抗体组合物及其在白血病淋巴瘤分型中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于抗体医药技术领域，具体而言，本发明涉及抗体组合物及其在白血病 和淋巴瘤分型中的应用以及分型试剂盒等。
【背景技术】
[0002] 常见的血液肿瘤主要包括各类白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤以及 恶性淋巴瘤等，是严重危害人民生命健康的重大疾病。在诊断发现血液疾病后，通常需要进 行分型。例如，中国专利第00133797号公开了可用于白血病分型的蛋白芯片，其包括抗至少 19种细胞表面抗原的抗体；中国专利第200910082657号公开了可用于急性淋巴细胞白血病 基因分型的基因芯片，其包括62种DNA片段；中国专利第201410250033号公开了可用于急性 淋巴细胞白血病基因分型的试剂盒，其包括三组共58个引物对。这些分型的方案正在向越 来越复杂的方向发展。
[0003] 临床上也采用流式细胞术进行分型。由于CD45是白细胞共同的抗原，所以当前基 本上是以CD45vs SSC(CD45/SSC)设门的流式细胞术免疫分型，尤其是在初筛中进行分型 (初筛方案是每个血液肿瘤病人均需要做的）。例如，王卉等（四色流式细胞术分析B细胞型 急性淋巴细胞白血病免疫表型.中国实验血液学杂志，11 (2): 137)、张玮等（流式细胞术 CD45/SSC设门在急性白血病免疫分型中的应用.西安交通大学学报(医学版），28(4):462) 和刘光明等(六色流式细胞术用于儿童急性B系淋巴细胞白血病相关免疫表型的检测.中国 小儿血液与肿瘤杂志，17(3): 104)均报道了以CD45/SSC设门对各类白血病进行流式细胞术 免疫分型的技术，然而，本发明人发现，即便不计算抗CD45抗体，这些技术需要大量的抗不 同细胞表面抗原的抗体，少则也要约10种，而且如上所述，分型的方案正在向越来越复杂的 方向发展，使用的抗体种类有越来越多的趋势。这不但增加了分型的成本，而且增加了操作 难度，所以推广得到了限制。
[0004] 而本发明人没有受现有技术的发展趋势的限制，经过十余年临床实践和研究，令 人意外地筛选出包括抗CD45抗体在内的七种抗体，组合为两种组合物，每组四种抗体，配合 四色流式细胞仪，仅需一次上机操作，就可有效进行多种血液肿瘤的免疫分型（特别是初 筛），而且节约了成本、操作更趋简单、快速，特别适合于临床白血病、淋巴瘤的初筛中推广 应用。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是提供两种新的抗体组合物及包括它们的试剂盒，用于 进行白血病和淋巴瘤分型。另外，本发明还提供了使用它们进行白血病和淋巴瘤分型的方 法和应用等。
[0006] 具体而言，在第一方面，本发明提供了抗体组合物，其包括抗⑶45抗体、抗⑶13抗 体、抗⑶33抗体和抗⑶7抗体。
[0007] 优选本发明第一方面的抗体组合物由抗CD45抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体和抗 ⑶7抗体组成。
[0008]更优选本发明第一方面的抗体组合物中每种抗体被标记不同的荧光标记，优选每 种抗体被分别标记FITC、PE、PerCP-Cy5.5和APC。这样可以在四色流式细胞仪单管(检测一 根流式管时）即可同时检测出抗CD45抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体和抗CD7抗体的结果。 [0009 ]在第二方面，本发明提供了抗体组合物，其包括抗⑶45抗体、抗⑶117抗体、抗⑶34 抗体和抗⑶19抗体。
[0010] 优选本发明第二方面的抗体组合物由抗⑶45抗体、抗⑶117抗体、抗⑶34抗体和抗 ⑶19抗体组成。
[0011]更优选本发明第二方面的抗体组合物中每种抗体被标记不同的荧光标记，优选每 种抗体被分别标记FITC、PE、PerCP-Cy5.5和APC。这样可以在四色流式细胞仪单管(检测一 根流式管时）即可同时检测出抗CD45抗体、抗CD 117抗体、抗CD34抗体和抗CD 19抗体的结果。 [0012]在本文中，抗体本身是本领域技术人员所熟知的，特异结合(抗)相应抗体。抗体可 以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，在本发明的【具体实施方式】中，优选是单克隆抗体。 抗体可以是鼠源的，也可以是人源的。在本文中，如没有相反的指示，各抗体的抗原，即各细 胞表面抗原(⑶45、⑶13、⑶33、⑶7、⑶117、⑶34和⑶19)，均为人细胞表面抗原。
[0013]在第三方面，本发明提供了用于白血病和淋巴瘤分型的试剂盒，其包括第一容器 和第二容器，其中，第一容器包括本发明第一方面的抗体组合物，第二容器包括本发明第二 方面的抗体组合物。
[0014] 本发明第三方面的试剂盒可以仅采用包括抗CD45抗体在内的7种抗体，就能对多 种血液肿瘤（白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常综合征等)进行初筛分型，在血液肿瘤免疫分型 中应用前景广阔。
[0015] 在本文中，第一容器和第二容器中的标号仅仅为表示不同容器，并不对容器本身 的材质、形状构成限制，只要容器能容纳并保存本发明的抗体组合物即可。容器可以是管、 瓶，其材质可以是塑料或玻璃。
[0016] 本发明第三方面的试剂盒还可以包括其他参与进行白血病和淋巴瘤分型的试剂 和设备。优选本发明第三方面的试剂盒中还包括红细胞裂解液(如，10X红细胞裂解液)和/ 或缓冲液(如，磷酸盐缓冲液）。本发明第三方面的试剂盒中还可以包括与流式细胞仪配套 使用的流式管、细胞计数板、涡旋振荡器、移液器、离心机等，尤其是流式管、细胞计数板等 耗材。
[0017] 另外，本发明第三方面的试剂盒还可以包括指导进行白血病和淋巴瘤分型的说明 书或手册。
[0018] 在第四方面，本发明提供了白血病和淋巴瘤分型的方法，其包括：
[0019] (1)处理骨髓或外周血样品，使得呈单个细胞悬液状态；
[0020] (2)将步骤(1)处理的样品等分，分别与权利要求2所述的抗体组合物和权利要求4 所述的抗体组合物混合入两根流式管，混匀后孵育；
[0021] (3)向步骤(2)孵育的两根流式管加入红细胞裂解液，混匀后孵育，离心，去上清并 重悬;和，
[0022] (4)四色流式细胞仪检测步骤(3)重悬的两根流式管，并计算结果。
[0023]由于是对已经诊断出白血病和淋巴瘤的病人样品进行分型，不再出具有诊断信息 的结果(如果混有健康人的样品，反而干扰分型的准确性），而且也没有样品的获取步骤，甚 至可以是使用教学用样品来进行教授白血病和淋巴瘤分型的方法，因此本发明第四方面的 方法是非诊断的免疫分型方法。
[0024] 优选在本发明第四方面的方法中，计算结果是计算抗以下细胞表面抗原的抗体对 的荧光结果（流式细胞仪检测的荧光结果）：CD33vs CD13、CD33vs CD7、CD7vs CD13、 CD117vs CD34、CD117vs CD19和CD19vs CD34，即，计算以下抗体对的荧光结果:抗CD33抗体 vs抗⑶13抗体、抗⑶33抗体vs抗⑶7抗体、抗⑶7抗体vs抗⑶13抗体、抗⑶117抗体vs抗⑶34 抗体、抗⑶117抗体vs抗⑶19抗体和抗⑶19抗体vs抗⑶34抗体。在本文中，如无相反指示，检 测均是以CD45vs SSC(即CD45/SSC)设门。
[0025] 在第五方面，本发明提供了本发明第一方面的抗体组合物和本发明第二方面的抗 体组合物联合在制备白血病和淋巴瘤分型的试剂盒中的应用。
[0026] 优选在本发明第五方面的应用中，试剂盒是本发明第三方面的试剂盒。
[0027]也优选在本发明第五方面的应用中，白血病和淋巴瘤分型的方法是本发明第四方 面的方法。
[0028] 本发明的有益效果在于:优化了抗体组合和标记对应抗体的荧光标记组合以及结 果判读方法，只需要使用7种抗体即可有效对多种血液肿瘤（白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常 综合征等)进行初筛分型，节约了成本，操作更趋简单、快速。
[0029] 为了便于理解，以下将通过具体的附图、实施例对本发明进行详细地描述。需要特 别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构