同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于元素含量测定技术领域，具体涉及一种同时测定鲜切荸荠黄化组织中 柚皮素和圣草酚含量的方法。
【背景技术】
[0002] 荸荠 (Eleocharis tuberosa)，别称马蹄、凫茈、地栗、乌芋等，为多年生草本植物 莎草科荸荠属形成的地下球茎。荸荠不仅质脆多汁、营养丰富，而且还可入药，对多种疾病 具有辅助治疗的作用。自古以来有"地下雪梨"之美誉，北方人视其为"江南人参"。但是荸荠 经鲜切处理之后，切割表面短期内会变黄，严重影响了外观品质及其他价值。前期研究发 现，引起黄化的主要原因是鲜切荸荠组织中某些物质经过苯丙烷代谢途径生成黄酮类物质 所致，随着黄色的加深，鲜切荸荠中总黄酮的含量相应增加。进一步通过对黄化物质进行分 离纯化和结构鉴定，表明鲜切荸荠切割表面的黄化可能主要与圣草酚和柚皮素两种黄酮类 物质有关。因此，建立一种能够同时测定鲜切荸荠黄化组织中圣草酚和柚皮素含量对研究 鲜切荸荠黄化机制具有重要意义。
[0003] 近年来，国内外有关于柚皮素、圣草酚检测及其含量测定的单独文献报道，主要是 高效液相色谱法(HPLC)，或是与其他方法联用，但是HPLC法主要集中于中草药中柚皮素、圣 草酚检测及其含量的测定，而且这些条件并不一定适用于鲜切荸荠黄化组织中的柚皮素和 圣草酚检测及其含量测定。另外，目前也尚未见到HPLC法测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素 或圣草酚的报道，更未曾有同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素及圣草酚的报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚含量的 方法，该方法能够同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚的含量。
[0005] 本发明所采用的技术方案是，同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚含量 的方法，具体按照以下步骤实施：
[0006] 步骤1，精密称取标准品柚皮素0.70±0.01 mg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并 稀释至刻度，摇匀，制成标准品柚皮素储备液；
[0007] 精密称取标准品圣草酚0.40±0.01mg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀释至 刻度，摇匀，制成标准品圣草酚储备液；
[0008] 精确量取标准品柚皮素储备液和标准品圣草酚储备液各lmL置于5mL棕色容量瓶 中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为柚皮素28±0.4yg ·πιΙ/1和圣草酚16±0.4μ g · ml/1的混合标准品溶液，4°C避光保存，备用；
[0009] 步骤2,取步骤1中制备的柚皮素和圣草酚标准品混合溶液，分别配制成浓度为 5.60yg · mL-^llJOyg · mL-'le.SOyg · mL-\22.40yg · mL-ijS.OOyg · mL-1 的柚皮素、浓 度为3.20yg · mL-^6.4048 · mL-^9.6048 · mL-^lS.SOyg · mL-^lG.OOyg · mL-1 圣草酸一系 列标准品混合溶液，采用高效液相色谱法测定色谱峰面积;分别以柚皮素和圣草酚浓度X为 横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归得到标准曲线；
[0010] 步骤3，取鲜切荸荠黄化组织表面制备出待测样品溶液，然后高效液相色谱法测定 色谱峰面积Α，然后通过从步骤2的标准曲线中查得色谱峰面积Α对应的柚皮素浓度XI和圣 草酚浓度X2,计算鲜切荸荠黄化组织样品中柚皮素和圣草酚含量。
[0011] 本发明的特点还在于，
[0012] 步骤2和4中高效液相色谱法(HPLC)的色谱条件如下：
[0013] 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-Ci8(150mmX4.6mm，5ym);柱温：40°C ;流动相： 0.5%冰醋酸溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱(0 ~10min，10%-20%B;10 ~15min，20%-30% 8;15~25111丨11，30%440%8;25~30111丨11，40%445%8 ;30~35111丨11，45%450%8)，流动相使 用前需经0.22μπι微孔滤膜抽滤并超声脱气；流速：lmL · mirT1;进样量：10yL;检测波长： 280nm。在此条件下，按柚皮素和圣草酚的理论塔板数计算应不低于5000,峰分离度应大于 1.5〇
[0014] 步骤3中待测样品溶液的制备过程如下:新鲜荸荠去皮、切分，置于16土 1°C温度条 件下保存，待鲜切荸荠表面黄化，精确称取黄化表面29.60~30.40g，置于三角瓶中，按料液 比为1:5加入无水乙醇，30~40°C温度下超声提取30~35min，4000~5000r/min离心分离15 ~20min，取上清液，残渣采用同样方法提取，合并上清液，旋转蒸发浓缩至干，将浓缩部分 用甲醇溶解定容至5mL，摇匀，0.22μπι微孔滤膜过滤，滤液即为待测样品溶液。
[0015] 本发明的有益效果是建立了能够同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚 含量的的测定方法一一高效液相色谱法(HPLC)。目前HPLC法主要用于中草药中柚皮素、圣 草酚分别检测及其含量的测定，并没有关于其同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素、圣草 酚含量的案例，而且其条件也不适用于测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚的含量测 定。本发明中的方法就可以对鲜切荸荠黄化组织中的柚皮素和圣草酚进行有效地分离，另 外还同时测定了其柚皮素和圣草酚含量，而且此方法简便快捷、准确可靠，能排除鲜切荸荠 黄化组织中所含其他物质色谱和其他物质产生的干扰。由此，本发明还可为其他鲜切果蔬 中柚皮素和圣草酚含量同时测定提供一定的依据。
【附图说明】
[0016] 图1是圣草酚和柚皮素标准品HPLC色谱图；
[0017]图2是鲜切荸荠黄化组织样品中圣草酚和柚皮素 HPLC色谱图。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合附图和【具体实施方式】对本发明进行详细说明。
[0019] 本发明同时测定鲜切荸荠黄化组织中柚皮素和圣草酚含量的方法，具体按照以下 步骤实施：
[0020] 步骤1，精密称取标准品柚皮素0.70 ±0.01 mg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并 稀释至刻度，摇匀，制成标准品柚皮素储备液；
[0021] 精密称取标准品圣草酚0.40±0.0 lmg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀释至 刻度，摇匀，制成标准品圣草酚储备液；
[0022] 精确量取标准品柚皮素储备液和标准品圣草酚储备液各lmL置于5mL棕色容量瓶 中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为柚皮素28±0.4yg ·πιΙ/1和圣草酚16±0.4μ g · ml/1的混合标准品溶液，4°C避光保存，备用；
[0023]步骤2,取步骤1中制备的柚皮素和圣草酚标准品混合溶液，分别配制成浓度为 5.60yg · mL-^llJOyg · mL-^ie.SOyg · mL-^22.4(^8 · ml^JS.OOyg · mL-1 的柚皮素、浓 度为3.20yg · mL-^6.4048 · mL-^9.6048 · mL-^lS.SOyg · mL-^lG.OOyg · mL-1 圣草酸一系 列标准品混合溶液，采用高效液相色谱法测定色谱峰面积;分别以柚皮素和圣草酚浓度X为 横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归得到标准曲线；
[0024]高效液相色谱法(HPLC)的色谱条件如下：
[0025] 色谱柱：Agilent Eclipse XDB_Ci8(150mmX 4.6mm，5μηι);柱温：4