专利名称：一种特女贞苷的制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，涉及一种从女贞子中提取特女贞苷粗品(> 80% )和高纯度特女贞苷(> 98% )的方法。
背景技术：
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。女贞子主要含有三萜类、醚萜类、苯乙醇类、黄酮类等化学成分。特女贞苷，英文名为Specnuezhenide， 为女贞子中一种裂环环烯醚萜苷，特女贞苷作为专属性较强的一个成分，首次收载为2010 版中国药典女贞子药材含量测定的指标成分，其分子式为C31H42O17，分子量为686. 5，它在女贞子中是一个含量较高的成分，其药理研究较少，研究发现其有免疫调节、抗突变等药理作用。目前文献报道关于特女贞苷的分离纯化方法较少，见有一项公开的发明专利 CN101704857A，该项专利涉及从女贞子中分离纯化得到高纯度特女贞苷的方法，该方法主要为用乙醇提取，然后用石油醚、氯仿、正丁醇、有机溶剂萃取，经大孔树脂纯化，再用反相硅胶纯化而得。该方法能分离纯化得到高纯度的特女贞苷，但是流程和操作相对较为复杂， 同时不适合大量制备纯度较高的特女贞苷。
发明内容
本发明提供一种规模化、流程简单制备特女贞苷生粗品和高纯度特女贞苷的工艺路线和方法。本发明解决其技术问题所采用的技术方案为1)粉碎取女贞子药材，置干燥箱中干燥，取出放冷，粉碎机粉碎，过三号筛，得女贞子药材粉末。2)提取取女贞子粉，每次加水5-10倍煎煮池，提取3次，过滤，合并三次滤液。3)大孔树脂纯化取女贞子提取液，浓缩至上样液浓度约为0. 5g药材/ml，上样， 先用水为洗脱液洗脱，弃去水洗脱液，再用20% -40%乙醇洗脱，收集洗脱液。4)乙醇沉淀将大孔树脂洗脱液浓缩至流浸膏状，取工业酒精(95%乙醇)适量调整乙醇浓度为80% -95%，充分振摇混合，放置沉淀，过滤，取滤液蒸干。5)硅胶柱纯化先用正相硅胶柱纯化，湿法装柱，干法上样，洗脱液为三氯甲烷-甲醇5 1。制得更高纯度特女贞苷则需用反向硅胶柱纯化，流动相为甲醇-水 30 70。
附图为制备特女贞苷的工艺路线图。
具体实施方式
以下参照实施例来说明本发明，本实施例仅用于更好的说明本发明，其不以任何方式限制本发明的发明范围。下述实施例中的高效液相含量测定方法的具体方法参照《中国药典》2010版一部中规定的含量测定方法，结合方法学考察，最终确定的可行的HPLC含量测定条件为色谱柱ZorbaxC18柱(5 μ m, 4. 6 X 150mm)流动相甲醇-水(30 70, ν/ν)流速1. Oml · min-1检测波长2Mnm柱温35°C。所用女贞子药材按照《中国药典》2010版女贞子项下的含量测定方法测得特女贞苷的含量为2. 13%，按照本发明的提取方法测得女贞子药材中特女贞苷的含量为3. 23%。实施例一取女贞子药材10kg，粉碎，先后加10倍、8倍、8倍药材量水煎煮3次，每次煎煮 2h，分别每次过滤并合并滤液，滤液适当浓缩；浓缩液上样于D-101大孔树脂柱上，先以水洗脱，弃去水洗液，再用20%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至流浸膏状；加甲醇充分搅拌，放置沉淀，过滤，滤液蒸干；最后用正相硅胶柱和反向硅胶柱分离纯化得到一纯度达到98% 的化合物约^g，结合核磁共振波谱鉴定结果和已有文献研究谱图数据，确定该化合物为特女贞苷。实施例二取女贞子药材，粉碎；称得203g，加水400ml浸泡30min，再加水1200ml提取2h， 过滤，再分别加水1600ml提取两次，过滤，合并三次滤液，滤液浓缩至约400ml ；上样于 D-101大孔树脂柱，先用水洗脱，弃去水洗脱液，再用40%乙醇洗脱，洗脱液浓缩至流浸膏状(约40ml)；加入工业酒精(95%乙醇)200ml，充分搅拌摇勻，放置池沉淀，过滤，滤液蒸干；再用正相硅胶色谱柱纯化，得到的特女贞苷粗品3. 375g，纯度为81. 18%，此时的收率为63. 61%，再用反向硅胶色谱柱纯化，得到的特女贞苷纯品1.440g，纯度为98. 13%，此时的收率为21. 55%。实施例三按照专利CN101704857A制备特女贞苷的方法，取已粉碎女贞子药材227g，纯化得到特女贞苷纯品1.853g，HPLC含量测定得其含量为98. 40%，此时特女贞苷的收率为 20.03%。对比发现发明专利CN101704857A制备特女贞苷的收率略低于本专利方法。实施例二制得特女贞苷纯品1.440g，纯度为98. 13%，参照实验室购进各试剂和材料的价格计算其成本为799. 3元/g ；专禾Ij CN101704857A制备方法制得特女贞苷纯品1. 853g， 含量为98. 40%,同实施例二的成本计算方法计算成本为925. 0元/g。当加大投药量至 IOOkg时，成本进一步降低，结合各试剂和材料的市场价格进一步合理的推算和计算得本专利制备特女贞苷的成本可降至约608元/g，专利CN101704857A可以降低至约766元/ go由上可知本专利不但能够制备高纯度的特女贞苷，而且收率高，其成本也有明显的降低。分别对以上三个实施例样品1HNMR谱图和13C NMR谱图的数据进行分析，其谱图数据一致=1H-WR(600MHz，CD30D) δ 7. 58 (1Η, s, H-3)，7. 12 (2H, dd, J = 8. 5，1. 9Hz, H_4"‘ 禾口 H-8" ‘ ) ,6. 76 (2H, dd, J = 8. 5,1. 9Hz, H-5"‘禾口 H—7" ‘ ) ,6. 15 (1H, q, J = 6. 8Hz,H-8), 5. 98(lH,br. s，H_l)，4· 87(lH，d，J = 7. 4Ηζ，Η_1' )，4· 37(lH，d，J = 7. 4Hz，H_l〃 )， 4. 28 (1H, dd, J = 11. 9,5. 8Hz，H_l〃 ' ) ,4. 27 (1H，m，H_5)，3. 94 (1H, dd, J = 12. 2,5. 8Hz, H-I “ ' ) ,4. 42-3. 39 (10H, m, sugars)，3. 75 (3H, s, -0CH3)，3. 61 (1H, m, H_5)，2. 91 (2H, m, H-2" ' ) ,2. 82 (1H, dd, J = 14. 3,4. 9Hz, H_6)，2. 55 (1H，dd, J = 14. 3,4. 9Hz, H_6)， 1. 66 (3H, d, J = 7. 2Hz, H-10) ； 13C-WR(150MHz，CD30D) : δ 173. 2 (C_7)，168. 9 (C-ll)， 156. 9(C-6 " ' )，153.6(C-3)，131. l(C-4 〃 ‘，C_8 〃 ' )，130. 7 (C_8)，125. 1 (C_9)， 116. 3(C-5 “ ‘，C-7 〃 ' )，109. 6(C-4)，104. 5(C-1 〃 ),101. O (C-l ' ) ,95. 3 (C-I), 78. 5 (C-5 ' ) ,78. 1 (C_3 ' ), 78. O (C_3 “ ),75.3 (C_5 “ ),75.1 (C_2 ' ), 74. 9 (C_2 “)， 71. 7(C-4 ' )，72.3(C-4〃 ) ,71. 6 (C-l " ' ),65.2 (C-6 " ) ,62. 8(C-6 ' ),52.1 (OMe), 41.5(C-6)，36.5(C-2" ' )，31. 9 (C_5)，13. 9 (C-10)。其 NMR数据与已有文献[1]特女贞苷 (Nuezhenide)的波谱数据一致，确定该化合物为特女贞苷。
权利要求
1.一种特女贞苷的制备方法，其特征是包括以下步骤1)粉碎取女贞子，置干燥箱中干燥，放冷，粉碎机粉碎，过三号筛；2)提取取步骤1)中的女贞子粉，加水煎煮，过滤，浓缩；3)大孔树脂纯化取步骤幻中的浓缩液，上大孔树脂柱，洗脱，浓缩；4)乙醇沉淀将步骤幻中大孔树脂洗脱浓缩液进行乙醇沉淀，沉淀后过滤，滤液浓缩至干膏；5)硅胶柱纯化取步骤4)中干膏，用正相硅胶柱色谱法纯化，得到特女贞苷粗品；用反向硅胶柱色谱法进行纯化得到高纯度的特女贞苷。
2.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤2)的提取方法为加水煎煮3次，每次煎煮池，每次水用量为5-10倍药材量。
3.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤3)中大孔树脂上样液浓度为0. 3-0. 7g药材/ml。
4.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤3)的洗脱顺序为先用水为洗脱液洗脱，弃去水洗脱液，再用20% -40%乙醇洗脱，收集洗脱液。
5.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤3)的洗脱液浓缩程度为浓缩至流浸膏状。
6.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤4)醇沉过程中溶液乙醇浓度为70% -95%。
7.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤5)用的正相硅胶色谱纯化中流动相为三氯甲烷-甲醇5 1 3 1。
8.如权利要求1所述的特女贞苷的制备方法，其特征在于步骤5)用的反相硅胶色谱纯化中流动相为甲醇-水溶液，甲醇浓度为20% 40%。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，涉及一种从女贞子中提取特女贞苷粗品(＞80%)和高纯度特女贞苷(＞98%)的方法。用女贞子为原料，先粉碎药材，选用水煎煮提取的方法，提取液稍浓缩后用大孔树脂柱纯化，然后进行醇沉处理，最后选用正相硅胶柱纯化和反向硅胶柱纯化来制得含量要求不同的特女贞苷。本方法可以规模化制备含量略低的特女贞苷，收率高，操作简单，成本低；也可以制备含量很高的特女贞苷，收率略低，成本较高，可以根据含量需要进行选择，同时两种方法制备的原料材料和试剂部分可以重复利用，制备成本低于现有制备方法。
文档编号C07H17/04GK102372754SQ201110337108
公开日2012年3月14日 申请日期2011年10月31日 优先权日2011年10月31日
发明者张国林, 王飞, 章从恩, 陈前锋 申请人:中国科学院成都生物研究所