一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，包括以下步骤：步骤1：将浙贝母粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；步骤2：将萃取液离心分离后，得到上清液；步骤3：将上清液采用液相色谱法进行分析。本发明提供了一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，该方法操作简单，检测精度高。
【专利说明】
一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及实验室检测领域，特别是一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方 法。
【背景技术】
[0002] 2010年药典记录了提取浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法:取本品粉末(过四号 筛)约2g，精密称定，置烧瓶中，加浓氨试液4ml浸润1小时，精密加入三氯甲烷-甲醇(4:1)的 混合溶液40ml，称定重量，混匀，置80°C水浴中加热回流2小时，放冷，再称定重量，加上述混 合溶液补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液l〇ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇使溶解 并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液10iil、20ii 1，供试品溶液5~15yl，注人液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算贝母素甲、 贝母素乙的含量，即得。
[0003] 药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，该方法操作 简单，检测精度高。
[0005] 本发明提供的技术方案为:一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，包括以 下步骤：
[0006] 步骤1:将浙贝母粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液；
[0007] 步骤2:将萃取液离心分离后，得到上清液；
[0008] 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析；
[0009] 其中，液相色谱法的分析条件为：
[0010] a)仪器:双三元液相色谱仪
[0011] b)色谱柱规格:碳18色谱柱，3*100mm 3um
[0012] c)柱温:40°C
[0013] d)流速:0.5mL/min
[0014] e)流动相：乙腈-水-二乙胺，体积比70:30:0.03
[0015] f)检测波长:蒸发光散射检测器。
[0016] 在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的步骤1具体为：
[0017] S11:将浙贝母粉碎后，过筛；
[0018] S12:称取1重量份浙贝母粉，与1重量份娃藻土混合均勾待用；
[0019] S13:在预先放好过滤膜的萃取池中，混合均匀后加入适量的硅藻土至达到萃取池 的池口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液；
[0020] 萃取条件为：萃取溶剂为体积百分比75%乙醇；萃取温度80°C;静态萃取时间 3min;冲洗体积60 % ;静态循环次数2次。
[0021] 在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的萃取池的体积为 10ml 〇
[0022] 在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的静态萃取的压力为 1500psi〇
[0023] 在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的静态萃取的吹扫时 间为100s。
[0024] 在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，步骤2具体为:将萃取液在 15000r/min的条件下离心3min，取上清液。
[0025]在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的仪器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。
[0026] 在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的色谱柱为Thermo Syncronis C18〇
[0027]在上述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法中，所述的ASE萃取法所采用的 仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
[0028]本发明在采用上述技术方案后，其具有的有益效果为：
[0029]本发明的检测方法操作简单，精度与药典方法的精度一致，重复性好。
【附图说明】
[0030] 图1为本发明中贝母素甲的色谱分析有效性验证的直角坐标图；
[0031] 图2为本发明中贝母素乙的色谱分析有效性验证的直角坐标图；
[0032]图3为本发明的贝母素甲对照品、贝母素乙对照品的色谱图；
[0033]图4为本发明的萃取和测试方法得到色谱图。
【具体实施方式】
[0034]下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0035] 实施例1:
[0036]将浙贝母经粉碎机粉碎，过四号筛，约1 g，精密称定，与1 g娃藻土混合均勾，待用， 移入到预先放好过玻璃纤维滤膜的ASE? 10ml萃取池中再加入适量硅藻土，轻轻振摇使之 与池口在同一水平线上，拧紧萃取池上盖。萃取结束后，把萃取液转移于25ml容量瓶中，用 甲醇稀释至刻度，在15000r/min下离心3min，取上清液，进入LC测定。
[0037]萃取条件(见表1)为：
[0038]表1
[0040]分析方法为LC液相色谱法，液相色谱分析条件：
[0041 ] a)仪器:Thermo 双三元液相(U-3000)
[0042] b)色谱柱：Thermo Syncronis C18 3*1 00mm 3um，即碳 18色谱柱，长度 100mm，直径 3mm，粒径3微米；
[0043] c)柱温:40°C
[0044] d)流速:0.5mL/min
[0045] e)流动相：乙腈-水-二乙胺，体积比70:30:0.03
[0046] f)检测波长:蒸发光散射检测器。
[0047] 色谱分析有效性验证：
[0048]取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含贝母素 甲0.2mg、贝母素乙0.15mg的混合溶液，即得贝母素甲对照品、贝母素乙对照品。
[0049] 取贝母素甲对照品、贝母素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含贝母素 甲0.1791mg、贝母素乙0.1240mg的混合溶液，即得。然后分别精密吸取该溶液0.2yl、0.5yl、 0.8yl、lyl、1.5yl、2yl进入LC测定，并依照上述方法测定，结果详见表2-1、表2-2。附图1与 表2-1对应，附图2与表2-2对应，附图1及附图2的横坐标表示浓度，纵坐标表示峰面积。附图 3为贝母素甲对照品、贝母素乙对照品的采用上述的LC液相色谱法测定的色谱图。
[0050] 表2-1 (贝母素甲线性关系）
[0052]表2-2 (贝母素乙线性关系）
[0054] 1.1实施例1的萃取方法的重现性验证：
[0055] 取相同批号的样品（批号：150827) 1.0g，共4份，精密称定，按ASE提取方法提取供 试品溶液，进样量为3yL，以上述的色谱条件平行试验，测得样品中贝母素甲的含量见表3-1，RSD为2.54% ;测得样品中贝母素乙的含量见表3-2，RSD为2.12% ;试验表明ASE提取方法 重复性良好，结果详见表3-1、表3-2
[0060] 1.2实施例1的萃取方法的精确度测试
[0061] 采用实施例1的ASE萃取方法和药典的萃取方法对浙贝母进行萃取，浙贝母为4批， 批号分别为 1510111，151102,150827,150618;
[0062] 实施例1的ASE萃取方法对同一批次的浙贝母平行测试两次，分别为ASE1和ASE2表 不。
[0063]图4是样品150827按照本发明的ASE萃取方法和LC液相色谱法测试(ASE2)得到的 色谱图。
[0064]具体测试结果见下表4;
[0067]以上所述的仅为本发明的较佳实施例，凡在本发明的精神和原则范围内所作的任 何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:将浙贝母粉碎后采用ASE萃取法萃取得到萃取液； 步骤2:将萃取液离心分离后，得到上清液； 步骤3:将上清液采用液相色谱法进行分析； 其中，液相色谱法的分析条件为： a) 仪器:双三元液相色谱仪 b) 色谱柱规格:碳18色谱柱，3*100mm 3um (：)柱温:40°〇 d) 流速:O · 5mL/min e) 流动相：乙腈-水-二乙胺，体积比70:30:0.03 f) 检测波长:蒸发光散射检测器。2. 根据权利要求1所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，其特征在于，所述 的步骤1具体为： S11:将浙贝母粉碎后，过筛； S12:称取1重量份浙贝母粉，与1重量份硅藻土混合均匀待用； S13:在预先放好过滤膜的萃取池中，混合均匀后加入适量的硅藻土至达到萃取池的池 口；盖上萃取池的盖子进行静态萃取;萃取结束后得到萃取液； 萃取条件为：萃取溶剂为体积百分比75%乙醇；萃取温度80°C;静态萃取时间3min;冲 洗体积60 % ;静态循环次数2次。3. 根据权利要求2所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的测定方法，其特征在于，所述 的萃取池的体积为I Om 1。4. 根据权利要求2所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法，其特征在于，所述的静 态萃取的压力为1500psi。5. 根据权利要求2所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法，其特征在于，所述的静 态萃取的吹扫时间为100s。6. 根据权利要求1所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法，其特征在于，步骤2具体 为:将萃取液在15000r/min的条件下离心3min，取上清液。7. 根据权利要求1所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法，其特征在于，所述的仪 器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。8. 根据权利要求7所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法，其特征在于，所述的色 谱柱为Thermo Syncronis C18〇9. 根据权利要求1所述的浙贝母中贝母素甲、贝母素乙的方法，其特征在于，所述的ASE 萃取法所采用的仪器为ASE350快速溶剂萃取仪。
【文档编号】G01N30/02GK105911176SQ201610234905
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月15日
【发明人】陈学松, 欧妮, 陈翠玲, 钟水桥, 李仁乔
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所