一种快速测定微生物培养液浊度比色卡的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种快速测定微生物培养液浊度比色卡 的制作方法。
【背景技术】
[0002] 目前，以基因工程药物为主导的基因工程应用产业已成为全球发展最快的产业之 一，具有非常广阔的发展前景。大肠杆菌因其易于操作、遗传背景清楚、生产成本低和表达 水平高而被广泛应用于外源基因的克隆表达。在利用大肠杆菌作为基因工程基础工具的过 程中，经常需要测定大肠杆菌培养物的浊度，即在分光光度计上，于波长为600nm处测试大 肠杆菌培养液的吸光度。常见的次操作，包括大肠杆菌感受态的制备过程和外源蛋白的诱 导表达步骤。特别在外援蛋白诱导表达时判断大肠杆菌浊度尤为重要，如果诱导时期过早， 可能导致重组蛋白的表达量低，而诱导时期过晚，可能导致菌液中营养物质不足，导致重组 蛋白表达量低或形成无活性的包涵体。传统的判断方法为依赖分光光度计，需要将细菌培 养液取出后加入到比色皿中进行测量，结果虽然准确，但是操作过程需要频繁打开处于无 菌状态的培养瓶，容易对培养物造成污染。而有经验的操作者往往依靠肉眼初步判断培养 液浊度后，估计培养物浊度达到技术区间后(0D600 = 0.6~0.8)再在机器上进行一次精确 测量。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是解决现有微生物浊度的测定方法存在操作过程频繁、易对培养物 造成污染的技术问题，提供一种快速测定微生物培养液浊度比色卡的制作方法。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
[0005] -种快速测定微生物培养液浊度比色卡的制作方法，包括以下步骤：
[0006] 1)取无菌锥形摇瓶置于超净台上，向锥形摇瓶中依次倒入50ml LB培养基和50ul 卡那霉素，接入l〇ul菌种，再将锥形摇瓶放置摇床上，于37°C的温度和180r/min的转速下进 行培养；
[0007] 2)在培养过程中，利用分光光度计测定培养液的浊度，在浊度等于0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0时分别取样并分别置于10个无色玻璃小瓶中，使无色玻璃 小瓶中培养液液面高度等于2.0cm，向各无色玻璃小瓶的培养液中加入叠氮化钠使其浓度 达到0.1 %以终止微生物生长，最后在各无色玻璃小瓶上标注浊度编号；
[0008] 3)根据RGB颜色模式，A = Rx:Gy:Bz，其中A表示浊度;R、G、B表示红绿蓝三色;x、y、z 表示比例；制作一条高度为2.0cm的黑白颜色渐变比色条带，该黑白颜色渐变比色条带的0 < x，y，z < 255;
[0009] 4)将步骤2)中标注浊度编号的无色玻璃小瓶与比色条带的颜色进行比较并标记 浊度值，即将步骤2)中装有浊度等于0.1培养液的无色玻璃小瓶在比色条带的不同颜色间 移动，当透过无色玻璃小瓶刚好无法看见比色条带的颜色时，则比色条带的这一位置对应 的浊度值即为0.1，在比色条带这一位置标记0.1;按照上述操作，依次分别标记比色条带浊 度值等于〇.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鉴定微生物培养 液浊度的比色卡。
[0010]使用本发明制作的比色卡进行微生物培养液浊度的测定，可在不打开无菌培养瓶 的情况下，快速测得到微生物培养液的浊度，测量精确度可以达到±0.1，解决了现有微生 物浊度的测定方法存在操作过程频繁、易对培养物造成污染的技术问题。因此，与【背景技术】 向比，本发明具有不会对培养物造成污染且操作方法简便的优点。
[0011]为表明本发明具有以上优点，分别通过本发明制作的浊度比色卡和分光光度计对 待测大肠杆菌培养液进行浊度测试，比对数据如下：
[0013] 通过上述数据可知，通过本发明制作的浊度比色卡对待测大肠杆菌培养液进行浊 度测试的测量精确度很高。
【附图说明】
[0014] 附图是本发明制作的浊度比色卡的示意图。
【具体实施方式】
[0015] 本实施例中的一种快速测定微生物培养液浊度比色卡的制作方法，包括以下步 骤：
[0016] 1)取无菌锥形摇瓶置于超净台上，向锥形摇瓶中依次倒入50ml LB培养基和50ul 卡那霉素，接入l〇ul菌种，再将锥形摇瓶放置摇床上，于37°C的温度和180r/min的转速下进 行培养；
[0017] 2)在培养过程中，利用分光光度计测定培养液的浊度，在浊度等于0.1、0.2、0.3、 0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0时分别取样并分别置于10个无色玻璃小瓶中，使无色玻璃 小瓶中培养液液面高度等于2.0cm，向各无色玻璃小瓶的培养液中加入叠氮化钠使其浓度 达到0.1 %以终止微生物生长，最后在各无色玻璃小瓶上标注浊度编号；
[0018] 3)根据RGB颜色模式，A = Rx:Gy:Bz，其中A表示浊度;R、G、B表示红绿蓝三色;x、y、z 表示比例，制作一条高度为2.0cm的黑白颜色渐变比色条带，该黑白颜色渐变比色条带的0 < x，y，z < 255;
[0019] 4)将步骤2)中标注浊度编号的无色玻璃小瓶与比色条带的颜色进行比较并标记 浊度值，即将步骤2)中装有浊度等于0.1培养液的无色玻璃小瓶在比色条带的不同颜色间 移动，当透过无色玻璃小瓶刚好无法看见比色条带的颜色时，则比色条带的这一位置对应 的浊度值即为0.1，在比色条带这一位置标记0.1;按照上述操作，依次分别标记比色条带浊 度值等于〇.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鉴定微生物培养 液浊度的比色卡。
[0020]采用本发明制作的浊度比色卡进行微生物培养液浊度测定的方法为:将待测微生 物培养液装入无色玻璃小瓶中，透过无色玻璃小瓶中装的待测微生物培养液观察浊度比色 卡，在不同颜色间移动，当刚好无法看见比色卡某一位置的颜色时，则比色卡这一位置标注 的数值即为该微生物培养液的浊度。
【主权项】
1. 一种快速测定微生物培养液浊度比色卡的制作方法，其特征在于:包括以下步骤： 1) 取无菌锥形摇瓶置于超净台上，向锥形摇瓶中依次倒入50ml LB培养基和50ul卡那 霉素，接入l〇ul菌种，再将锥形摇瓶放置摇床上，于37°C的温度和180r/min的转速下进行培 养； 2) 在培养过程中，利用分光光度计测定培养液的浊度，在浊度等于0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0时分别取样并分别置于10个无色玻璃小瓶中，使无色玻璃小瓶 中培养液液面高度等于2.0cm，向各无色玻璃小瓶的培养液中加入叠氮化钠使其浓度达到 0.1 %以终止微生物生长，最后在各无色玻璃小瓶上标注浊度编号； 3) 根据RGB颜色模式，A = Rx:Gy:Bz，其中A表示浊度;R、G、B表示红绿蓝三色;x、y、z表示 比例；制作一条高度为2.0cm的黑白颜色渐变比色条带，该黑白颜色渐变比色条带的0<x， y,ζ < 255； 4) 将步骤2)中标注浊度编号的无色玻璃小瓶与比色条带的颜色进行比较并标记浊度 值，即将步骤2)中装有浊度等于0.1培养液的无色玻璃小瓶在比色条带的不同颜色间移动， 当透过无色玻璃小瓶刚好无法看见比色条带的颜色时，则比色条带的这一位置对应的浊度 值即为0.1，在比色条带这一位置标记0.1;按照上述操作，依次分别标记比色条带浊度值等 于0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0的位置，即制作出快速鉴定微生物培养液浊度 的比色卡。
【专利摘要】本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种快速测定微生物培养液浊度比色卡的制作方法。本发明主要解决了现有微生物浊度的测定方法存在操作过程频繁、易对培养物造成污染的技术问题。使用本发明制作的比色卡进行微生物培养液浊度的测定，可在不打开无菌培养瓶的情况下，快速测得到微生物培养液的浊度，测量精确度可以达到±0.1，解决了现有微生物浊度的测定方法存在操作过程频繁、易对培养物造成污染的技术问题。
【IPC分类】G01N21/29
【公开号】CN105572057
【申请号】CN201610005808
【发明人】张腾, 苏少博, 李光飞
【申请人】山西瑞亚力科技有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月5日