一种同时测定银丹心脑通软胶囊中三种成分的检测方法
【专利说明】-种同时测定银丹心脑通软胶囊中Ξ种成分的检测方法
[0001]
技术领域
[0002] 本发明设及到一种中药质量控制方法，具体讲也就是银丹屯、脑通软胶囊中Ξ种成 分的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱法同时测定芦下、野黄琴巧、丹酪酸Β的含 量。
【背景技术】
[0003] 银丹屯、脑通软胶囊为贵州百灵企业集团制药股份有限公司独家产品，是根据苗族 医学"两病两郷'理论研制的复方制剂，由银杏叶、丹参、绞股蓝、灯盏细辛、大蒜、Ξ心山 植、天然冰片8味中药组成，具有活血化疲、行气止痛、消食化滞等功效。，用于气滞血疲引起 的胸搏，症见胸痛，胸闷，气短，屯、惇等;冠屯、病屯、绞痛，高脂血症、脑动脉硬化，中风、中风后 遗症见上述症状者。由于其良好的疗效，现已广泛应用于临床。
[0004] 目前，银丹屯、脑通制剂质量控制较为简单，主要是采用薄层色谱法对其中的化合 物进行鉴别，亦或采用高效液相对单个化合物进行含量测定。方法简单粗糖，不能全面反映 该复方制剂的质量。而采用超高液相色谱法建立银丹屯、脑通制剂多指标成分含量测定方 法，可W实现对多个指标成分进行控制，通过含量测定W检测其方中质量，可更好的控制提 取工艺，进而保证产品质量的安全、有效、质量可控。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种中药组合物Ξ种有效成分的含量测定方法。
[0006] 本发明使用一个色谱方法对银丹屯、脑通制剂中芦下、野黄琴巧、丹酪酸Β进行了含 量测定，操作简便，分析数据准确。既节省了分析人员的分析时间，提高了工作效率，同时也 又提高了制剂的有效性和可控性。
[0007] 本发明技术方案如下： 色谱条件与系统适用性实验：W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，W0.5 %甲酸乙腊为 流动相A，W〇.5%甲酸水为流动相Β，采用梯度洗脱方式:0~1.62min，10%~17%Α;1.62~ 5.50min，17%~23%A;7.00~10.00min，23%~28%A;10.00~12.00min，28%~50%A; 12.00~13.00min，50%~55%A;13.00~14.00min，55%~60%A;14.00~16.00min，60% ~70%A;16.00 ~18.00min，70% ~73%A; 18.00~20.00min，73%~75%A;20.00~ 21.00111111，75%~100%4。流速0.491^.111111-1柱溫30°(3，检测波长化5皿、333皿、286皿。
[000引对照品溶液制备:取芦下对照品2.Omg，野黄琴巧对照品5.Omg，分别置于lOmL容量 瓶中，加甲醇定容至刻度，既得;取丹酪酸B对照品2.Omg置于lOmL容量瓶中，加75%甲醇定 容至刻度，既得。
[0009]供试品溶液制备:取银丹屯、脑通制剂，去除囊皮，精密称取内囊物适量，置于50mL具塞锥形瓶中，加75 %甲醇超声提取(90W，40KHZ，30°C)30min，8000r/min离屯、lOmin，取上 清液，用75 %甲醇定容至25mL容量瓶中，既得。
[0010] 测定法:分别吸取对照品溶液与供试品溶液各扣L，注入超高效液相色谱仪，测定， 既得。
[0011] 所述的银丹屯、脑通制剂是指含有银杏叶和甘草为主药，同时含有绞股蓝、灯盏细 辛、大蒜、Ξ屯、山植、天然冰片的多种或全部，按照一定的提取方法，加入常规辅料制备成 临床可接受的胶囊剂。
[0012] 所述的梯度洗脱方式为梯度性改变洗脱液的组成部分（成分、离子强度等）或PH 值，W其将层析柱上不同的组分在合理的时间内洗脱出来的方法。
[0013] 所述的检测波长为：255nm、286nm、333nm。
[0014] 所述的流动相为:0.5%甲酸乙腊为流动相A，0.5%甲酸水为流动相B。
[001引所述的流速为:0.49mL*min-i。
[0016] 所述的柱溫为:30°C。
[0017] 银丹屯、脑通制剂芦下不得少于1.50mg/g，野黄琴巧不得少于4.40mg/g，丹酪酸B不 得少于3.3mg/g。
[0018] 本发明使用同一个色谱条件同时对含有芦下、野黄琴巧和丹酪酸B的银丹屯、脑通 制剂进行含量测定，操作简便，分析数据准确。既节省了分析人员的分析时间，提高了工作 效率，同时提高了制剂的安全性、有效性和可靠性。例如银丹屯、脑通制剂原质量标准项下只 有丹参素钢的含量测定方法，不能有效的检测其他主要有效成分芦下、野黄琴巧和丹酪酸B 的含量。本发明对现有的银丹屯、脑通制剂质量标准进行了相应的提高，使用一个色谱条件 同时对芦下、野黄琴巧和丹酪酸B进行了含量测定，提高了工作效率，同时提高了制剂的安 全性、有效性及可控性，从而确保了其临床疗效和广大患者的身体健康。
[0019]下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0020] 实验例1含量测定实验 1.仪器、试药和供试样品 仪器:ACQUITYU化C(美国Waters公司，包括四元高压梯度累、真空脱气机、自动进样 器、柱溫箱、二极管阵列检测器、Empowers色谱工作站），Millipore超滤仪，KQ3200DE型数控 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司）;METTL邸T0LEV0十万分之一电子天砰。
[0021] 对照品及其制备方法：芦下对照品（成都克洛玛生物科技有限公司），批号： 130915;野黄琴巧对照品（上海源叶生物科技有限公司）批号:YY20110513;丹酪酸B(成都克 洛玛生物科技有限公司），批号：131112。取芦下对照品、野黄琴巧对照品2.Omg和5.Omg，分 别置于lOmL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，既得；取丹酪酸B2.Omg对照品置于lOmL容量瓶 中，加75 %甲醇定容至刻度，既得。
[0022] 样品及供试品制备方法:银丹屯、脑通软胶囊(贵州百灵企业集团制药股份有限公 司），生产日期：20140409、20140411、20140413、20140415、20140417、20140419、20140421、 20140424、20140426、20140428。取银丹屯、脑通软胶囊，去除囊皮，精密称取内囊物适量，置 于50mL具塞锥形瓶中，加75%甲醇超声提取（90胖，401(化，30°〇30111111，800化/111111离屯、 lOmin，取上清液，用75 %甲醇定容至25mL容量瓶中，既得。
[0023] 2.检测波长的选择
[00%] 芦下在255nm处有最大吸收峰；野黄琴巧在333nm处有最大吸收峰，丹酪酸B在 286nm处有最大吸收峰。因此制剂中选择同一个条件下的3个波长测定运Ξ个化合物。
[0024] 3.流动相的选择
[0028]芦下、野黄琴巧和丹酪酸Β的极性相差较大，采用等度洗脱很难对Ξ种成分进行测 定，故选择梯度洗脱进行色谱分离。
[0025] 考虑色谱峰的基线，色谱柱的耐受性，W及样品的稳定性使用0.5%甲酸乙腊-0.5 %甲酸水体系进行梯度洗脱，W上问题得到解决。
[0026] 4.梯度洗脱时间的选择 通过大量实验发现按W下时间进行洗脱时，芦下、野黄琴巧、丹酪酸Β均能达到很好的 检测要求。流动相A为0.5%甲酸乙腊，流动相Β为0.5%甲酸水。见表1。
[QQ27] 表1梯度洗脱表_
5. 标准曲线的制备和线性关系的考察 精密量取芦下对照品储备溶液（〇.2mg·mL-i)0.50mL、0.75mL、l.OOmUl.25mL、 1.50mL，