专利名称：知母总皂苷在制备抗真菌药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药领域，涉及一种知母总皂苷(ZMZG)提取物的新药物用途。
背景技术：
知母系百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge.)的干燥根茎。主产河北、山西。以河北易县所产品质最佳，称“西陵知母”。具有清热泻火、生津润燥的功效，主治外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，内热消渴，肠燥便秘等症。知母总皂苷是从知母中提取的活性成分，据文献报道，对血小板聚集有明显的抑制作用，也有抗炎作用和抗病毒作用。
发明内容
本发明的目的是提出一种抗真菌的药物，并提供其实用的剂型。从药理实验看出，知母总皂苷有较好的抗真菌作用，可以用于真菌型皮肤病的治疗，且无毒副作用，同时也拓宽了知母原药材的开发利用领域。
由于本发明首次公开知母总皂苷提取物在抗真菌方面的药物作用，因此将知母总皂苷单独或与其他活性组分或辅料配制成药剂，用于抗真菌的作用。
本发明的知母总皂苷是一种药物活性成分，按常规的制剂工艺，可以知母总皂苷为主要活性成分，加入常规的辅型剂、溶剂、增溶剂、基质、防腐剂等辅料，制成适合于临床上使用的剂型。例如乳膏剂、霜剂、酊剂、糊剂、乳剂、乳胶剂、凝胶剂等。
本发明知母总皂苷提取物的含量在剂型中1％——10％的范围内，可以每日给药2次或多次，优选的是10％，每次给药2次，适宜的给药途径是外用，皮肤给药。
知母总皂苷提取方法，采取大孔树脂法提取，即知母1000g，水煮3次，每次2h，滤过，合并水提液，经大孔树脂吸附，用水洗至无色后，用乙醇洗脱，合并乙醇洗脱液，减压蒸出乙醇，得淡黄色粉末，真空干燥，即得知母总皂苷。
具体实施例方式实施例一组成(10g知母总皂苷/100g软膏)乳膏剂配制方法知母总皂苷10.0g、硬脂酸9.6g、单硬脂酸甘油酯2.8g、液体石蜡4.8g、白凡士林0.8g、羊毛脂4.0g、三乙醇胺0.32g、羟苯乙酯0.1g蒸馏水适量；制法硬脂酸，单硬脂酸甘油酯，液体石蜡，白凡士林和羊毛脂为油相，置蒸发皿中，于水浴上加热至80℃左右，取ZMZG溶于蒸馏水中，与三乙醇胺，羟苯乙酯置烧杯中，水浴加热至80℃左右。在等温下将水相缓缓倒入油相中，并在水浴上不断搅拌至半固体状，再在室温下搅拌近至冷凝，高压灭菌后备用。
实施例二实验1、体外抗真菌作用材料与方法供试菌种石膏样毛癣菌，石膏样小孢子菌，絮状表皮癣菌(中国医科院皮肤病医院真菌科提供)。
培养基沙氏肉汤培养基实验方法采用液体试管法，将制备好的液体培养基在无菌环境条件分装入12支试管中，每管1ml，将知母总皂苷用蒸馏水配制成50mg/ml为原液，取1ml加入第一个试管内，采用试管二倍稀释法制成25mg/ml，12.5mg/ml，6.25mg/ml，3.125mg/ml，1.5625mg/ml，0.7813mg/ml，0.3906mg/ml，0.1925mg/ml，0.0977mg/ml，0.0488mg/ml系列浓度的药液培养基。每个含药试管内加入0.1ml的菌悬液(1×104-1×105cfu/ml)。第11管不加菌液，作为阴性对照，第12管加菌液，作为阳性对照。置26℃恒温箱中培养一周，每日观察其生长情况，并做记录。真菌不生长的最高药物稀释度为该药的最低抑菌浓度(MIC)。取出真菌不生长的药液培养基移种到平皿沙氏琼脂基上，于26℃培养一周再观察结果，真菌不生长的最高稀释度为该药的最低杀菌浓度(MBC)。见表1表1 知母总皂苷对三种皮肤癣菌实验结果
结果表明，知母总皂苷对石膏样毛癣菌，石膏样小孢子菌和絮状表皮癣菌均有抑菌和杀菌作用，尤其对石膏样毛癣菌的作用较为显著。
实验2 治疗效果实验材料与方法药物知母总皂苷乳膏；乳膏基质；达克宁乳膏(西安杨森制药有限公司，产品批号050406545)动物健康白色豚鼠30只(由长春高新医学动物实验研究中心提供，合格证号SCXK-(吉)2003-0004)，雌雄各半，体重250g±50g。
菌种石膏样毛癣菌。
方法菌悬液制备用接种钩取在沙氏斜面培养基上生长的石膏样毛癣菌的成熟菌落，加到无菌生理盐水中，经研磨匀浆后制成约(1～5)×106cfu/ml的孢子混悬液。
豚鼠感染模型的制备用脱毛剂在豚鼠脊柱两侧背部制备光滑无毛区，每只豚鼠背侧面感染区剃毛4×5cm，24小时后，按常规方法人工感染石膏样毛癣菌，3～5天后，局部感染明显形成，经真菌学检查阳性后，确定感染成功。
将30只感染的豚鼠随机分3组，ZMZG乳膏组，乳膏基质组，阳性对照组(达克宁乳膏)，每组10只。每感染处用药量0.2g，2次/天，连续2周，每2天进行一次真菌学镜检和皮损观察。疗效评价标准为2级治愈为皮损消退真菌镜检连续2次阴性；无效为皮损未消退，真菌镜检阳性。
结果知母总皂苷乳膏治疗豚鼠局部皮肤感染石膏样毛癣菌，二周的治愈率为85％(见表2)；达克宁乳膏治疗豚鼠局部皮肤感染石膏样毛癣菌，二周的治愈率为80％(见表2)。知母总皂苷乳膏二周的治愈率与达克宁乳膏二周的治愈率比较，经统计学处理无显著性差异(P＞0.05)。表明ZMZG乳膏在皮肤癣病治疗效果上与达克宁相近。
表2 知母总皂苷乳膏对豚鼠局部皮肤感染石膏样毛癣菌的治疗结果
注乳膏基质组与知母总皂苷乳膏组，乳膏基质组与阳性对照组比较**P＜0.05知母总皂苷乳膏组与阳性对照组比较#P＞0.05实验3 皮肤刺激实验材料与方法药物知母总皂苷乳膏，乳膏基质。
动物健康白色豚鼠10只(由长春高新医学动物实验研究中心提供，合格证号SCXK-(吉)2003-0004)，雌雄各半，体重250g±50g。
方法实验前24小时将豚鼠背部脊柱两侧脱毛而不损伤皮肤，脱毛面积为4cm×5cm。一块脱毛区做正常皮肤刺激实验，分为给药区和对照区。给药区涂抹ZMZG乳膏剂0.2g对照区涂以等量的乳膏基质，用一层塑料薄膜覆盖，再用胶布固定。另一块脱毛区作损伤皮肤刺激实验，给药前用针头在脱毛区皮肤上划出“#”形擦伤，刺伤表皮，不伤真皮，有轻度的渗血为度。给药方法同上；给药24小时后，除去药物，分别记录1、24、48及72小时给药部位出现的红斑和水肿的情况，按表3评分并评价刺激强度。
表3 皮肤刺激反应评分标准
表4 知母总皂苷ZMZG乳膏剂对皮肤刺激的平均反应值
结果表4可见ZMZG乳膏与基质组对正常皮肤与损伤皮肤的平均反应值无明显差别。说明给药组对正常及损伤皮肤均无刺激性，基质组亦无刺激性。
实验4 皮肤过敏实验材料与方法药物知母总皂苷乳膏，2、4-二硝基氯苯，乳膏基质。
动物健康白色豚鼠40只，雌雄各半，体重250g±50g(由长春高新医学动物实验研究中心提)。
方法将动物随机分4组，ZMZG乳膏，基质对照组，空白对照组，阳性对照组(2、4-二硝基氯苯)，每组10只。实验前24小时在豚鼠背部左侧脱毛，脱毛面积为4cm×5cm。按皮肤涂抹法给药。致敏接触各给药组分别涂以0.2g(0.2ml)药液于去毛区。空白对照组涂等量的蒸馏水，持续6小时后去除覆盖固定物。第7天和第14天，以同样方法重复一次，第28天激发给药，同样方法将几种受试物分别涂于动物背部皮肤右侧去毛区，6小时候洗去受试物，即刻观察，然后于24、48及72小时再次观察皮肤过敏反应情况，按表5标准评分，并评价致敏程度。
表5 皮肤过敏反应程度评分标准
表6 知母总皂苷(ZMZG)乳膏对豚鼠皮肤过敏的影响
结果如表6所示，阳性药物2、4-二硝基氯苯组动物皮肤受试区激发给药6小时后，有明显轻度红斑出现，无水肿，致敏率100％。基质对照组动物皮肤受试区在激发给药后一只动物略见红斑，48小时后恢复正常，认为无致敏现象。ZMZG乳膏组动物皮肤受试区自激发给药6至72小时后未出现红斑及水肿，与空白对照组没有差异。由此可见知母总皂苷乳膏无致敏作用。
实验5 皮肤急性毒性实验动物健康白色豚鼠20只(由长春高新医学动物实验研究中心提供，合格证号SCXK-(吉)2003-0004)，雌雄各半，体重250g±50g。
药物知母总皂苷乳膏剂方法动物随机分成2组(即完整皮肤组和破损皮肤组)，受试前24小时豚鼠背部两侧去毛4cm×5cm，将其中10只做破损皮肤。每块脱毛区涂ZMZG乳膏剂，给药24小时除去药物，连续观察7天。结果未发现任何异常反应，故认为该药在此剂量下对豚鼠外用无任何急性毒性反应出现。
权利要求
1.知母总皂苷在置备抗真菌药物中的应用。
2.知母总皂苷为主要活性成分，加入常规的辅型剂、溶剂、增溶剂、基质、防腐剂制成适合于临床上使用的乳膏剂、霜剂、酊剂、糊剂、乳剂、乳胶剂、凝胶剂。
全文摘要
知母总皂苷在制备抗真菌药物中的应用本发明涉及知母总皂苷(ZMZG)在制备抗真菌药物中的应用。属于中药领域。本发明提出ZMZG在制备抗真菌药物中的应用。从药理实验看出，ZMZG有较好的抗皮肤真菌作用，可以用于对真菌性皮肤病的治疗，且无毒副作用，同时拓宽了知母原药材的开发利用领域。本发明的ZMZG是一种药物活性成分，按常规的制剂工艺，可以ZMZG为主要活性成分，加入常规的赋型剂、基质、防腐剂，制成适合于临床上使用的剂型。
文档编号A61P31/10GK1768823SQ200510017190
公开日2006年5月10日 申请日期2005年10月17日 优先权日2005年10月17日
发明者李静, 李娟 , 巨艳红, 甄清, 李勇 申请人:吉林大学