一种制备短小蛇根草苷的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物化学领域，具体涉及一种制备短小蛇根草苷的方法，尤其涉及一 种以异长春花苷内酰胺为原料制备短小蛇根草苷的方法。
【背景技术】
[0002] 胆木（NaucleaofficinalisPierreexPitard)为茜草科乌檀属乔木,又名药乌檀、 山熊胆、熊胆树，主要分布广东、广西和海南等地区，为我国重点保护的珍稀野生植物种之 一。胆木以枝、干、皮入药，味苦、性寒，具有清热解毒、消肿止痛作用。我国南方民间常用于 感冒发热、急性扁桃体炎、咽喉炎、乳腺炎、肺炎、肠炎、痢疾、湿疹、皮疹、脓疡、尿路感染、胆 囊炎、下肢溃疡、脚癣感染等病的治疗，同时也是一味黎族医学常用植物药，收载于《黎族医 药》。临床有以胆木心材为原药材制备的"胆木注射液"和"胆木浸膏片"，用于急性扁桃腺 炎、急性咽喉炎、急性结膜炎及上呼吸道感染的治疗。
[0003] 胆木中主要含有生物碱和五环三萜等多种化合物成分，其中以生物碱类成分居 多，主要为吲哚类生物碱，包括异长春花苷内酰胺、短小蛇根草苷、3-表短小舌根草苷和喜 果苷等。其中异长春花苷内酰胺为胆木中主要生物碱，具有抗肿瘤、抗菌、抗疟疾等生物活 性。胆木中异长春花苷内酰胺含量非常高，采用柱层析方法可以分离获得异长春花苷内酰 胺。
[0004] 而短小蛇根草苷（pumiloside，PML)为喹啉酮类生物碱，也是胆木的主要活性成 分之一，分子式为C26H2SN209，分子量为513,溶于甲醇，难溶于水和乙酸乙酯，具有抗菌、抗 肿瘤、抗增殖等多种作用，其作为抗肿瘤药物喜树碱生物合成的重要中间体，有较大的研究 价值。
[0005] 目前短小蛇根草苷的主要来源为从胆木中分离提取，但是胆木中短小蛇根草苷含 量较低，从胆木中分离纯化短小蛇根草苷较困难。因此，提供一种原料来源广泛的制备短小 蛇根草苷的方法具有重要意义，可以为合成抗肿瘤药物喜树碱及制备抗菌、抗肿瘤、抗增殖 的药物提供重要原料。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种原料来源广泛的制备短小蛇根草苷的方 法，所述制备方法原料来源广泛，操作简单，绿色环保，短小蛇根草苷收率高。
[0007] 为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] -种制备短小蛇根草苷的方法为以异长春花苷内酰胺为原料，在含有氧气的密封 条件下光照放置得到短小蛇根草苷。
[0009] 优选的，所述制备方法具体为异长春花苷内酰胺用水溶解，滤过，滤液装于密封容 器中，充入氧气，光照处理后大孔吸附树脂吸附，之后依次用水、10%~30%乙醇、40%~ 60 %乙醇洗脱，收集40 %~60 %乙醇洗脱液，浓缩干燥即得。
[0010] 优选的，还包括对收集的40%~60%乙醇洗脱液进行脱水处理的步骤。
[0011] 优选的，还包括甲醇结晶的步骤。
[0012] 优选的，在充入氧气后还包括灭菌的步骤。
[0013] 优选的，所述100°C~150°C灭菌0· 3h~lh。。
[0014] 优选的，所述密封容器为西林瓶。
[0015] 优选的，所述光照为自然光。
[0016] 优选的，所述光照处理时间为7天
[0017] 优选的，所述大孔吸附树脂为HPD100大孔吸附树脂。
[0018] 由上述技术方案可知，本发明提供了一种制备短小蛇根草苷的方法。本发明所述 制备短小蛇根草苷的方法以异长春花苷内酰胺为原料，在含有氧气的密封条件下光照放置 得到短小蛇根草苷。由于异长春花苷内酰胺在胆木中含量非常高，且采用柱层析方法即可 分离获得异长春花苷内酰胺，因此本发明所述制备短小蛇根草苷的方法原料来源广泛。而 且本发明所述制备方法操作简单、绿色环保，同时短小蛇根草苷收率大于70%。
【附图说明】
[0019] 图1 7K实施例1不同处理的异长春花苷内酰胺溶液的HPLC分析图，横坐标为出峰 时间，单位为min，其中A为充入02在避光条件下保存7天后的样品；B为充入N2在光照条 件下保存7天后的样品；C为充入空气在光照条件下保存7天后的样品；D为充入02在光照 条件下保存7天后的样品；
[0020] 图2示实施例2充入02在光照条件下保存7天后制备得到的异长春花苷内酰胺主 要降解物的HPLC图，横坐标为出峰时间，单位为min，其中，A为1号色谱峰洗脱液分析图； B为1号色谱峰洗脱液放置3天后的分析图；C为2号色谱峰洗脱液分析图。
【具体实施方式】
[0021] 本发明实施例公开了一种制备短小蛇根草苷的方法。本领域技术人员可以借鉴本 文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术 人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例 进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法进行 改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0022] 为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
[0023] 申请人在研究异长春花苷内酰胺（strictosamide)水溶液对光照射的稳定性时， 发现异长春花苷内酰胺在光照和充氧气的条件下发生了降解。HPLC检测异长春花苷内酰胺 的水溶液，在光照和氧气的作用下，主要有2个降解产物，结果见图1。通过HPLC方法对降 解产物进行分离。其中分离得到的1号降解产物在洗脱液中不稳定，重新分离仍然难以得 到含单一色谱峰的洗脱液（见图2)。而将含有2号色谱峰的洗脱液浓缩、干燥，甲醇结晶， 得白色的棒状结晶。对得到的白色的棒状结晶进行结构鉴定，1HNMR、13CNMR、HRMS结果表 明其为短小蛇根草苷。
[0024] 因此本发明提供了一种制备短小蛇根草苷的方法，以异长春花苷内酰胺为原料， 在含有氧气的密封条件下光照放置得到短小蛇根草苷。
[0025] 其中，上述反应的反应式如下：
[0026]
[0027] 进一步的，在一些实施方案中，所述制备方法具体为异长春花苷内酰胺用水溶 解，滤过，滤液装于密封容器中，充入氧气，光照处理后大孔吸附树脂吸附，之后依次用水、 10%~30 %乙醇、40 %~60%乙醇洗脱，收集40 %~60%乙醇洗脱液，浓缩干燥得到短小 蛇根草苷。
[0028] 按照本发明，所述制备短小蛇根草苷的方法中，所述溶解为超声波超声溶解。
[0029] 本发明所述制备方法中将滤液装于密封容器中以保证密封条件。其中，在一些实 施方案中，所述密封容器为西林瓶。
[0030] 本发明所述制备方法中，所述在含有氧气的条件可以是持续通入氧气，也可以一 次通入过量的氧气以保持含有氧气的条件。
[0031 ] 在一些实施方案中，本发明所述制备方法中，所述光照为自然光。
[0032] 在一些实施方案中，本发明所述制备方法中，所述光照为日光灯作为光源照射。
[0033] 进一步的，本发明所述制备方法中，所述光照处理时间优选为5-10天。更优选为 7天。
[0034] 按照本发明，由于需要在光照条件下放置，且光照时间较长，因此为排除微生物影 响，所述制备方法优选在充入氧气后还包括灭菌的步骤，以对异长春花苷内酰胺溶液进行 灭菌。
[0035] 进一步的，所述灭菌优选为高温灭菌。在一些实施方案中为100°C~150°C灭菌 0. 3h~lh。在一些具体实施例中为121°C灭菌20min。
[0036] 大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结构的高分子吸附树脂，具有良好的 大孔网状结构和较大的比表面积，可以通过物理吸附从水溶液中有选择地吸附有机物。大 孔吸附树脂理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物选择性好，不受无机盐等离 子和低分子化合物的影响。本发明所述制备方法采用大孔吸附树脂吸附分离异长春花苷内 酰胺降解反应液中的短小蛇根草苷。
[0037] 按照本发明，所述大孔吸附树脂优选为非极性大孔吸附树脂。更优选为非极性苯 乙烯型大孔吸附树脂，如HPD100、D-101、XAD-1、XAD-2、XAD-4。进一步的，所述大孔吸附树 脂优选为HPD100大孔吸附树脂。
[0038] 异长春花苷内酰胺降解反应液经大孔吸附树脂吸附后，需要经过洗脱液洗脱后才 能获得短小蛇根草苷。所述洗脱具体为依次用水、10 %~30 %乙醇、40 %~60 %乙醇洗脱。 其中水和10%~30%乙醇洗脱可以除去结合在大孔吸附树脂上的杂质。40%~60%乙醇 洗脱大孔吸附树脂收集得到含有短小蛇根草苷的洗脱液。其中，上述乙醇溶液为乙醇的水 溶液，所述百分比除特别说明外均为体积百分比。
[0039] 申请人采用HPLC法对降解产物进行检测，结果显示含1号峰的洗脱液放置3天后 1号峰的比例降低，2号峰的比例明显增加，表明1号峰可转化为2号峰。因此本发明所述制 备方法在浓缩干燥前还包括脱水的步骤，以利于异长春花苷内酰胺氧化后的杂质峰转化为 短小蛇根草苷，提高洗脱液中短小蛇根草苷的含量。具体为异长春花苷内酰胺用水溶解，滤 过，滤液装于密封容器中，充入氧气，灭菌，光照处理后大孔吸附树脂吸附，之后依次用水、 10 %~30 %乙醇、40 %~60 %乙醇洗脱，收集40 %~60 %乙醇洗脱液，脱水，浓缩干燥得到 短小蛇根草苷。
[0040] 在某些具体实施利中，所述制备方法具体为异长春花苷内酰胺用水溶解，滤过，滤 液装于密封容器中，充入氧气，灭菌，光照处理后大孔吸附树脂吸附，之后依次用水、20%乙 醇、40%乙醇洗脱，收集40%乙醇洗脱液，脱水，浓缩干燥得到短小蛇根草苷。
[0041] 优选的，所述脱水具体为加热回流，收集回流液。
[0042] 进一步的，所述制备方法还包括纯化步骤。所述纯化具体优选为甲醇结晶。短小 蛇根草苷粗品经甲醇结晶得到短小蛇根草苷纯品。
[0043] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本