一种食品中过氧化氢残留快速检测试纸的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种快速、灵敏、便捷的检测食品中过氧化氢残留的试纸，属于食品安全检测领域。
【背景技术】
[0002]过氧化氢(Hydrogen peroxide)分子式为H202,分子量34.01,其水溶液俗称双氧水(D1xowater)。现在社会经济发展越来越快,人们越来越关注身体健康和食品安全,其中关于过氧化氢的残留危害日渐引起人们的注意，现在国内已经有不少关于食用含有过量过氧化氢食品中毒事件的报道，而从20世纪80年代起国内外很多研究表明双氧水被发现有致癌性，同时与多种活性氧所致疾病有密切关系。我国卫生部于2011年6月20日正式实施了 GB2760-2011《食品添加剂使用标准》，把其中在食品加工过程中曾广泛使用的过氧化氢踢出食品添加剂的使用范围。国家质检总局2011年第156号公告明确提出，食品生产企业禁止使用过氧化氢。
[0003]食品中过氧化氢残留的传统检测方法大体可分为化学分析方法和仪器分析方法。对于高浓度的样品，一般采用化学滴定分析法，主要有高锰酸钾法、碘量法和硫酸铈法等；对于低浓度的样品，常用的仪器分析方法有高效液相色谱法、紫外分光光度法、流动注射-分光光度法等。尽管检测方法如此之多，过氧化氢在食品中的滥用现象仍然得不到有效控制，部分食品加工厂为了食品增白，往往采用高浓度的工业级的双氧水来处理食品，如:鱼翅、鱼干、开心果、虾米、椰果、发黑的鸡、鸭、猪肉表面的漂白和护色，以提高产品的外观，一些不法商贩甚至将已经发霉变质的食品经过氧化氢溶液浸泡漂白后重新出售。在国内进行的食品质量检验报告中表明，在部分奶制品、豆类加工制品、盐水鸡、泡椒凤爪等食品中均有超量的过氧化氢残留；在香港特区的鱼翅中也检测到了高达1.5%的过氧化氢。究其原因，在于这些传统方法耗时稍长，并且成本较高，不适于在基层及现场检测中普及使用，因此食品中过氧化氢残留的快速、灵敏检测是我国食品工业发展和食品安全迫切需要解决的关键技术难题。
[0004]自20世纪初以来，一项重大的革命是把纸应用于分析实验中，1952年Martin和Synge因为发明纸色谱法被授予诺贝尔奖。纸成为了一个非常令人关注的平台，并且具有独特的性能，包括:制造和使用成本低廉、具有生物降解性和生物相容性、易涂层印迹、多孔纤维结构、凭借毛细管力无需其他动力、通常为白色可提供比色法和荧光法检测的最佳平台。目前专利200920139941.8公布了用碘化钾-淀粉法研制的过氧化氢残留快速检测试纸，但试纸响应时间长，而且检测结果如不立即观察，受空气氧化作用等影响，反应物颜色很快发生变化，不能对结果进行正确判断。也有专利200610011568.9公布了用酶促显色反应原理研制出过氧化氢残留快速检测试纸，但该试纸制作周期长，有效期短，不利于试纸做为商品的流通与应用。因此，必须寻找一种敏感性好、响应时间短、生产周期短、具有可观的稳定性和保存期、拥有很强的市场竞争力的技术，用来快速检测食品中过氧化氢的残留量。
【发明内容】
[0005]本发明公开了一种快速、灵敏、便捷的检测食品中过氧化氢残留的试纸，可以方便、快捷地对市场销售的各种食品中过氧化氢残留量进行测定，在3s中读取半定量检测结果O
[0006]本发明的组成:包括纸基和显色纸片两部分，所述的显色纸片先经过反应液A的浸泡，浸泡时间为10-20s，于温度45-50°C、真空度10-1lOPa的环境下烘干45-50min，然后再通过反应液B的浸泡，浸泡时间为10-20s，于温度45-50°C、真空度10-1lOPa的环境烘干25-30min ;所述的显色纸片和所述的基片固定连接。
[0007]本发明的的制备步骤:
[0008](I)反应液A液的配制:以pH值为5.0的柠檬酸缓冲液为溶剂，以0.4-0.6g/L的辣根过氧化物酶(HRP)为溶质，添加酶稳定剂聚乙烯吡咯烷酮5-10g/L ；
[0009](2)滤纸的裁剪:用裁纸器把3mm层析滤纸(以下简称滤纸)裁剪成1cmX 15cm的矩形纸片，便于后续浸液和烘干；
[0010](3)反应液A液的浸泡:把配置好的A液倒入专用玻璃皿中,用镊子夹住裁剪好的滤纸在A液中浸泡10-20s，用夹子挂在干燥箱板上；
[0011](4)烘干:为防止空气中的氧分子干扰使试纸失去使用效果，将完成浸液的滤纸放入真空干燥箱内，达到真空度lOO-llOPa，温度45-50°C，烘干时间45_50min。
[0012](5)反应液B液的配制:以无水乙醇为溶剂，1.0-2.0g/L的3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺(TMB)为溶质和0.1% - 3%的表面活性剂S20 (TWEEN80)混合；
[0013](6)反应液B液的浸泡:把配置好的B液倒入专用玻璃皿中,用镊子夹住裁剪好的滤纸在B液中浸泡10-20s，用夹子挂在干燥箱板上；
[0014](7)烘干:将完成浸液的滤纸放入真空干燥箱内，达到真空度lOO-llOPa，温度45-50°C，烘干时间 25-30min ；
[0015](8)显色纸片的贮藏:干燥好的滤纸即为显色纸片，将其裁剪成IcmX 15cm的显色条，每张可裁剪为10条，封在自封袋内，放入盛有干燥剂的干燥器中留存待检；
[0016](9)纸基的制作:用裁纸器把PP合成纸裁剪成7cmX 15cm的矩形纸片，便于后续纸基和显色片的黏合和试纸条的切割。
[0017](10)纸基和显色片的黏合:将裁剪好的IcmX 15cm的显色条用粘合剂黏合在7cmX 15cm的纸基片的一端,成为试纸片；
[0018](11)试纸条的切割:用切纸机将黏合好的试纸片均匀切割为0.55cmX7cm的试纸条;
[0019](12)试纸条的贮藏:密封在4_20°C干燥环境内贮存，不得受到阳光直射。
[0020]本发明的适用范围:食品中过氧化氢残留的半定量快速检测；检测范围:0-50mg/L ;检测原理:在过氧化氢存在条件下，由辣根过氧化物酶、乙二胺四乙酸二钠配制的A液，能催化由四甲基联苯胺配制的B液生成淡蓝色物质，其生成物质颜色的深浅与过氧化氢的浓度呈正相关。
[0021]本发明的样品处理:液体样品可直接检测；固体样品应将其粉碎并与同等质量的蒸馏水混合，浸泡5min后，搅拌均匀即可对液体进行检测。
[0022]本发明的操作方法:取适量的样品于洁净的干燥容器，以浸没试纸的显色片区域为标准，浸没后立即取出，将显色片朝上水平放置，可在3s后进行半定量读数。
[0023]本发明的结果判定:将试纸的颜色与标准比色卡进行比较，与比色卡颜色相同的色阶对应的数值即为本样品的检测值，如试纸的颜色在两个色阶之间即取两者的中间值。
[0024]本发明的特点:仅由纸基和显色纸片两部分组成，结构和操作都很简单；以3_层析滤纸为载体，使试纸能够在3s内对过氧化氢残留进行迅速的半定量检测；选择最优的制作工艺，极大缩短了试纸的生产周期；加入酶保护