘生替 尼原料药中有效成分平均含量为99. 1%，相对标准偏差为0. 1%;耐用性主要考虑溶液稳 定性：供试品溶液在8h内稳定。并且，检测结果表明，采用本发明提供的方法重复性RSD为 0. 1%，线性回归系数为r= 0.9998。
[0057] 为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种二对甲苯磺酸缘生 替尼原料药中有效成分的定量检测方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保 护范围的限定。
[0058] 实施例1
[0059] 仪器：BrukerAV-400超导核磁共振谱仪；
[0060] 溶剂：氖代DMSO;
[0061] 脉冲宽度：Pl= 10.Oys;
[0062] 扫描次数：ns = 32 ;
[0063] 空白溶液：氘代二甲基亚砜；
[0064] 内标储备液的制备：称取顺丁烯二丁酸IOmg置于核磁样品管中，加入LOmL的氘 代DMSO溶解，摇匀作为内标储备液；
[0065] 内标工作液的制备：将上述内标储备液用氘代DMSO稀释，得到lmg/mL的顺丁烯二 丁酸，摇匀作为内标工作液。
[0066] 样品的制备过程：将301g3_氯代-4-(3-氟代-节氧基）_苯胺和3. 28g4_氯 代-6-碘代-喹唑啉溶解在50mL异丙醇中，将反应混合物回流12小时，通过过滤手机固体 广物，用IOmL冷异丙醇和20mL乙酿洗涤，瞭干得到3. 8g[3-氯代_4_ (3-氣代-节氧基）-苯 基]_(6-碘代-喹唑啉-4-基）-胺盐酸盐；
[0067] 在parr振荡器中在60psi下将1-苄基-4-甲基-1，4-氮杂膦-4-氧化物（5g) 的甲醇溶液（5〇mL)和3mol/LHCl(IOmL)与碳载钯（10%，I.Og)-起氢化24小时，混合物 经硅藻土过滤，在减压下去除所有溶剂以得到白色晶体固体4-甲基-1，4-氮杂膦-4-氧化 物盐酸盐，其使用无需进一步纯化；
[0068] 向Cs2CO3 (I. 3g，4.Ommol)、丙酮（5.OmL)和 4-甲基-1，4-氮杂膦-4-氧化物盐酸 盐（0. 338mg，2.Ommol)的混合物中添加炔丙基氯（150mg，2.Ommol)。在50°C下搅拌混合物 过夜，过滤并浓缩，得到浅棕色固体：4_甲基-1-(丙-2-炔基）-1，4-氮杂膦，4-氧化物， 进行下一步骤无需进一步纯化；
[0069] 在N2气氛下将胺、4-甲基-1-(丙-2-炔基）_1，4-氮杂膦，4-氧化物（205mg， I. 2mmol)、碘、[3-氯代-4- (3-氟代-苄氧基）-苯基]-(6-碘代-喹唑啉-4-基）-胺盐 酸盐（505mg，I.Ommol)、PdCl2 (PPh3)2(35mg，5 %mol)、Et3N(I.OmT,)和CuI(64mg，20%mol) 在IOmLDMF中的混合物加热过夜。浓缩并通过硅胶上的快速柱层析（5%MeOH，DCM中）纯 化，得到作为棕色粉末的期望产物，即N- (3-氯代-4- (3-氟代苄氧基）苯基）-6- (3- (4-甲 基-1，4-氮杂膦-1-基）丙-1-炔基）喹唑啉-4-胺。LCMSESI⑴m/z:550(M+1)。
[0070] 1HNMR(O)3OD300MHz)S7. 96(d，J= 2. 4Hz，1H)，7. 83(dd，Jl= 3. 6Hz，J2 = 8.1Hz，1H)，7. 71 (d，J=8. 4Hz，1H)，7.60(dd，Jl=2. 7Hz，J2=9. 3Hz，1H)，7. 39 (td，Jl =0? 7Hz，J2 = 7. 5Hz，1H)，7. 29(d，J= 7. 5Hz，1H)，7. 24(d，J= 9. 9Hz，1H)，7. 13(d，J= 9. 0Hz，1H)，7. 05 (td，Jl=I. 8Hz，J2 = 8. 1Hz，1H)，5. 21 (s，2H)，3. 73 (s，2H)，3. 35 (s，1H)， 3. 20(m，2H)，3. 00(m，2H)，2. 00(m，4H)，I. 62(d，J= 13. 2Hz，3H)。
[0071] 将得到的N-(3_氯代-4-(3-氟代苄氧基）苯基）-6-(3-(4-甲基-1，4-氮杂 膦-1-基）丙-1-炔基）喹唑啉-4-胺和二对甲苯磺酸缘生替尼和对甲苯磺酸混合，得到 二对甲苯磺酸缘生替尼原料药，作为样品。
[0072] 样品溶液的制备：称取二对甲苯磺酸缘生替尼样品IOmg置于核磁样品管中，加入 浓度为lmg/mL的顺丁稀二丁酸50yL，再加入0. 45mL的氖代DMSO溶解，摇匀作为样品溶 液。
[0073] 通过测定1份样品溶液，考察不同弛豫时间样品峰面积与内标峰面积比，选择样 品峰面积与内标峰面积比稳定时的弛豫时间作为检查参数，弛豫时间的测试结果如表1所 示：
[0074] 表1弛豫时间的检测结果
[0075]
[0076] 从表1可以看出：在Is~18s内，Ax/As的比值变化很小，考虑到操作时间，确定 弛豫时间为Is。
[0077] 实施例2
[0078] 仪器：BrukerAV-400超导核磁共振谱仪；
[0079] 溶剂：氖代DMSO;
[0080]脉冲宽度：Pl=10. 0yS;
[0081] 脉冲延迟时间：D1 =Is;
[0082]扫描次数：ns =32;
[0083] 空白溶液：氘代二甲基亚砜；
[0084] 内标储备液的制备：称取顺丁烯二丁酸IOmg置于核磁样品管中，加入LOmL的氘 代DMSO溶解，摇匀作为内标储备液；
[0085] 将内标储备液用氘代DMSO进行稀释至浓度为lmg/L的顺丁烯二酸溶液，作为内标 工作液。本实施例对得到的内标工作液进行核磁共振氢谱测试，结果如图1所示，图1为本 发明实施例2顺丁烯二酸溶液的核磁共振氢谱图。从图1中可以看出，顺丁烯二酸溶液的 特征峰的化学位移为6.28,此信号峰与其它峰完全分开，峰形对称，峰两侧基线平坦。
[0086] 将IOmg实施例1得到的二对甲苯磺酸缘生替尼原料药和0. 5mL氘代二甲基亚砜 混合，得到二对甲苯磺酸缘生替尼原料药和氘代二甲基亚砜混合液。本发明对二对甲苯磺 酸缘生替尼原料药和氘代二甲基亚砜混合液进行核磁共振氢谱测试，测试结果如图2所 示，图2为本发明实施例2二对甲苯磺酸缘生替尼原料药和氘代二甲基亚砜混合液的核磁 共振氢谱图。从图2中可以看出：二对甲苯磺酸缘生替尼原料药的特征峰的化学位移为 5. 31，此信号峰与其它峰完全分开，峰形对称，峰两侧基线平坦。
[0087] 本实施例对实施例2制备的小试样品溶液进行核磁共振氢谱测试，测试结果如图 3所示，图3为本发明实施例2二对甲苯磺酸缘生替尼原料药供试品的核磁共振氢谱图。从 图3可以看出：小试样品溶液中的二对甲苯磺酸缘生替尼的特征峰和顺丁烯二酸的特征峰 完全分开，互不干扰。
[0088] 测定样品溶液，重复测定6次，在系统适用性考察中，取氘代DMS0、顺丁烯二酸、二 对甲苯磺酸缘生替尼供试品溶液置于核磁博仪中检查，空白溶液有吸收峰，但是不干扰样 品的检查。通过测定1份供试品溶液，重复测定6次，计算6次进样的主峰峰面积的RSD而 实现的，要求6次所得的主峰峰面积的RSD不得大于2. 0%。检测结果如表2所示：
[0089] 表2系统适用性测定结果
[0090]
[0091] 从表2可以看出：6次检查的二对甲苯磺酸