成对本发明范围的限制。依据本说明书 的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见的。另外，本发明 引用了公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本发明，它们的全文内容均纳入本文进行 参考，就好像它们的全文已经在本文中重复叙述过一样。
【附图说明】
[0030] 图1显示了多发性骨髓瘤(MM)的检测分布点图。
[0031]图2显示了骨髓增生异常综合征(MDS)的检测分布点图。
[0032]图3显示了急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的检测分布点图。
[0033]图4显示了急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的检测分布点图。
[0034]图5显示了急性髓细胞白血病M3型(AML-M3)的检测分布点图。
[0035]图6显示了急性髓细胞白血病M5型(AML-M5)的检测分布点图。
[0036]图7显示了边缘带淋巴瘤(MZL)的检测分布点图。
[0037]图8显示了T大颗粒淋巴细胞白血病(T-LGL)的检测分布点图。
[0038]图9显示了慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)的检测分布点图。
【具体实施方式】
[0039]以下本文将通过具体的实施例来描述发明。如未特别指明之处，可根据本领域技 术人员所熟悉的《细胞实验指南》(科学出版社，北京，中国，2001年）、《免疫检测技术》(科学 出版社，北京，中国，1991)等实验手册以及本文所引用的参考文献中所列方法来实施。其 中，所用的试剂原料均为市售品，可以通过公开渠道购买获得。
[0040] 实施例1试剂的配制
[0041] 下述实施例中使用抗如下两组细胞表面抗原的单克隆抗体，每组中不同单克隆抗 体分别用不同的选自FITC、PE、PerCP-cy5.5和APC的荧光标记来标记：
[0042] 组 1:0)45、0)13、0)33和0)7;
[0043] 组2:0)45、0)117、0)34和0)19。
[0044] 这些荧光标记的单克隆抗体可以直接通过公开渠道购买获得，具体来源参见表1。
[0045] 表1产品相关单克隆抗体信息
[0047] 对这些单克隆抗体分别取样，梯度稀释，分别进样于四色流式细胞仪对相应抗原 进行检测，确定最佳抗体用量为5μ1，从而取以下量的荧光标记的单克隆抗体分别装于A、B 两管试剂管中：
[0048] A管：5yL CD45-FITC、5yL CD13-PE、5yL CD33-PerCP-cy5.5、5yL CD7-APC;
[0049] B管：5yL CD45-FITC、5yL CD117-PE、5yL CD34-PerCP-cy5.5、5yL α)19-ΑΡ(λΑ管 和B管可构成本发明的试剂盒。
[0050] 本发明的试剂盒还可以包括分别装有10 X红细胞裂解液的容器和装有10 X PBS缓 冲液（pH 7.2)的容器，其中10 X红细胞裂解液的配制方法如下：称取80.2g NH4C1，8.4g NaHC03和3.7g EDTA-2Na，加水至900ml，混匀，用1M NaOH或1M HC1调节pH至7.4，加水至1匕 [0051 ]实施例2样品的处理
[0052]将保存于肝素或EDTA抗凝管中的骨髓或外周血样品调整至细胞密度为1~5 X l〇6/ml，然后通过200目工业筛网过滤，去除样本中团块样物质，保证单个细胞悬液状态，保 存于2~8°C，得到处理的样品。
[0053]实施例3样品的分型检测
[0054] 取两根流式管，分别标记①、②，然后分别加入实施例1的试剂盒中A、B管的抗体混 合物，加入量分别为3yL。然后，取实施例2处理的样品100yL，等分后在流式管①、②中分别 加入50yL，使用涡旋振荡器振荡混匀，室温(25°C)避光孵育15分钟。
[0055] 用蒸馏水将lOXroS缓冲液稀释至1 XroS缓冲液，然后用1 XroS缓冲液将10X红 细胞裂解液稀释成IX红细胞裂解液，然后向孵育后的流式管①、②中各加入IX红细胞裂 解液lml，使用涡旋振荡器振荡均匀，室温(25°C)避光静置10分钟。
[0056] 然后，流式管①、②以1500rpm离心5分钟，去上清，加入200yL lxros重悬，用四色 流式细胞仪检测。分别对大量不同来源的已知血液肿瘤的样品进行检测，以CD45VS SSC设 门，考察CD33vs CD13、CD33vs CD7、CD7vs CD13、CD117vs CD34、CD117vs CD19和CD19vs CD34的分布情况，其分布如图1-9所示，不同血液肿瘤之间的分布在至少一个点图中差异显 著，因此可以快速地对多发性骨髓瘤(丽）、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性B淋巴细胞白血 病(B-ALL)、急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)、急性髓细胞白血病M3型(AML-M3)、急性髓细胞 白血病M5型(AML-M5)、边缘带淋巴瘤(MZL)、T大颗粒淋巴细胞白血病(T-LGL)和慢性B淋巴 细胞白血病(B-CLL)等进行有效分型，尤其是可以应用在初筛中进行分型。
【主权项】
1. 抗体(优选是单克隆抗体)组合物，其包括抗CD45抗体、抗CD 13抗体、抗CD33抗体和抗 CD7抗体，优选其由抗CD45抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体和抗CD7抗体组成。2. 权利要求1所述的抗体组合物，其中每种抗体被标记不同的荧光标记，优选每种抗体 被分别标记 FITC、PE、PerCP-cy5.5和APC。3. 抗体(优选是单克隆抗体)组合物，其包括抗CD45抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体和 抗⑶19抗体，优选其由抗⑶45抗体、抗⑶117抗体、抗⑶34抗体和抗⑶19抗体组成。4. 权利要求3所述的抗体组合物，其中每种抗体被标记不同的荧光标记，优选每种抗体 被分别标记 FITC、PE、PerCP-cy5.5和APC。5. 用于白血病和淋巴瘤分型的试剂盒，其包括第一容器和第二容器，其中，第一容器包 括权利要求1或2所述的抗体组合物，第二容器包括权利要求3或4所述的抗体组合物。6. 权利要求5所述的试剂盒，其中还包括红细胞裂解液(如，10 X红细胞裂解液)和/或 缓冲液(如，磷酸盐缓冲液)。7. 白血病和淋巴瘤分型的方法，其包括： (1) 处理骨髓或外周血样品，使得呈单个细胞悬液状态； (2) 将步骤（1)处理的样品等分，分别与权利要求1或2所述的抗体组合物和权利要求3 或4所述的抗体组合物混合入两根流式管，混匀后孵育； (3) 向步骤（2)孵育的两根流式管加入红细胞裂解液，混匀后孵育，离心，去上清并重 悬;和， (4) 四色流式细胞仪检测步骤(3)重悬的两根流式管，并计算结果。8. 权利要求7所述的方法，其中计算结果是计算抗以下细胞表面抗原的抗体对的荧光 结果：CD33vs CD13、CD33vs CD7、CD7vs CD13、CD117vs CD34、CD117vs CD19和CD19vs CD34〇9. 权利要求1或2所述的抗体组合物和权利要求3或4所述的抗体组合物联合在制备白 血病和淋巴瘤分型的试剂盒中的应用。10. 权利要求9所述的应用，其中，试剂盒是权利要求5或6所述的试剂盒;和/或，白血病 和淋巴瘤分型的方法是权利要求7或8所述的方法。
【专利摘要】本发明属于抗体医药技术领域，提供了两种抗体组合物，其包括抗CD45抗体、抗CD13抗体、抗CD33抗体和抗CD7抗体，或者包括抗CD45抗体、抗CD117抗体、抗CD34抗体和抗CD19抗体。另外，本发明提供了包括这两种抗体组合物的白血病和淋巴瘤分型试剂盒，可与流式细胞仪配套使用，对各类血液肿瘤进行分型。
【IPC分类】G01N33/574, G01N33/533
【公开号】CN105606797
【申请号】CN201610027214
【发明人】倪万茂
【申请人】浙江博真生物科技有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月15日