本发明涉及一种白及种子成熟度评价的方法，属于白及种子成熟度评价
技术领域：
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背景技术：
：白及为兰科植物orchidaceae白及bletillastriata(thunb.)reichb.f.的干燥块茎，其味苦、甘、涩，性微寒，具有收敛止血、消肿生肌的功能；用于治疗咳血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂等。主产于陕西、四川、贵州、云南等地，在全国大部范围内均有栽培，生于海拔100-3200m的常绿阔叶林、栋树林或针叶林下，以及路边草丛或岩石缝中。白及用途广泛，随着白及生产扩大，以往白及带芽头块茎分株繁殖的方法繁殖系数低、对块茎积累的物质消耗大，且切割的创面易被微生物感染而腐败，不能适应规模化种植使用。白及的繁育的方式已经由块茎分株繁殖转变为种子直播或将种子作为外植体在培养基无菌萌发，要培育好的种苗进行药材繁育，种子是先决条件，如何选择质量好的种子是需要解决的问题。白及种子呈黄色粉末状，细小无胚乳，仅仅由种皮和胚构成，种皮由单层细胞组成，细胞器及原生质均已消失，为一层半透明的死细胞；胚呈椭圆形，未分化，为原胚阶段，因此种胚的好坏是白及种子萌发生长的关键因素。传统经验认为9～10为白及果期，这个时间白及蒴果已经成熟，通过研究，白及开花时间不同，蒴果形成的时间有差异，即使在9月仍然部分蒴果较小，内部种子还不成熟，有研究表明，蒴果胚龄在在20周时种子成熟。但在生产实际中不好对胚龄进行检测，因此要找出能快速检验种子成熟度的方法。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是：提供一种白及种子成熟度评价的方法，以解决上述现有技术中存在的问题。本发明采取的技术方案为：一种白及种子成熟度评价的方法，该方法包括以下步骤：步骤一：收集到的新鲜白及蒴果，筛选出完整、无畸形、无破裂、大小差异明显的蒴果；步骤二：观察不同外观形态蒴果内种子的有胚率及萌发率；步骤三：测定白及蒴果长宽及蒴果重量；步骤四：将蒴果长、宽、重三个指标进行k-均值聚类分析后，将白及蒴果分为三个等级；步骤五：采用相关性分析获得白及蒴果影响指标，通过影响指标对白及蒴果分级；步骤六：对分级的白及蒴果判断每次迭代是否满足结束要求：直到达到迭代次数达到1000或计算误差e，e≤0.001时，优化结束；否则返回步骤二；步骤七：优化过程结束后，保存模型的最优参数，并使用模型对数据集进行训练和预测。本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明的评价方法为生产上选择长≥29mm，重大于等于0.9g白及蒴果，蒴果内种子成熟度较高，具有更好的有胚率(达到98.38％)和萌芽率(达到98.44％)，筛选出的种子更具有科学性和合理性。具体实施方式下面结合具体的实施例对本发明进行进一步介绍。实施例1：一种白及种子成熟度评价的方法，该方法包括以下步骤：步骤一：收集到的新鲜白及蒴果，筛选出完整、无畸形、无破裂、大小差异明显的蒴果；步骤二：观察不同外观形态蒴果内种子的有胚率及萌发率；步骤三：测定白及蒴果长宽及蒴果重量；步骤四：将蒴果长、宽、重三个指标进行k-均值聚类分析后，将白及蒴果分为三个等级；步骤五：采用相关性分析获得白及蒴果影响指标，通过影响指标对白及蒴果分级；步骤六：对分级的白及蒴果判断每次迭代是否满足结束要求：直到达到迭代次数达到1000或计算误差e，e≤0.001时，优化结束；否则返回步骤二；步骤七：优化过程结束后，保存模型的最优参数，并使用模型对数据集进行训练和预测。为了说明本发明的有效果，进行如下实验：2018年9月从贵州镇远(东经108.48、北纬27.12、海拔：1067)收集到的新鲜白及蒴果，筛选出完整、无畸形、无破裂、大小差异明显的蒴果共681枚进行试验。蒴果长(mm)用0.01游标卡尺测量、蒴果重量(g)用千分之一天平测量。观察不同外观形态蒴果内种子的有胚率及萌发率，用有胚率及萌发率来表征种子成熟度，结合蒴果外观形态来进行筛选。种子有胚率：剥开蒴果，均匀铺洒种子在培养皿上，利用nikonsmz800显微镜镜检，统计计数，计算其有胚率，有胚率＝视野内有胚种子数/视野内种子数×100％；种子萌发率：无菌萌发条件：培养温度(24±1)℃、光照强度2200-2600lx、光照时间12h/d，按照种子内胚变绿且体积增大一倍为萌发；无菌萌发培养基：1/2ms培养基+0.1mg/lnaa+50g/l土豆泥；20d后利用nikonsmz800显微镜镜检萌发率，萌发率＝视野内萌发种子数/视野内总的种子数×100％；白及蒴果外观形态及蒴果重量的测定结果见表1。表1白及蒴果外观形态及重量长(mm)宽(mm)重(g)平均数28.929.270.84最大值45.6013.221.89最小值17.954.880.23极差27.658.341.66表2白及蒴果长、宽、重最终聚类中心聚类中心123长(mm)24.2829.2034.68宽(mm)8.779.349.81重(g)0.650.861.08将长、宽、重三个指标进行k-均值聚类分析后，将白及蒴果分为三个等级，结合表3.2相关性分析来看，不同等级的蒴果长度差异明显，容易测量区分，而蒴果宽差异较小，在生产实际上测量不容易，重量便于直接测量，于是生产上宜选择长和重两个指标来对白及蒴果进行分级，分级标准为：一级：长(≥35mm)、重(≥1.1g)，二级：长(29～35mm)、重(0.9～1.1g)，三级：长(25～29mm)、重(0.7～0.9g)，低于三等标准的蒴果或有畸形、残缺的蒴果为等外蒴果。通过这两个指标，可以快速准确的对白及蒴果进行分级。表3不同等级白及蒴果中种胚相关指标由表3可知，不同等级的蒴果的种子有胚率和种胚长、宽均存在差异，其中有胚率差异明显，一级蒴果和二级蒴果种子的有胚率明显高于三级蒴果，种胚的长、宽平均值一级蒴果＞二级蒴果＞三级蒴果，三个等级的蒴果内种胚的长、宽的最大值和最小值差异不明显，同一等级的蒴果内种胚大小不一致，这可能是由于单个蒴果内种子生长发育的不一致造成的，但可以推测体积大的蒴果内种子生长发育好于体积小的蒴果。表4不同等级白及蒴果种子萌发情况萌发率(％)萌发情况一级蒴果98.44.种胚膨大明显，颜色深绿，偶见带胚种子不萌发二级蒴果78.64种胚膨大明显，部分颜色深绿，有带胚种子不萌发三级蒴果19.44种胚膨大，颜色偏黄，较多带胚种子失活由表4可知，不同等级的蒴果的种子萌发率和生长状况差异明显，萌发率一级蒴果＞二级蒴果＞三级蒴果，三级蒴果明显低于前两级蒴果、等级越高的蒴果种子生长情况越好。生长发育较好的种子在培养基上更容易萌发，萌发率是种子成熟度的重要体现。在生产上选择长≥29mm，重大于等于0.9g白及蒴果，蒴果内种子成熟度较高。以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内，因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。当前第1页12