专利名称:一种制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法
技术领域：
本发明属于羊胎盘的利用技术领域：
，具体涉及利用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的制备方法。
背景技术：
羊胎盘素是指从羊胎盘中提取的多种活性物质的总称，包括多种蛋白质、必需氨基酸、核酸、荷尔蒙、胶原、免疫因子及钙铁锌等营养成分，具有补气养血、补精益肾、调节机体免疫力、延缓衰老、美白嫩肤、保持体型等多种保健功能。在临床上用于预防肝硬化、改善人体免疫力，治疗病毒性肝炎、白细胞减少症、重症肌无力等免疫性疾病以及恶性肿瘤等，也是具有神奇功效的化妆品及滋补品原料。
现有制备羊胎盘素的方法，如2010年3月3日公开的公开号为101658534A的“利用液氮低温排氧从羊胎盘中提取羊胎素的方法”专利，公开的方法是在粉碎羊胎盘的同时加入液氮，粉碎环境温度24°C 25°C;将羊胎盘浆进行酶解60分钟，温度40°C，然后用生理盐水提取、无机膜过滤、超高压灭菌。该方法的主要缺点是①未利用生产过程中产生的废渣、废液，不利于保护环境；②羊胎盘粉碎须在液氮下进行，条件苛刻，设备投入高，生产成本高；③由于未将羊胎盘中的天然肽类活性物，例如荷尔蒙、胶原、免疫因子分离就进行酶水解，而蛋白酶也水解上述活性物，因而该方法破坏了上述肽类活性物，生产的产品生物活性低该方法只生产出羊胎盘素一种产品，其余物质未得到充分利用，原料利用率不高。
三、
发明内容
本发明的目的是针对现有制备羊胎盘素的不足之处，提供一种用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法。该方法具有加工工艺简单、设备常见易得、操作步骤简单实用、资源综合利用率高、环保无污染等特点。
本发明的机理是冷冻的干燥羊胎盘中含有大量水溶性荷尔蒙、胶原、免疫因子、必需氨基酸、核酸、及钙铁锌等营养成分，能用水溶液进行提取；提取液中的大分子量胶原、免疫因子等稳定性差，容易变性析出；超滤是基于分子量差异进行分离的新技术，可分离分子量差异超过一定范围的溶质；水溶液中的大分子在高压下通过狭孔时，将被剪切、撞击等作用力碎裂成分子量较小且均匀的碎片，从而可稳定存在于水溶液中；提取胎盘素的残渣中尚存得大量组织蛋白质，可用蛋白酶专一水解成溶于水的胶原；含有胎盘营养物质的提取液以及含有胶原的水溶液经过真空浓缩，可分别制备出相应的浓缩液。
本发明的目的是这样实现的一种制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法以市售冻干羊胎盘为原料，先制备羊胎盘粉，后制备羊胎盘素粗提取液，再制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液。其具体方法步骤如下
(I)制备羊胎盘粉
以市售的冻干羊胎盘为原料，先将冻干羊胎盘置于带冷却夹套的粉碎机中，再向粉碎机的夹套中通入4 10°C的冷却水，在转速为1000 5000转/分的条件下进行粉碎5 15分钟。粉粹完成后，用40 80目的分样筛进行筛分，分别收集过筛的粉末和未过筛的颗粒。对于收集的过筛的粉末，用于下一步制备羊胎盘素粗提取液；对于未过筛的颗粒，返回粉碎机中，再进行粉碎。
(2)制备羊胎盘素粗提取液
第⑴步完成后，按照第⑴步收集的过40 80目分样筛粉末的质量(g)质量浓度为O. 05 O. 5%的NaCl溶液的体积(mL)比为1: 50 80的比例，将过筛粉末加入到NaCl溶液中，搅拌混合均匀后，再在4 8°C的温度下，进行搅拌提取4 5小时。提取完成后，将提取液泵入管式离心机中，在6000 10000转/分的转速下，进行离心分离，分别收集离心清液和离心沉淀。对于收集的离心清液，用于制备羊胎盘素；对于收集的离心沉淀，用于制备羊胎盘水解胶原浓缩液。
(3)制备羊胎盘素
第(2)步完成后，将第(2)步收集的离心清液泵入截留分子量为2000 IOOOODa的超滤机中，在O. 05 O. 2MPa下，进行超滤分离，直至离心清液体积减少至原体积的1/3 1/6时为止，分别收集超滤滤过液和超滤截留液。对于收集的超滤滤过液，可再利用；将收集的超滤截留液，泵入高压均质机中，在20 60MPa下进行高压均质，收集泵出液，SP制备出高压均质液；
再将收集的泵出液(即高压均质液)与所收集的超滤滤过液合并后，泵入脱色釜中，按照活性炭的质量(g)合并液的体积(HiL)比为1: 10 30的比例，在合并液中加入活性炭，在室温下进行搅拌脱色10 20分钟，再泵入真空抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集滤过液和滤渣。对于收集的滤渣，送到活 性炭再生工厂进行再生，可再利用；
然后将收集的滤过液，泵入反渗透器中，进行反渗透浓缩，至反渗透截留液中的可溶性固形物含量达到5 8%时为止,分别收集反渗透渗过液和反渗透截留液。对于收集的反渗透渗过液，可用于第(2)步再次提取羊胎盘素；对于收集的反渗透截留液，按照反渗透截留液I %透明质酸甘油百霉杀防腐剂的体积比为1: O. 05 O. 08 O. 08 0.1 O. 005 O. 01的比例，在反渗透截留液中加入透明质酸、甘油及百霉杀防腐剂，搅拌混合均匀后，泵入微孔滤器中，用O. 22 O. 45um的微孔滤膜进行微滤，用于除去微生物及不溶性杂质。微滤完成后,分别收集微滤滤过液和微滤截留物。对收集的微滤截留物,经处理达标后排放；对收集的微滤滤过液，即为制备出的羊胎盘素。
(4)制备羊胎盘水解胶原浓缩液
第(3)步完成后，按照第(2)步收集的离心沉淀的质量(g)纯净水的体积(mL)比为1: 3 8的比例，在所述的离心沉淀中加入纯净水，并泵入高速匀浆机中进行打浆后，用40 80目的分样筛进行筛分，分别收集过筛液和未过筛的渣(即羊胎盘的筋膜)。对于未过筛的渣，按照未过筛的渣的质量(g):纯净水洗涤剂的体积(mL)之比为1: 30的比例，用纯净水对未过筛的渣进行洗涤，分别收集洗涤液和洗涤渣。对最后收集的洗涤渣，经处理达标后排放；最后将过筛液与洗涤液合并，即制备出胎盘渣匀浆液。
然后将胎盘渣匀浆液泵入反应釜中，搅拌升温至50 60°C，并用氢氧化钠溶液调节其PH值为8 9，再按照泵入反应釜中的胎盘渣匀浆液的体积(mL)碱性蛋白酶的质量(g):中性蛋白酶的质量(g):酸性蛋白酶的质量(g)比为1: O. 02 O. 03 O. 02 O. 03 O. 02 O. 03的比例，向反应釜中依次分别加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶，并分别在50 60°C的恒温下搅拌水解40 60分钟。连续水解完成后，将水解液泵入管式离心机中，在3000 8000转/分的转速下，进行离心分离，分别收集离心清液和离心沉淀。对于收集的离心沉淀，经烘干后粉碎，可用作饲料添加剂；对于收集的离心清液，泵入脱色釜中，按照活性炭的质量(g):合并液的体积(mL)比为1: 10 30的比例，加入活性炭，并升温至80 100°C，进行搅拌脱色10 20分钟后，将脱色液泵入抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集滤过液和滤渣。对于收集的滤渣，送至活性炭再生工厂进行再生，可再利用。
最后将收集的滤过液泵入真空浓缩机中，在真空度为O. 04 O. 08MPa，温度为60 100°C的条件下，进行真空浓缩，直至浓缩液中可溶性固形物浓度达到20% 25%时为止，收集真空浓缩液。对于收集的真空浓缩液，泵入调配釜中，按照真空浓缩液甘油百霉杀防腐剂羧甲基纤维素钠的体积比为1: O. 08 O.1 O. 005 O. 01 O. 01 O. 03的比例，在调配釜中加入甘油、百霉杀防腐剂、羧甲基纤维素钠，搅拌混合均匀，就制备出短肽含量为15% 20%的羊胎盘水解胶原浓缩液。
本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果
1.本发明方法在生产过程中使用NaCl溶液提取、离心、酶水解、微孔过滤、超滤及真空浓缩等简单工艺，操作简便，设备简单，反应条件温和，节约能源，生产成本低，便于推广应用。
2.本发明方法在生产过程中实现了羊胎盘的综合利用。本发明在制备出羊胎盘素的同时，还得到了羊胎盘水解胶原浓缩液以及饲料添加剂等副产品，获得的产品多、收得率高，进一步降低了生产成本。
3.本发明方法在工艺过程中的物料均实现循环利用，无“三废”排放，副产物得到回收利用或处理达标后排放，这不但进一步降低了生产成本，又保护环境。
4.本发明生产工艺生产的羊胎盘素，保留了荷尔蒙、胶原、免疫因子等活性物质，可用于制备面膜，眼贴等皮肤用品，易于皮肤吸收，具有防皱、润肤、恢复皮肤靓丽的功能；生产的羊胎盘水解胶原浓缩液，可添加到保健品中，增强抵抗力和免疫力。
本发明可广泛用于制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液。采用本发明方法制备出的产品可广泛应用于化妆品、保健品等行业中。
四具体实施方式
下面结合具体实施方式
，进一步说明本发明。
实施例1
—种用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法，其具体步骤如下。
(I)制备羊胎盘粉
以市售的冻干羊胎盘为原料，先将冻干羊胎盘置于带冷却夹套的粉碎机中，再向粉碎机的夹套中通入4°C的冷却水，在转速为1000转/分的条件下进行粉碎5分钟。粉粹完成后，用40目的分样筛进行筛分，分别收集过筛的粉末和未过筛的颗粒。对于收集的过筛的粉末，用于下一步制备羊胎盘素粗提取液；对于未过筛的颗粒，返回粉碎机中，再进行粉碎。
(2)制备羊胎盘素粗提取液[0031]第(I)步完成后，按照第(I)步收集的过40目分样筛粉末的质量(g)质量浓度为O. 05%的NaCl溶液的体积(mL)比为1: 50的比例，将过筛粉末加入到NaCl溶液中，搅拌混合均匀后，再在4°C的温度下，进行搅拌提取4小时。提取完成后，将提取液泵入管式离心机中，在6000转/分的转速下，进行离心分离，分别收集离心清液和离心沉淀。对于收集的离心清液，用于制备羊胎盘素；对于收集的离心沉淀，用于制备羊胎盘水解胶原浓缩液。
(3)制备羊胎盘素
第(2)步完成后，将第(2)步收集的离心清液泵入截留分子量为2000Da的超滤机中，在O. 05MPa下，进行超滤分离，直至离心清液体积减少至原体积的1/3时为止，分别收集超滤滤过液和超滤截留液。对于收集的超滤滤过液，可再利用；将收集的超滤截留液，泵入高压均质机中，在20MPa下进行高压均质，收集泵出液，即制备出高压均质液；
再将收集的泵出液(即高压均质液)与所收集的超滤滤过液合并后，泵入脱色釜中，按照活性炭的质量(g):合并液的体积(HiL)比为1: 10的比例，在合并液中加入活性炭，在室温下进行搅拌脱色10分钟。然后将脱色液泵入真空抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集滤过液和滤渣。对于收集的滤渣，送到活性炭再生工厂进行再生，可再利用；
然后将收集的滤过液，泵入反渗透器中，进行反渗透浓缩，至反渗透截留液中可溶性固形物含量达到5%时为止,分别收集反渗透渗过液和反渗透截留液。对于收集的反渗透渗过液，可用于第(2)步再次提取羊胎盘素；对于收集的反渗透截留液，按照反渗透截留液1%透明质酸甘油百霉杀防腐剂的体积比为1: 0.05 : O. 08 O. 005的比例，在反渗透截留液中加入透明质酸、甘油及百霉杀防腐剂，搅拌混合均匀后，泵入微孔滤器中，用O. 22um的微孔滤膜进行微滤，用于除去微生物及不溶性杂质。微滤完成后，分别收集微滤滤过液和微滤截留物。对收集的微滤截留物，经处理达标后排放；对收集的微滤滤过液，即为制备出的羊胎盘素。
(4)制备羊胎盘水解胶原浓缩液
第(3)步完成后，按照第(2)步收集的离心沉淀的质量(g)纯净水的体积(mL)比为1: 3的比例，在离心沉淀中加入纯净水，并泵入高速匀浆机中进行打浆后，用40目的分样筛进行筛分，分别收集过筛液和未过筛的渣(即羊胎盘的筋膜)。对于未过筛的渣，按照未过筛的渣的质量(g):纯净水洗涤剂的体积(mL)之比为1: 30的比例，用纯净水对未过筛的渣进行洗涤，分别收集洗涤液和洗涤渣。对最后收集的洗涤渣，经处理达标后排放；最后将过筛液与洗涤液合并，即制备出胎盘渣匀浆液。
然后将胎盘渣匀浆液泵入反应釜中，搅拌升温至50°C，并用氢氧化钠溶液调节其pH值为8，再按照泵入反应釜中的胎盘渣匀浆液的体积(mL):碱性蛋白酶的质量(g):中性蛋白酶的质量(g):酸性蛋白酶的质量(g)比为1: 0.02 : O. 02 O. 02的比例，向反应釜中依次分别加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶，并分别在50°C的恒温下搅拌水解40分钟。连续水解完成后，将水解液泵入管式离心机中，在3000转/分的转速下，进行离心分离，分别收集离心清液和离心沉淀。对于收集的离心沉淀，经烘干后粉碎，可用作饲料添加剂；对于收集的离心清液，泵入脱色釜中，按照活性炭的质量(g)合并液的体积(mL)比为1: 10的比例，加入活性炭，并升温至80°C，进行搅拌脱色10分钟后，将脱色液泵入抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集滤过液和滤渣。对于收集的滤渣，送至活性炭再生工厂进行再生，可再利用。[0039]最后将收集的滤过液泵入真空浓缩机中，在真空度为O. 04MPa，温度为60°C的条件下，进行真空浓缩，直至浓缩液中可溶性固形物浓度达到20%时为止，分别收集真空浓缩液。对于收集的真空浓缩液，泵入调配釜中，按照真空浓缩液甘油百霉杀防腐剂羧甲基纤维素钠的体积比为1: 0.08 O. 005 0.01的比例，在调配釜中加入甘油、百霉杀防腐剂、羧甲基纤维素钠，搅拌混合均匀，就制备出短肽含量为15%的羊胎盘水解胶原浓缩液。
实施例2一种用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法，同实施例1，其中
第⑴步中，冷却水温度为8°C，粉碎时间10分钟，粉粹完成后，过60目的分样筛。
第⑵步中，第⑴步收集的过筛的粉末的质量(g) 0.2% NaCl溶液体积(mL)比为1: 60，提取温度6°C，提取时间4. 5小时。离心机转速为8000转/分。
第(3)步中，超滤膜的截留分子量为5000Da，超滤压力为O.1MPa，超滤至离心清液体积减少至原体积的1/5时为止，高压均质压力为40MPa。
活性炭的质量(g)合并液的体积(mL)比为1: 20，升温至90°C，搅拌脱色15分钟。
反渗透截留液中可溶性固形物含量为7%，反渗透截留液1%透明质酸甘油百霉杀防腐剂的体积比为I O. 06 O. 09 O. 008，微孔滤膜孔径为O. 45um。
第(4)步中，离心沉淀的质量(g)纯净水的体积(mL)比为1: 5，用60目分样筛进行筛分。
搅拌升温至55°C，pH为8.5，泵入反应釜的胎盘渣匀浆液的体积(mL)碱性蛋白酶的质量(g)中性蛋白酶的质量(g)酸性蛋白酶的质量(g)的比为I O. 025 O. 025 O. 025，在55°C的恒温下搅拌水解50分钟，离心机转速为5000转/分。活性炭的质量(g):离心清液的体积(mL)比为1: 20，升温至90°C，脱色15分钟。
进行真空浓缩的真空度为0.06MPa，温度为80°C，至浓缩液中可溶性固形物浓度达到22%时为止；真空浓缩液甘油百霉杀防腐剂羧甲基纤维素钠的体积比为I 0.09 O. 008 O. 02，制备出的羊胎盘水解胶原浓缩液中短肽含量为17%。
实施例3
一种用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘肽的方法，同实施例1，其中
第⑴步中，冷却水温度为10°C，粉碎时间15分钟，粉粹完成后，过80目的分样筛。
第⑵步中，过筛的粉末的质量(g) 0.5% NaCl溶液体积(mL)比为1: 80，提取温度8°C，提取时间5小时，离心机转速为10000转/分。
第(3)步中，超滤膜的截留分子量为lOOOODa，超滤压力为O. 2MPa，超滤至离心清液体积减少至原体积的1/6时为止，高压均质压力为60MPa。
活性炭的质量(g)合并液的体积(mL)比为1: 30，升温至100°C，搅拌脱色20分钟。
反渗透截留液中可溶性固形物含量为8%，反渗透截留液1%透明质酸甘油百霉杀防腐剂的体积比为1: 0.08 : 0.1 : O. 01，微孔滤膜孔径为O. 45um。
第(4)步中，离心沉淀的质量(g)纯净水的体积(mL)比为1: 8，用80目分样筛进行筛分。
搅拌升温至60°C，pH为9，泵入反应釜的胎盘渣匀浆液的体积(mL):碱性蛋白酶的质量(g):中性蛋白酶的质量(g):酸性蛋白酶的质量(g)的比为I 0.03 0.03 O. 03，在60°C的恒温下搅拌水解60分钟。离心机转速为8000转/分，活性炭的质量(g):离心清液的体积(mL)比为1: 30，升温至100°C，脱色20分钟。
进行真空浓缩的真空度为O.OSMPa，温度为100°C，至浓缩液中可溶性固形物浓度达到25%时为止；真空浓缩液甘油百霉杀防腐剂羧甲基纤维素钠的体积比为I O.1 0.01 O. 03， 制备出的羊胎盘水解胶原浓缩液中短肽含量为20%。
权利要求
1.一种用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法，其特征在于所述方法的具体步骤如下 (1)制备羊胎盘粉 以市售的冻干羊胎盘为原料，先将冻干羊胎盘置于带冷却夹套的粉碎机中，再向粉碎机的夹套中通入4 10°C的冷却水，在转速为1000 5000转/分的条件下进行粉碎5 15分钟，粉粹完成后，用40 80目的分样筛进行筛分，分别收集过筛的粉末和未过筛的颗粒; (2)制备羊胎盘素粗提取液 第(I)步完成后，按照第(I)步收集的过40 80目分样筛粉末的质量质量浓度为0.05 0. 5%的NaCl溶液的体积比为Ig : 50 80mL的比例，将过筛粉末加入到NaCl溶液中，搅拌混合均匀后，再在4 8°C的温度下，进行搅拌提取4 5小时，提取完成后，将提取液泵入管式离心机中，在6000 10000转/分的转速下，进行离心分离，分别收集离心清液和离心沉淀； (3)制备羊胎盘素 第(2)步完成后，将第(2)步收集的离心清液泵入截留分子量为2000 IOOOODa的超滤机中，在0. 05 0. 2MPa下，进行超滤分离，直至离心清液体积减少至原体积的1/3 1/6时为止，分别收集超滤滤过液和超滤截留液，将收集的超滤截留液，泵入高压均质机中，在20 60MPa下进行高压均质，收集泵出液； 再将收集的泵出液，即高压均质液，与第(3)步收集的超滤滤过液合并后，泵入脱色釜中，按照活性炭的质量合并液的体积比为Ig : 10 30mL的比例，在合并液中加入活性炭，在室温下进行搅拌脱色10 20分钟，然后将脱色液泵入真空抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集滤过液和滤渣； 然后将收集的滤过液泵入反渗透器中，进行反渗透浓缩，至反渗透截留液中可溶性固形物含量达到5 8%时为止,分别收集反渗透渗过液和反渗透截留液,对于收集的反渗透截留液，按照反渗透截留液质量浓度为1%的透明质酸甘油百霉杀防腐剂的体积比为1: 0.05 0.08 0.08 0.1 0. 005 0. 01的比例，在反渗透截留液中加入透明质酸、甘油及百霉杀防腐剂，搅拌混合均匀后，泵入微孔滤器中，用0. 22 0. 45um的微孔滤膜进行微滤，微滤完成后，分别收集微滤滤过液和微滤截留物； (4)制备羊胎盘水解胶原浓缩液 第(3)步完成后，按照第(2)步收集的离心沉淀的质量纯净水的体积比为Ig : 3 8mL的比例，在离心沉淀中加入纯净水，并泵入高速匀浆机中进行打浆后，用40 80目的分样筛进行筛分，分别收集过筛液和未过筛的渣，对于未过筛的渣，按照未过筛的渣的质量纯净水的体积比为Ig 30mL的比例，用纯净水对未过筛的渣进行洗涤，分别收集洗涤液和洗涤渣，最后将过筛液与洗涤液合并，即制备出胎盘渣匀浆液； 然后将胎盘渣匀浆液泵入反应釜中，搅拌升温至50 60°C，并用氢氧化钠溶液调节其pH值为8 9，再按照泵入反应釜中胎盘渣匀浆液的体积碱性蛋白酶的质量中性蛋白酶的质量酸性蛋白酶的质量比为ImL 0. 02 0. 03g 0. 02 0. 03g 0. 02 0.03g的比例，向反应釜中依次分别加入碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶，并分别在50 60°C的恒温下搅拌水解40 60分钟，连续水解完成后，将水解液泵入管式离心机中，在3000 8000转/分的转速下，进行离心分离，分别收集离心清液和下层沉淀，对于收集的离心清液，泵入脱色釜中，按照活性炭的质量合并液的体积比为Ig : 10 30mL的比例，加入活性炭，并升温至80 100°C，进行搅拌脱色10 20分钟后，将脱色液泵入抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集滤过液和滤渣 ； 最后将收集的滤过液泵入真空浓缩机中，在真空度为0. 04 0. 08MPa，温度为60 100°C的条件下，进行真空浓缩，直至浓缩液中可溶性固形物浓度达到20% 25%时为止，收集真空浓缩液，对于收集的真空浓缩液，泵入调配釜中，按照真空浓缩液甘油百霉杀防腐剂羧甲基纤维素钠的体积比为1: 0.08 0.1 0.005 0.01 0.01 0.03的比例，在调配釜中加入甘油、百霉杀防腐剂、羧甲基纤维素钠，搅拌混合均匀，就制备出短肽含量为15% 20%的羊胎盘水解胶原浓缩液。
专利摘要
一种用羊胎盘制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液的方法，属于羊胎盘的利用技术领域：
。本发明以市售冻干羊胎盘为原料，先制备羊胎盘粉，后制备羊胎盘素粗提取液，再制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液产品。本发明具有方法简单，操作简便，设备简单，反应条件温和，节约能源；本发明方法在制备出羊胎盘素的同时，还制得羊胎盘水解胶原浓缩液及饲料添加剂等多种产品，实现了羊胎盘的综合利用；在生产过程中充分利用物质资源，无“三废”排放，有利于环保；生产成本低，便于推广应用。本发明可广泛用于制备羊胎盘素和羊胎盘水解胶原浓缩液，采用本发明制备出的产品可广泛应用于化妆品、保健品等行业中。
文档编号C12P21/06GKCN102488713 B发布类型授权 专利申请号CN 201110438853
公开日2013年4月3日 申请日期2011年12月26日
发明者徐焕焕, 周小华, 王颖利, 周兴, 王丹, 王永红 申请人:重庆大学导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan专利引用 (5),