专利名称：高纯度棒柄花苷a的制备及其质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种化合物单体制备领域，具体涉及一种高纯度棒柄花苷A的制备及其质量控制方法。
背景技术：
化学对照品又 称标准品，是中药质量标准研究、质量检测和质量控制的实物对照，中药化学对照品的研究，是中药标准化研究的一个非常重要的部分，对产品的质量评价，特别是在药品生产的质量控制中，中药化学对照品起着极其重大的作用，是中药质量控制的基础与核心。棒柄花苷A是一种苯丙素酚糖苷类化合物化学成分，是植物活性成分之一，也是许多植物和药品标准质量控制的指标性成分。目前尚未有相应的国家药品标准物质，国内外对棒柄花苷A中药化学对照品的系统研究未见报道，参照中药化学对照品(供含量测定用)的技术要求，对棒柄花苷A化学对照品进行研究，建立棒柄花苷A化学对照品的批量提取工艺、纯度与含量以及杂质检查的分析测定方法，从而建立棒柄花苷A化学对照品的技术标准，为其作为中药化学对照品以及药材和制剂的质量标准研究提供科学基础和保证。棒柄花苷A作为植物、药材及其产品的化学对照品，是质量控制的技术关键，众多企业、科研和检验部门都需要高纯度的棒柄花苷A对照品，其市场需求很大，由于棒柄花苷A在药材中的含量低，提取分离技术要求很高、难度很大。本发明进行棒柄花苷A中药化学标准品制备及其质量控制技术研究，解决高纯度棒柄花苷A化学对照品的问题，对中药现代化的作用是显而易见的，具有重大的实际意义和学术价值。棒柄花苷A是从棒柄花植物分离得到的活性物质，从公开文献所知，仅有一篇文献报道棒柄花苷A的提取分离方法，如:1.题名棒柄花中反式-4- (1-丙烯基)-苯酚-P-D-吡喃葡萄糖苷的化学结构分离鉴定作者刘布鸣卢文杰牙启康陈家源刊名广西科学，2005，12 (3) =214-21文摘:取大戟科植物棒柄花Cleidionbrevipetiolatum Pax et HofTm.,粉碎,用水提取数次,滤过,合并滤液,浓缩,过DlOl大孔树脂层析，用水洗脱，再用30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，浓缩，再进行硅胶柱层析，用氯仿、氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得粗结晶。将粗结晶反复进行硅胶H柱层析(加压)用氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，得棒柄花素A结晶。经混合溶剂反复重结晶，得白色粉末结晶，经理化常数、UV、IR, 1HNMR, 13CNMR, MS等波谱测试和解析，鉴定为反式4- (1-丙烯基)-苯酚-P-D-吡喃葡萄糖苷。上述方法采用传统的柱层析技术对反式-4- ( 1-丙烯基)_苯酚-P -D-吡喃葡萄糖苷(棒柄花苷A)进行提取分离，分离得率低，生产周期长，提取量小，且纯度未达到中药化学对照品的要求，即纯度大于98%，该文献没有制备出高纯度的棒柄花苷A，也没有棒柄花苷A纯度与质量控制方法，无法满足高纯度棒柄花苷A化学对照品的需要
发明内容
本发明的目的为了克服现有的棒柄花苷A纯度低、收率低或生产成本高的不足，以及无系统的棒柄花苷A的提取纯化与质量控制方法，提供一种高纯度棒柄花苷A的制备及其质量控制方法，该方法制备得到的棒柄花苷A纯度高、质量好，可以作为化学对照品或标准品，保证质量控制。本发明是从大戟科棒柄花属植物棒柄花(Cleidion brevipetiolatum Pax etHoffm.)中经提取、分离、精制、纯化而制得的棒柄花苷A，其化学名、分子式、结构式如下:
中文名:棒柄花苷A
化学名:反式-4- (1-烯丙基)-苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷 英文名:trans-4- (1-propenyl) -phenol- β -D-glucopyranoside 分子式:C15H20 O6 结构式如下:
权利要求
1.一种高纯度棒柄花苷A的制备方法，其特征在于:包括以下工艺过程:取大戟科棒柄花叶，粉碎，每公斤棒柄花的干燥叶子用5 10倍重量的体积浓度50 90%的乙醇回流提取2 8次，滤过，合并滤液，浓缩，回收乙醇，得浸膏，经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇梯度洗脱，收集含棒柄花苷A的流分，薄层色谱TLC检测合并，浓缩，即得纯度为重量含量80 90%的棒柄花苷A粗结晶；将粗结晶用制备高效液相色谱法分离纯化，色谱柱为C-18柱，利用乙腈-水为流动相洗脱，流速为5 10 mL/min，检测波长为255nm，柱温为25°C 35°C，收集棒柄花苷A组分，并对所收集的每一份洗脱液利用HPLC检测，合并保留时间相同而且纯度在重量90% 98%之间和纯度大于98%以上的棒柄花苷A，减压浓缩，得到纯度重量90% 98%之间以及大于98%以上的棒柄花苷A ； 所述的氯仿-甲醇体积配比为:100:0 50:50 ; 所述的制备高效液相色谱法的流动相乙腈-水体积配比为:15:85 50:50 ； 所述的分析HPLC条件为:色谱柱为C-18柱；流动相为体积比:乙腈:水溶液=20:80 50:50 ;检测波长为 255nm ;流速为 0.6 mL/min 1.5mT,/miη。
2.如权利要求1所述的高纯度棒柄花苷A的质量控制方法，其特征在于:采用薄层色谱分析方法或HPLC分析方法，所述的薄层色谱分析方法:薄层板:硅胶G板；3种展开剂系统:体积比:系统(I)醋酸乙酯-石油醚(60 90°C ) (1:1 )，系统(2)苯-丙酮(2:1 )，系统(3)氯仿-甲醇(7:3);点样:取本品适量，用甲醇制lmg/mL的溶液，在同一硅胶G板上，按不同的点样量梯度点样，点样量分别为20mg、40mg、60mg、80mg、IOOmg ;置展开缸分别展开，展距:15cm ;定位:喷以10%乙醇磷钥酸溶液，晾干，在105°C烘至斑点显色清晰，置白灯下检视；结果在薄层色谱中，可见蓝色的单一的荧光斑点，3种展开剂系统，5个不同浓度的梯度点样，均为单一斑点，未见杂质斑点。
3.根据权利要求2所述的高纯度棒柄花苷A的质量控制方法，其特征在于:所述的液相色谱方法:色谱条件:色谱柱C-18,4.6r 250mm, IOmm ;流速:0.6 1.5mL/min ;进样量:10 20mL ;面积归一化法定量；系统条件(I)流动相:甲醇-水溶液体积比例30:70 60:40 ;检测波长:255nm ;系统条件(2)流动相:乙腈-水溶液体积比例15:85 50:50 ;检测波长:255nm ;系统条件(3)流动相:乙腈-水溶液体积比例15:85 50:50 ;检测波长:2IOnm ;含量与纯度测定:精密称取于105°C干燥至恒重的对照品适量，加体积比80%甲醇水溶液制成每ImL含Img的溶液，在测定条件下，进样20mL，注入液相色谱仪，用2个流动相溶剂系统分别记录色谱图至主成分的出峰保留时间的2.5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果系统测定对照品含量在均98%以上；杂质检查，分别在不同系统记录的色谱图中，除溶剂峰外，杂质峰面积总和结果均小于2.0%;峰纯度检测:取对照品适量，按流动相系统，在高效液相色谱仪上，用二极管阵列DAD检测器进行峰纯度检查，棒柄花苷A的HPLC色谱峰>98%，其色谱峰紫外吸收光谱图，三维图谱以及5点光谱图完全重合，表明为单一纯物质峰。
全文摘要
一种以大戟科棒柄花属植物棒柄花叶为原料，提供一种高纯度棒柄花苷A的制备方法、检测方法与用途，其方法是先将大戟科植物棒柄花叶粉碎，用乙醇加热回流提取，乙醇提取物经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，用薄层色谱检测，收集含有棒柄花苷A的洗脱液，合并，减压浓缩，得到棒柄花苷A粗结晶；再用反相硅胶C-18柱制备高效液相法分离，对所收集的每一份洗脱液利用分析型高效液相色谱检测，合并保留时间相同而且纯度在重量90%～98%之间和98%以上的棒柄花苷A组分，减压浓缩，即可分别得到纯度在重量90%～98%之间的棒柄花苷A和纯度大于98%的棒柄花苷A组分，并采用薄层色谱和液相色谱进行质量控制。
文档编号C07H1/08GK103145775SQ20131002296
公开日2013年6月12日 申请日期2013年1月22日 优先权日2013年1月22日
发明者刘元, 刘布鸣, 陈小刚, 黄艳, 宋志钊, 卢文杰, 文志云 申请人:广西壮族自治区中医药研究院