一种制备知母皂苷n的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物提取物的制备方法，具体涉及一种从中药知母中提取分离的单体 成分知母皂苷N的方法。
【背景技术】
[0002] 知母皂苷N是中药材知母中的有效成分，其化合物分子式为C45H7603Q，分子量为 936,化学名为（25S) -26-〇H-吡喃甸糖基-22-羟基-5β-咲留-2β，3β，26-二醇-3-〇H_ 吡喃葡糖基-(l-2)-i3-D-吡喃半乳糖苷。结构为：
[0003]
[0004] 现有技术中，对于知母皂苷N的提取分离方法已有如下报道:马百平报道了知母皂 苷N的分离过程(知母中的两种新呋留皂苷，药学学报，2006,41(6) :527-532)，该方法先以 溶剂提取，正丁醇萃取，再以两次大孔吸附树脂柱层析，所得的混合物需要用C18柱色谱反 复分离、纯化，得知母皂苷N，该提取过程中3kg知母药材仅获得42mg知母皂苷N，得率仅为 0 · 0014% 〇Yokosuka等只是在其文章（Steroidal glycosides from the underground parts of Yucca glauca and their cytotoxic activities.Phytochemistry.2014 (101) :109-115)中提到从植物丝兰中分离得到知母皂苷N，分离过程先以甲醇进行提取，再 用大孔吸附树脂、硅胶柱层析、再用0DS、制备HPLC进行制备得到知母皂苷N，该提取过程中 2kg知母药材仅获得19mg知母皂苷N，得率仅为0.00095%。
[0005] 以上两种分离知母皂苷N方法过程繁琐，且所得产率极低，不能满足于工业上的应 用。因此需要设计一种方法简单且得率稿的知母皂苷N提取方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于一种制备知母皂苷N的方法。该方法采用化学途径从中药知母 中分离出单体成分-知母皂苷N。本发明制备方法相对简单，所得知母皂苷N的得率较高。
[0007] 为达到上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] -种制备知母皂苷N的方法，包括如下步骤：
[0009] (1)以知母药材为原料，加入溶剂进行溶剂提取得到提取液，所述的溶剂选自水、 甲醇、乙醇、丙酮和丙醇中的任意一种或至少两种的混合液；
[0010] (2)将步骤（1)中得到的提取液预处理后，采用树脂吸附法、聚酰胺层析法、反相 0DS柱层析法和Sephadex LH-20柱层析法中的任意一种或至少两种进行组合的方式洗脱分 离，洗脱分离过程中选用水、丙酮、乙腈、甲醇、乙醇和丙醇中的任意一种或至少两种的混合 液作为洗脱剂；
[0011] (3)合并步骤(2)中的洗脱液，并进行干燥得到知母皂苷N。
[0012] 步骤(1)中所述的溶剂优选为水、丙酮水溶液、乙醇水溶液、乙腈水溶液、甲醇水溶 液或丙醇水溶液;进一步优选为水、丙酮水溶液或乙醇水溶液;所述溶剂提取的方式为回 流、渗滤或超声提取。更进一步优选的，所述乙醇水溶液的体积百分含量为10%~95%，所 述丙酮水溶液的体积百分含量为10%~95%。最优选的，所述乙醇水溶液的体积百分含量 为70%~95%，所述丙酮水溶液的体积百分含量为50%~90%。
[0013] 步骤(2)中采用树脂吸附法与聚酰胺层析法、反相0DS柱层析法和Sephadex LH-20 柱层析法中的任意一种进行组合的方式洗脱分离;优选的，采用树脂吸附法与反相0DS柱层 析法进行组合的方式洗脱分离。
[0014] 所述树脂吸附法采用的树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂，洗脱剂为水、丙酮水溶 液、乙醇水溶液和丙醇水溶液中的至少一种，所述洗脱的方式为等浓度洗脱或梯度洗脱。所 述的聚苯乙烯型大孔吸附树脂优选为HPD-100型吸附树脂、AB-8型吸附树脂、D101型吸附树 脂、XDA-5型吸附树脂、YWD01G3型吸附树脂、HPD300型吸附树脂、HPD722型吸附树脂、HP20型 吸附树脂、SP850型吸附树脂、LX-6型吸附树脂或SP825型吸附树脂。
[0015] 步骤(2)中所述预处理的方式为将提取液调整浓度后离心取上清液或过滤，所述 的树脂吸附法为将提取液的离心上清液或过滤液通过大孔树脂吸附后加洗脱剂进行洗脱 分离，所述洗脱分离的过程为:先用水洗脱除杂，再用5%~30% (v/v)的丙酮水溶液、乙醇 水溶液或丙醇水溶液洗脱除杂，最后再用20%~95% (v/v)的丙酮水溶液、乙醇水溶液或丙 醇水溶液洗脱。
[0016] 优选的，所述洗脱分离的过程为:先用2~8BV的水洗脱除杂，再用2~8BV 10%~ 30% (v/v)的丙酮水溶液、乙醇水溶液或丙醇水溶液洗脱除杂，最后再用2~8BV 35%~ 95% (v/v)的丙酮水溶液、乙醇水溶液或丙醇水溶液洗脱。
[0017] 进一步优选的，所述洗脱分离的过程为:依次用2~8BV的水、2~8BV的20%~30% 乙醇洗脱除杂，再用2~8BV的40%~60%乙醇洗脱。更进一步优选为：依次用6BV的水、6BV 的30 %乙醇水溶液洗脱除杂，再用6BV的50 %乙醇水溶液洗脱。
[0018]所述反相0DS柱层析法、聚酰胺层析法和Sephadex LH-20柱层析法的洗脱剂为含 水乙腈、含水丙酮、含水乙醇和含水甲醇中的至少一种，洗脱方式为等浓度洗脱或梯度洗 脱。优选的，所述的洗脱剂为体积百分含量为20%~90%的含水乙腈、含水丙酮、含水乙醇 或含水甲醇。进一步优选，所述反相0DS柱层析法的洗脱剂为体积百分含量为30 %~70 %的 含水丙酮或含水甲醇，其洗脱方式为等浓度洗脱。更进一步优选，洗脱剂为体积百分含量为 50%的含水甲醇或40 %的含水丙酮。洗脱剂用量一般为2~8倍柱体积。
[0019] 所述预处理的最优选过程为将提取液的浓度调整为O.lg生药/mL，然后离心留上 清或过滤。
[0020] 本领域技术人员公知的，所述的聚酰胺层析法为常压或加压聚酰胺柱层析，所用 的柱填料为十八烷基健合相或八烷基健合相。所述的Sephadex LH-20柱层析法为常压或加 压柱层析，所用的柱填料为十八烷基健合相或八烷基健合相，所述反相ODS柱层析法为常压 或加压反相柱层析，所用柱填料为十八烷基健合相或八烷基健合相。
[0021] 本发明的有益效果：
[0022] 该发明中知母皂苷N的制备方法相对简单，所得知母皂苷N的得率与现有技术相比 具有显著的提高，向工业化生产更迈进了一步。
【附图说明】
[0023]图1为知母皂苷N的质谱图
[0024] 图2为知母皂苷N的氢谱数据
[0025] 图3为知母皂苷N的碳谱数据
【具体实施方式】
[0026] 下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
[0027] 实施例1:知母皂苷N的提取分离方法I与鉴别
[0028] 取知母药材2.0千克，以20升90% (v/v)乙醇回流提取三次，每次回流2小时，过滤， 合并滤液。回收乙醇，减压浓缩至5L，再加水15L稀释浓缩液，至体积浓度为O.lg生药/mL，溶 液进行过滤，滤液待上样。
[0029]将预先处理好的大孔吸附树脂HP20(北京绿百草科技发展有限公司）装柱(5L)